黄芪总皂苷的制备方法 【技术领域】
本发明属医药技术领域，具体涉及一种以中药材黄芪为原料制备黄芪总皂苷的方法。背景技术
黄芪(Radix Astragali)是豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch)Bge.Var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch)Bge.的干燥根，为常用的补益药，味甘，性微温，传统医学认为其具有补气固表、利尿托毒、敛疮生肌之功效，药用历史悠久。现代研究表明，黄芪具有增强免疫、代谢、降压及利尿作用，其中黄芪皂苷，尤其是黄芪甲苷是其主要生理活性成分。目前，黄芪皂苷的制备方法主要有水提醇沉法，醇溶液用于分离皂苷，采用这种方法，黄芪皂苷损失极大，得率低，生产成本很高；也可以用醇类有机溶剂提取，浓缩后，过大孔吸附树脂柱，以水和不同浓度的醇溶液梯度洗脱，采用这种方法，操作步骤复杂，杂质含量高，黄芪皂苷的颜色深，纯度较低。发明内容
本发明的目的是提供一种自动化程度高、操作简便、产率高、无污染的黄芪总皂苷制备新方法。
本发明提出的黄芪总皂苷的制备方法，以中药材黄芪为原料，包括提取、脱糖、脱色、纯化诸步骤，具体工艺如下：将黄芪根粉碎，在常压回流提取装置中，用水热回流提取二次以上(例如第一次，加6～8倍重量的水，回流提取1小时以上，第二次以后，各加4～6倍重量的水，每次回流提取30分钟以上)；合并各部分的水提液，过滤，不需要进行任何其他处理，清液直接加入大孔吸附树脂柱上，以10倍以上体积的去离子蒸馏水洗脱糖类部分，再以5倍以上体积的0.05～0.5％的碱性水溶液进行洗脱，以5倍以上体积的10～40％的酒精洗脱进行脱色；再以70～90％的酒精洗脱黄芪皂苷，洗脱液浓缩到小体积，离心得到沉淀A部分，为高纯度的黄芪甲苷；向母液中加入酒精至酒精浓度为70～90％，离心，分得上清夜，浓缩干燥后得到B部分；A部分和B部分混合后得到黄芪总皂苷。
上述方法中，采用的大孔吸附树脂柱可以为多种，例如AB-8、D101、ZTC-1、DidaionHP20大孔树脂柱。得到的A部分是高纯度的黄芪甲苷，其总皂苷含量为90～100％，黄芪甲苷含量为85～100％。A部分利B部分地混合物的总皂苷含量为80～98％，黄芪甲苷含量为50～80％。
为了更好的理解本发明，下面对本发明的原理说明如下：
大孔吸附树脂是20世纪60年代发展起来的一类有机高聚物吸附剂，具有良好的吸附性能，近十余年来逐渐被应用于中草药化学成分的分离和中药新药的开发研制。大孔吸附树脂是一类以吸附为特点，对有机物有浓缩分离作用的高分子聚合物。在水溶液中，大孔吸附树脂对有机物具有良好的吸附选择性，可以固相萃取的方法，在吸附黄芪皂苷的同时将糖类成分去除。大孔吸附树脂的理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶剂，对有机物的选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物的影响。一般而言，酸性化合物在碱性溶液中被解吸附，碱性化合物在酸性溶液中被解吸附。黄芪皂苷为中性化合物，而植物提取物中的色素成分多为酸性化合物。因此，本发明采用稀碱溶液对大孔吸附树脂柱洗脱，可最大限度的将色素杂质洗脱，而且黄芪皂苷不受影响，并且了提高产品的纯度。大孔吸附树脂的吸附量一般与上样溶液浓度成反比，通常以较低浓度进行吸附较为有利。本发明采取水提液不经浓缩处理，直接上大孔吸附树脂柱的方法，使黄芪皂苷最大限度的被吸附在树脂柱上，极大的提高了黄芪皂苷的转移率和产品得率。黄芪皂苷在大孔吸附树脂柱的70～90％酒精洗脱部位，浓缩后，黄芪甲苷由于在低浓度醇溶液中溶解度较小而析出。本发明经过离心得到高纯度的黄芪甲苷(A部分)，含量达到85～100％，由于离心后的母液中含有少量黄芪皂苷和一些醇不溶性成分，本发明采用醇沉法对母液进行处理，可最大限度的减少黄芪皂苷的损失，进一步提高产品得率。
以本发明提供的方法对五批黄芪进行了中试生产，测定了药材甲苷含量、总皂苷得率、总皂苷含量、黄芪甲苷含量。其中，黄芪甲苷的含量应用HPLC-ELSD检测法测定，药材样品按国家药典2000版规定的方法进行处理，测定药材中甲甙含量；产品用甲醇溶解超滤后作为测试样品，测定产品中的甲苷含量。总皂苷的含量以黄芪甲苷做标准品，选用香草醛-高氯酸发色体系，测定波长560nm，分别测定不同浓度的标准品的吸收度，绘制标准曲线。用甲醇溶解制备的黄芪总皂苷产品，测定其吸收度，由标准曲线得到甲苷含量，再计算出总皂苷含量。结果如表1所示。
表1黄芪总皂苷含量及甲苷含量投料量(Kg)药材甲苷含 量(％) 总皂苷产 量(g) 得率(％) 总皂苷含 量(％)甲苷含量 (％) 10 0.0583 8.637 0.08637 84.78 69.02 10 0.0932 19.036 0.19036 87.45 73.66 10 0.0932 19.263 0.19263 86.97 72.73 30 0.0583 26.362 0.08787 85.67 70.47 30 0.0932 45.759 1.52530 88.82 74.58
以上的所有产品颜色均为白色至淡黄色，其中生产的沉淀A部分黄芪甲苷的含量以HPLC-ELSD检测，都在95％以上。
本发明方法制备的黄芪甲苷和黄芪总苷颜色浅、纯度高，制备方法具有得率高、生产成本低、工艺简便规范的特点。
经临床应用证明，由本发明方法得到的A部分以及A部分和B部分的混合物具有降压、抗炎、稳定红细胞膜、提高血浆cAMP含量、促进小鼠再生肝DNA合成和增强免疫功能的作用。具体实施方式
下面结合实施例来进一步说明本发明的内容：
实施例1：
黄芪根10kg粉碎后，在加热回流提取罐中用水回流提取三次。合并提取液，加入到AB-8大孔吸附树脂柱上，以100升的去离子蒸馏水洗脱糖类，再以50升0.1％的氢氧化钠水溶液进行洗脱，继以50升20％的酒精洗脱进行脱色。再以25升75％的酒精洗脱黄芪皂苷，洗脱液浓缩到小体积，离心得到沉淀A部分5.435克。向母液中加入酒精至酒精浓度为70％，离心，分得上清夜，浓缩干燥后得到B部分。A部分和B部分混合后得到黄芪总皂苷8.637克，得率0.08637％。
实施例2：
黄芪根10kg粉碎后，在加热回流提取罐中用水回流提取三次。合并提取液，加入到D101大孔吸附树脂柱上，以90升的去离子蒸馏水洗脱糖类，再以50升0.1％的氢氧化钾水溶液进行洗脱，继以50升20％的酒精洗脱进行脱色。再以25升80％的酒精洗脱黄芪皂苷，洗脱液浓缩到小体积，离心得到沉淀A部分5.754克。向母液中加入酒精至酒精浓度为70％，离心，分得上清夜，浓缩干燥后得到B部分，A部分和B部分混合后得到黄芪总皂苷9.036克，得率0.09036％。
实施例3：
黄芪根10kg粉碎后，在加热回流提取罐中用水回流提2次。合并提取液，加入到ZTC-1大孔吸附树脂柱上，以110升的去离子蒸馏水洗脱糖类，再以50升0.1％的氢氧化钠水溶液进行洗脱，继以50升20％的酒精洗脱进行脱色。再以25升80％的酒精洗脱黄芪皂苷，洗脱液浓缩到小体积，离心得到沉淀A部分5.872克。向母液中加入酒精至酒精浓度为80％，离心，分得上清夜，浓缩干燥后得到B部分，A部分和B部分混合后得到黄芪总皂苷9.263克，得率0.09263％。
实施例4：
黄芪根30kg粉碎后，在加热回流提取罐中用水回流提取三次。合并提取液，加入到AB-8大孔吸附树脂柱上，以150升的去离子蒸馏水洗脱糖类，再以100升0.1％的氢氧化钠水溶液进行洗脱，继以50升20％的酒精洗脱进行脱色。再以50升90％的酒精洗脱黄芪皂苷，洗脱液浓缩到小体积，离心得到沉淀A部分15.872克。向母液中加入酒精至酒精浓度为80％，离心，分得上清夜，浓缩干燥后得到B部分，A部分和B部分混合后得到黄芪总皂苷27.895克，得率0.09238％。