用作IGE抑制剂的苯基嘧啶取代的胺.pdf

本发明公开可被苯基－取代的嘧啶、苯基以及第三种取代基取代的胺以及该胺作为药物的用途。

1.  下式化合物：

其中：
R₁为卤素或卤代(C_1-4)烷基，
R₂为氢、卤素或卤代(C_1-4)烷基，
R₃为卤素或卤代(C_1-4)烷基，
R₄为氢、(C_1-8)烷基、羟基(C_1-6)烷基或下式基团：
-CO-R₅，
-CO-(CH₂)_m-OR₆，
-CO-CO-R₇，
-CO-CO-OR₈，
-CO-N(R₉R₁₀)，
-CO-(CH₂)_n-CO-R₁₁，
-CO-(CHR₁₅)-O-(CH₂)_o-CO-R₁₁，
-CO-(CH₂)_p-O-(CH₂)_q-O-(CH₂)_r-R₁₆，
-CO-O-(CH₂)_s-O-CO-R₁₇，
-CO-O-(CH₂)_t-N(R₁₈R₁₉)，
-CO-O-(CH₂)_u-NH-CO-CH(NH₂)-R₂₀，或者
-CO-O-(CH₂)_w-NH-CO-R₁₇，其中
R₅为氢、(C_1-8)烷基、(C_3-8)环烷基、氨基、(C_1-4)烷基氨基、二(C_1-4)烷基氨基、芳基或具有1-4个选自N、O或S的杂原子的5-或6-元杂环环系的杂环基，
R₆为氢、(C_1-4)烷基、(C_3-8)环烷基、芳基、被具有1-4个选自N、O或S的杂原子的5-或6-元杂环环系的杂环基取代的(C_1-4)烷基、氨基(C_1-6)烷基、(C_1-4)烷基氨基(C_1-6)烷基、二(C_1-4)烷基氨基(C_1-6)烷基、羟基(C_1-6)烷基、羟基(C_1-4)烷基氨基(C_1-6)烷基或氨基酸残基，如-CH₂-CH(NH₂)-COOH，
R₇和R₈互相独立为(C_1-4)烷基、(C_3-8)环烷基、芳基或具有1-4个选自N、O或S的杂原子的5-或6-元杂环环系的杂环基，
R₉和R₁₀互相独立为氢或(C_1-4)烷基或
R₉和R₁₀之一为氢且另一个为(C_3-8)环烷基、(C_1-4)烷基、芳基或杂环基，
R₁₁为(C_1-4)烷基、-OR₁₂、-NR₁₃R₁₄、氨基酸、它们的(C_1-4)烷基酯或它们的二(C_1-4)烷基酯，
R₁₂为氢或(C_1-4)烷基，
R₁₃和R₁₄互相独立为氢、(C_1-4)烷基、氨基(C_1-6)烷基、(C_1-4)烷基氨基(C_1-6)烷基、二(C_1-4)烷基氨基(C_1-6)烷基，
R₁₅为氢或(C_1-4)烷基，
R₁₆为氢、(C_1-4)烷基、羧基或羧酸酯，
R₁₇为氨基(C_1-4)烷基、(C_1-4)烷基氨基(C_1-4)烷基或二(C_1-4)烷基氨基(C_1-4)烷基，
R₁₈为氢或(C_1-4)烷基，
R₁₉为羟基(C_1-4)烷基，
R₂₀为(C_1-4)烷基或羟基(C_1-4)烷基，
m为0-4，
n为2-8，
o为0-4，
p为0-4，
q为1-8，
r为0-4，
s为1-4，
t为1-4，
u为1-6，且
w为1-6。

2.  权利要求1的化合物，其中
-R₁为氯或三氟甲基，
-R₂为氢或三氟甲基，
-R₃为氯、氟或三氟甲基，
-R₄为氢；(C_1-4)烷基，如甲基；羟基(C_1-4)烷基，如羟基乙基；或下式基团：
-CO-R₅，
-CO-(CH₂)_m-OR₆，
-CO-CO-R₇，
-CO-CO-OR₈，
-CO-N(R₉R₁₀)，
-CO-(CH₂)_n-CO-R₁₁，
-CO-(CHR₁₅)-O-(CH₂)_o-CO-R₁₁，
-CO-(CH₂)_p-O-(CH₂)_q-O-(CH₂)_r-R₁₆，
-CO-O-(CH₂)_s-O-CO-R₁₇，
-CO-O-(CH₂)_t-N(R₁₈R₁₉)，
-CO-O-(CH₂)_u-NH-CO-CH(NH₂)-R₂₀，或
-CO-O-(CH₂)_w-NH-CO-R₁₇，其中
R₅为氢、(C_1-4)烷基、(C_3-6)环烷基、二甲基氨基、苯基或为具有一个O杂原子的6-元杂环环系的杂环基，如四氢吡喃基，
R₆为氢、(C_1-4)烷基、被为具有1或2个选自N或O的杂原子的5或6元杂环环系的杂环基取代的(C_1-2)烷基，例如包括未取代的吡咯烷、吗啉和哌嗪以及被如(C_1-2)烷基或(C_1-2)羟基烷基取代的哌嗪；氨基(C_1-4)烷基、(C_1-2)烷基氨基(C_1-4)烷基、二(C_1-2)烷基氨基(C_1-4)烷基、羟基(C_1-3)烷基、羟基(C_1-2)烷基氨基(C_1-2)烷基或氨基酸残基，如-CH₂-CH(NH₂)-COOH，
R₇和R₈互相独立为(C_1-2)烷基或苯基，
R₉和R₁₀互相独立为氢或(C_1-2)烷基，
R₁₁为(C_1-2)烷基、-OR₁₂、-NR₁₃R₁₄、氨基酸、它们的(C_1-2)烷基酯或它们的二(C_1-2)烷基酯，优选选自下列的氨基酸：丙氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸和赖氨酸，其中连接是通过α-氨基基团进行，或者在为如赖氨酸的情况下，则通过∈-氨基基团进行，
R₁₂为氢或(C_1-2)烷基，
R₁₃和R₁₄互相独立为氢、(C_1-2)烷基、氨基(C_1-4)烷基、(C_1-2)烷基氨基(C_1-4)烷基、二(C_1-2)烷基氨基(C_1-4)烷基，
R₁₅为氢或(C_1-2)烷基，
R₁₆为氢、(C_1-2)烷基、羧基或羧酸酯，
R₁₇为氨基(C_1-2)烷基，
R₁₈为氢或(C_1-2)烷基，
R₁₉为羟基(C_1-2)烷基，
R₂₀为(C_1-2)烷基或羟基(C_1-2)烷基，
m为0或1，
n为2-4，
o为0或1，
p为0-2，
q为2-5，
r为0-2，
s为2，
t为2，
u为1-3，且
w为1-3。

3.  为式I化合物的权利要求1或2的化合物，其中
R₁为氯，
R₂为氢，
R₃为三氟甲基，且
R₄为氢。

4.  为式I化合物的权利要求1或2的化合物，其中
R₁为氯，
R₂为氢，
R₃为三氟甲基，且
R₄为式-CO-O-(CH₂)₂-N[(C₂H₅OH)(CH₃)]基团。

5.  盐形式的权利要求1-4中任一项的化合物。

6.  权利要求1-5中任一项的化合物在制备用于治疗IgE合成介导的疾病、自身免疫性疾病、胃肠疾病和移植物慢性排斥反应的药物中的用途。

7.  治疗IgE合成介导的疾病、自身免疫性疾病、胃肠疾病和移植物慢性排斥反应的方法，该方法包括给予需要该治疗的宿主治疗有效量的权利要求1-5中任一项的化合物。

8.  用作药物的权利要求1-5中任一项的化合物。

9.  含有权利要求1-5中任一项的化合物以及至少一种药用赋形剂的药物组合物。

10.  胺在制备用于治疗IgE合成介导的疾病、自身免疫性疾病、胃肠疾病和移植物慢性排斥反应的药物中的用途，该胺被下列基团取代：
-苯基-取代的嘧啶；和
-苯基；以及
-第三种取代基，例如如权利要求1-5中定义的R₄。

用作IgE抑制剂的苯基嘧啶取代的胺
本发明涉及有机化合物，如具有药学活性(如抑制IgE合成)的取代的胺。
一方面，本发明提供了式I化合物：

其中
R₁为卤素或卤代(C_1-4)烷基，
R₂为氢、卤素或卤代(C_1-4)烷基，
R₃为卤素或卤代(C_1-4)烷基，
R₄为氢、(C_1-8)烷基、羟基(C_1-6)烷基或下式基团：
-CO-R₅，
-CO-(CH₂)_m-OR₆，
-CO-CO-R₇，
-CO-CO-OR₈，
-CO-N(R₉R₁₀)，
-CO-(CH₂)_n-CO-R₁₁，
-CO-(CHR₁₅)-O-(CH₂)_o-CO-R₁₁，
-CO-(CH₂)_p-O-(CH₂)_q-O-(CH₂)_r-R₁₆，
-CO-O-(CH₂)_s-O-CO-R₁₇，
-CO-O-(CH₂)_t-N(R₁₈R₁₉)，
-CO-O-(CH₂)_u-NH-CO-CH(NH₂)-R₂₀，或
-CO-O-(CH₂)_w-NH-CO-R₁₇，其中
R₅为氢、(C_1-8)烷基、(C_3-8)环烷基、氨基、(C_1-4)烷基氨基、二(C_1-4)烷基氨基、芳基或具有1-4个选自N、O或S的杂原子的5-或6-元杂环环系的杂环基，
R₆为氢、(C_1-4)烷基、(C_3-8)环烷基、芳基、被具有1-4个选自N、O或S的杂原子的5-或6-元杂环环系的杂环基取代的(C_1-4)烷基、氨基(C_1-6)烷基、(C_1-4)烷基氨基(C_1-6)烷基、二(C_1-4)烷基氨基(C_1-6)烷基、羟基(C_1-6)烷基、羟基(C_1-4)烷基氨基(C_1-6)烷基或氨基酸残基，如-CH₂-CH(NH₂)-COOH，
R₇和R₈互相独立为(C_1-4)烷基、(C_3-8)环烷基、芳基或具有1-4个选自N、O或S的杂原子的5-或6-元杂环环系的杂环基，
R₉和R₁₀互相独立为氢或(C_1-4)烷基或
R₉和R₁₀之一为氢且另一个为(C_3-8)环烷基、(C_1-4)烷基、芳基或杂环基，
R₁₁为(C_1-4)烷基、-OR₁₂、-NR₁₃R₁₄、氨基酸、它们的(C_1-4)烷基酯或它们的二(C_1-4)烷基酯，
R₁₂为氢或(C_1-4)烷基，
R₁₃和R₁₄互相独立为氢、(C_1-4)烷基、氨基(C_1-6)烷基、(C_1-4)烷基氨基(C_1-6)烷基、二(C_1-4)烷基氨基(C_1-6)烷基，
R₁₅为氢或(C_1-4)烷基，
R₁₆为氢、(C_1-4)烷基、羧基或羧酸酯，
R₁₇为氨基(C_1-4)烷基、(C_1-4)烷基氨基(C_1-4)烷基或二(C_1-4)烷基氨基(C_1-4)烷基，
R₁₈为氢或(C_1-4)烷基，
R₁₉为羟基(C_1-4)烷基，
R₂₀为(C_1-4)烷基或羟基(C_1-4)烷基，
m为0-4，
n为2-8，
o为0-4，
p为0-4，
q为1-8，
r为0-4，
s为1-4，
t为1-4，
u为1-6，且
w为1-6。
另一方面，本发明提供了如下定义的式I化合物，其中
-R₁为氯或三氟甲基，
-R₂为氢或三氟甲基，
-R₃为氯、氟或三氟甲基，
-R₄为氢、(C_1-4)烷基(如甲基)、羟基(C_1-4)烷基(如羟基乙基)，或下式基团：
-CO-R₅，
-CO-(CH₂)_m-OR₆，
-CO-CO-R₇，
-CO-CO-OR₈，
-CO-N(R₉R₁₀)，
-CO-(CH₂)_n-CO-R₁₁，
-CO-(CHR₁₅)-O-(CH₂)_o-CO-R₁₁，
-CO-(CH₂)_p-O-(CH₂)_q-O-(CH₂)_r-R₁₆，
-CO-O-(CH₂)_s-O-CO-R₁₇，
-CO-O-(CH₂)_t-N(R₁₈R₁₉)，
-CO-O-(CH₂)_u-NH-CO-CH(NH₂)-R₂₀，或
-CO-O-(CH₂)_w-NH-CO-R₁₇，其中
R₅为氢、(C_1-4)烷基、(C_3-6)环烷基、二甲基氨基、苯基或为具有一个O杂原子的的6-元杂环环系的杂环基，如四氢吡喃基，
R₆为氢、(C_1-4)烷基、被为具有1或2个选自N或O的杂原子的5或6元杂环环系的杂环基取代的(C_1-2)烷基，例如包括未取代的吡咯烷、吗啉和哌嗪以及被如(C_1-2)烷基或(C_1-2)羟基烷基取代的哌嗪；氨基(C_1-4)烷基、(C_1-2)烷基氨基(C_1-4)烷基、二(C_1-2)烷基氨基(C_1-4)烷基、羟基(C_1-3)烷基、羟基(C_1-2)烷基氨基(C_1-2)烷基或氨基酸残基，如-CH₂-CH(NH₂)-COOH，
R₇和R₈互相独立为(C_1-2)烷基或苯基，
R₉和R₁₀互相独立为氢或(C_1-2)烷基，
R₁₁为(C_1-2)烷基、-OR₁₂、-NR₁₃R₁₄、氨基酸、它们的(C_1-2)烷基酯或它们的二(C_1-2)烷基酯，优选选自下列的氨基酸：丙氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸和赖氨酸，其中连接通过α-氨基基团进行，或者在为如赖氨酸的情况下，则通过ε-氨基基团连接，
R₁₂为氢或(C_1-2)烷基，
R₁₃和R₁₄互相独立为氢、(C_1-2)烷基、氨基(C_1-4)烷基、(C_1-2)烷基氨基(C_1-4)烷基、二(C_1-2)烷基氨基(C_1-4)烷基，
R₁₅为氢或(C_1-2)烷基，
R₁₆为氢、(C_1-2)烷基、羧基或羧酸酯，
R₁₇为氨基(C_1-2)烷基，
R₁₈为氢或(C_1-2)烷基，
R₁₉为羟基(C_1-2)烷基，
R₂₀为(C_1-2)烷基或羟基(C_1-2)烷基，
m为0或1，
n为2-4，
o为0或1，
p为0-2，
q为2-5，
r为0-2，
s为2，
t为2，
u为1-3，且
w为1-3。
另一方面，本发明提供了式I化合物，这些化合物选自下列化合物：
N-[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-胺，
N-[4-(3-三氟甲基-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-氟-3-三氟甲基-苯基)-胺，
N-[4-(3-三氟甲基-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-氯-3-三氟甲基-苯基)-胺，
N-[4-(3-三氟甲基-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-三氟甲基-苯基)-胺，以及
N-[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-三氟甲基-苯基)-胺，
其中氨基基团进一步被R₄取代，其中R₄如上文定义。
本发明进一步的方面提供了式I化合物，其中
-R₁为氯，
-R₂为氢，
-R₃为三氟甲基且
-R₄为氢。
本发明进一步的方面提供了式I化合物，其中
-R₁为氯，
-R₂为氢，
-R₃为三氟甲基且
-R₄为式-CO-O-(CH₂)₂-N[(C₂H₅OH)(CH₃)]的基团。
如果在此没有特别指出，那么芳基包括苯基。卤素包括氟、氯、溴。卤代烷基包括卤代(C_1-4)烷基，其中卤素可以为一个或多个卤素，优选三氟甲基。(C_3-8)环烷基包括如(C_3-6)环烷基。氨基包括氨基、(C_1-4)烷基氨基和二(C_1-4)烷基氨基。氨基烷基包括氨基(C_1-6)烷基，如(C_1-4)烷基氨基(C_1-6)烷基、二(C_1-4)烷基氨基(C_1-6)烷基，优选二取代的氨基(C_1-4)烷基氨基(C_1-4)烷基，如二甲基-或二乙基氨基(C_1-4)烷基。羟基烷基氨基包括羟基(C_1-6)烷基、羟基(C_1-4)烷基氨基(C_1-6)烷基，优选羟基(C_1-3)烷基或羟基(C_1-2)烷基氨基(C_1-2)烷基。氨基酸包括所有天然和合成的氨基酸，优选α-氨基酸，如丙氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、谷氨酸和赖氨酸。氨基酸包括一个或多个氨基酸，如二-或三肽。
杂环基包括具有1-4个选自N、O或S的杂原子的5或6元杂环系。优选的杂环基为具有1或2个选自N或O的杂原子的5或6元环系。优选为吡咯烷、吗啉和哌嗪。
任何基团均可以是未取代的或取代的，如被有机化学的常规基团取代，如包括选自下列的基团：卤素、卤代烷基、烷基羰基氧基、烷氧基、羟基、氨基、烷基羰基氨基、氨基烷基羰基氨基、羟基烷基氨基、氨基烷基氨基、烷基氨基、二烷基氨基、具有5或6个环原子并且1-4个为选自N、O、S的杂原子的杂环基；(C_1-4)烷基杂环基，其中杂环基具有5或6个环原子并且1-4个为选自N、O、S的杂原子；羟基(C_1-4)烷基杂环基，其中杂环基具有5或6个环原子并且1-4个为选自N、O、S的杂原子；羧基、(C_1-4)烷基羰基氧基、氨基(C_1-4)-烷基羰基氧基。
在下文中，将本发明提供的化合物称为“本发明化合物”。本发明化合物包括任何形式的化合物，如游离形式、盐形式、溶剂化物的形式以及盐和溶剂的溶剂化物的形式。
本发明化合物的盐包括药学上可接受的盐，如包括金属盐或酸加成盐。金属盐包括例如碱金属或碱土金属盐；酸加成盐包括式I化合物与酸形成的盐，所述酸如包括无机和有机酸，如包括药学上可接受的酸，例如盐酸、硫酸、甲磺酸、苯磺酸、p-甲苯磺酸、酒石酸。
游离形式的本发明化合物可以转化为相应盐形式的化合物；反之亦然。游离形式或盐形式或溶剂化物形式的本发明化合物可以转化为相应的游离形式或非溶剂化物的盐形式的化合物；反之亦然。
本发明的化合物可以以它们的异构体或混合物形式存在；如光学异构体、非对映异构体、顺式-反式构像异构体。本发明化合物可以如包含不对称碳原子，因此可以以对映体、非对映异构体和它们的混合物(如外消旋物)的形式存在，如与本发明化合物的不对称碳原子相连的取代基可以是R-或S-构型，包括它们的混合物。本发明包括本发明化合物地任何异构形式和任何异构混合物的形式。
此处所述任何化合物，如本发明化合物，可以如根据常规方法，或如此处所述方法适当制备。
本发明化合物(其中胺基团可以为被苯基-取代的嘧啶、苯基以及氢取代)可以如根据类似于常规方法的方法制备，优选根据下述反应流程1制备：
                        流程1

如其中在式I、II和III中，R₁、R₂和R₃如上文定义，且R₄为H；且任选进一步使得到的化合物与适当的试剂反应，得到本发明化合物，如式I化合物，其中，R₄如上文定义，但不为氢；如使式I化合物(其中R₄为H且其它取代基如上文定义)。
-在NaH存在下，与烷基碘化物反应，得到式I化合物(其中R₄为烷基)，
-与溴代-羟基烷反应得到式I化合物(其中R₄为羟基烷基)，
-与卤化物或式R₅COOH的羧酸酐(其中R₅如上文定义)反应，得到式I化合物(其中R₄为基团-CO-R₅，其中R₅如上文定义)，
-与光气反应得到式I化合物(其中R₄为-COCl)，进一步使得到的化合物与下式化合物反应：
a)R₆-(CH₂)_m-OH，其中R₆如上文定义且m为0，得到式I化合物，其中R₄为式-CO-(CH₂)_m-OR₆的基团，其中R₆为如上文定义且m为0，
b)R₁₇-CO-O-(CH₂)_s-OH(其中R₁₇和s如上文定义)，得到式I化合物，其中R₄为式-CO-O-(CH₂)_s-O-CO-R₁₇的基团(其中R₁₇和s如上文定义)，
c)N(R₁₈R₁₉)-(CH₂)_t-OH(其中R₁₈、R₁₉和t如上文定义)，得到式I化合物，其中R₄为式-CO-O-(CH₂)_t-N(R₁₈R₁₉)的基团，其中R₁₈、R₁₉和t如上文定义，
d)R₂₀-(NH₂)CH-CO-NH-(CH₂)_u-OH(其中R₂₀和u如上文定义)，得到式I化合物，
其中R₄为式-CO-O-(CH₂)_u-NH-CO-CH(NH₂)-R₂₀的基团，其中R₂₀和u如上文定义，
e)R₁₇-CO-NH-(CH₂)_w-OH(其中R₁₇和w如上文定义)，得到式I化合物，其中R₄为式-CO-O-(CH₂)_w-NH-CO-R₁₇的基团，其中R₁₇和w如上文定义，
-与式R₅-CO-Cl化合物(其中R₅如上文定义)反应，得到式I化合物，其中R₄为式-CO-R₅的基团，其中R₅如上文定义，
-与式R₆-O-(CH₂)_m-CO-Cl化合物(其中R₆如上文定义)反应，得到式I化合物，其中R₄为式-CO-(CH₂)_m-OR₆的基团，其中R₆如上文定义，
-与式R₇-CO-CO-Cl化合物(其中R₇如上文定义)反应，得到式I化合物，其中R₄为式-CO-CO-R₇的基团，其中R₇如上文定义，
-与式R₈-O-CO-CO-Cl化合物(其中R₈如上文定义)反应，得到式I化合物，其中R₄为式-CO-CO-OR₈的基团，其中R₈如上文定义，
-与式(R₉R₁₀)N-CO-Cl化合物(R₉和R₁₀如上文定义)反应，得到式I化合物，其中R₄为式-CO-N(R₉R₁₀)的基团，其中R₉和R₁₀如上文定义，
-与式R₁₁-CO-(CH₂)_n-CO-Cl化合物反应(其中R₁₁和n如上文定义)，得到式I化合物，其中R₄为-CO-(CH₂)_n-CO-R₁₁的基团，其中R₁₁和n如上文定义，
-与式R₁₁-CO-(CH₂)_o-O-(CHR₁₆)-CO-Cl化合物反应，其中R₁₁、R₁₆和o如上文定义，得到式I化合物，其中R₄为式-CO-(CHR₁₆)-O-(CH₂)_o-CO-R₁₁的基团，其中R₁₁、R₁₆和o如上文定义，
-与式R₁₆-(CH₂)_r-O-(CH₂)_q-O-(CH₂)p-CO-Cl化合物反应，其中R₁₆、r、q和p如上文定义，得到式I化合物，其中R₄为式-CO-(CH₂)p-O-(CH₂)_q-O-(CH₂)_r-R₁₆的基团，其中R₁₆、r、q和p如上文定义，
-与式Cl-OC-(CH₂)_v-CO-Cl化合物反应，得到式I化合物(其中R₄为式-CO-(CH₂)_v-CO-Cl基团)，进一步使得到的化合物与氨基酸、氨基酸单(C_1-6)烷基酯、氨基酸二(C_1-6)烷基酯或与伯或仲胺反应，任选含有另外的胺基团，得到式I化合物，其中R₄为下式基团：
-CO-(CH₂)_v-CO-氨基酸、-CO-(CH₂)_v-CO-氨基酸单(C_1-6)烷基酯或
-CO-(CH₂)_v-CO-氨基酸二(C_1-6)烷基酯，且v为1-6，优选1-5。
使式I化合物(其中R₄为H且其它取代基如上文定义)，与适当的试剂反应得到式I化合物；其中R₄如上文定义，但不为氢，该反应为烷化或酰化反应，并且可以根据适当的，如根据例如类似于常规方法，或如上文描述的方法进行反应。在此类反应中，取代基，如羟基或胺基团，可以于反应前被保护并于反应中或反应后脱保护。
在另一方面，本发明提供了制备式I化合物的方法，包括使式II化合物(其中R₁如上文定义且ALK意指烷基或环烷基)，与式III化合物(其中R₂和R₃如上文定义)反应，得到式I化合物(其中R₁、R₂和R₃如上文定义，且R₄为氢)，任选将得到的化合物烷化或酰化，如果需要将基团脱保护，得到式I化合物(其中R₁、R₂和R₃如上文定义且R₄如上文定义，但不为氢)，然后自反应混合物中分离得到的式I化合物。
任何此处所述的化合物，如本发明化合物，可以根据适当的方法制备，如根据常规方法或此处所述方法制备。式II和式III化合物为已知的或可以根据常规方法或此处所述方法得到。
本发明化合物在体外和体内均显示出药理活性，因此可以用作药物：
在如气管的过敏反应中，在Th2细胞因子IL-4存在下，经树突状细胞(DC)呈递的过敏原刺激后，2型T-辅助细胞(Th2细胞)由原初T-细胞前体产生。这些Th2细胞在肺内诱导产生复合型炎症反应，从而导致过敏性哮喘的发作和恶化。由这些Th2细胞产生的细胞因子，包括例如IL-4、L-5、IL-10和IL-13，介导促炎效应细胞例如积聚在肺内的嗜曙红细胞、嗜碱细胞和肥大细胞的扩张。
此外，IL-4和IL-13诱导B-细胞产生IgE。在促炎细胞的激活和过敏性炎症介质的释放中，经过敏原交联后，产生IgE与肥大细胞和嗜碱细胞上的IgE受体(FcεRI)高亲合结合。
基于这些观测结果，发明人预期通过抑制Th2细胞介导的过敏性炎症反应和对IgE生成上的作用可以提供有效控制过敏性哮喘和其它过敏性疾病例如变应性皮炎、过敏性结膜炎和过敏性鼻炎的一种新方法。
申请人发现，本发明化合物可以作为人类DC功能调节剂。在用本发明化合物治疗后，已知在原初T-细胞前体相互作用中起重要作用的DC细胞表面分子(例如CD86、CD83、CD25和HLAII类抗原)在人单核细胞衍生的树突状细胞表面的数目减少。类似地，本发明化合物可抑制成熟DC分泌IL-6。经化合物处理的树突状细胞显示出对原初CD4-阳性自体同源T-细胞的增殖和细胞因子的生成的刺激能力受损。
此外，申请人还发现，本发明化合物可以作为IgE合成的特异性抑制剂。经全身或口服给予本发明化合物，可以抑制免疫球蛋白合成，特别是抑制B-淋巴细胞中的免疫球蛋白E的合成，即本发明化合物可以显示同型特异性。更进一步地，申请人还发现本发明化合物在低于阻止IgE合成所需的浓度下可能不抑制B-细胞增殖。
在下列测定方法中证明了这些活性。温度以摄氏度表示并且未经校正。在本文中，使用的缩写进行下面的含义：
DC树突状细胞
ELISA酶联免疫吸附测定法
FACS荧光激活细胞筛选法
FCS胎牛血清
GM-CSF粒细胞巨噬细胞集落刺激因子
IgE免疫球蛋白E
IL-4白介素-4
IL-5白介素-5
IL-6白介素-6
IL-10白介素-10
IMDM Iscove氏改良Dulbecco培养基
KLH匙孔血蓝蛋白
Mo-DC单核细胞衍生的树突状细胞
PBMC外周血单核细胞
SRBC绵羊红细胞
RT室温
Th辅助性T细胞
Th2 2型辅助性T细胞
1.同型特异性：
经细胞因子和抗-CD40抗体刺激后对原代人B-淋巴细胞中诱导的免疫球蛋白合成的抑制
将正常人脾的单核细胞纯化。产生的细胞悬浮液包含50-70％的B-淋巴细胞，经在FACS分析中测定CD19表达确定的。采用96孔圆底微滴定板(Costar)进行测定，将5×10⁴个脾细胞置于终体积200μl/孔的IMDM中。与所试化合物预培养1小时后，于37℃下，在通入含有5％CO₂的空气的条件下，于50ng/ml的IL-4和500ng/ml的抗-CD40抗体存在下培养细胞9天以诱导IgE生成。收集培养细胞上清液并经标准同型特异性夹层ELISA测定IgE的含量。为诱导IgG合成，在经同型特异性ELISA反应对细胞上清液中的IgG水平测定前在，将细胞与100ng/ml的IL-10和500ng/ml的抗-CD40抗体培养相同的时间。
这些试验表明，本发明化合物抑制IgE生成优于IgG(IgG1)。
2.B-细胞增殖
根据M.S.Weiner等，Blood 42(1973)939中所述的方法，采用SRBC-玫瑰花法，去除杂质T-细胞，自扁桃体中分离并纯化正常人B-淋巴细胞。得到的B-细胞纯度大于95％，经在FACS分析中测定CD19表达确定。采用96孔圆底微滴定板(Costar)进行，将1×10⁵个脾细胞置于终体积为200μl/孔的IMDM中。与所试化合物预培育1小时后，用50ng/ml的IL-4和500ng/ml的抗-CD40抗体诱导细胞增殖。于37℃下，在通入含有5％CO₂的空气的条件下经4天培养后，加入1μCi的氚标胸苷并培养细胞约16小时。在硝基纤维素滤膜上收集细胞并经液体闪烁计数测定结合的DNA的放射性。
这些试验表明，在高于阻止IgE合成所需浓度时，本发明化合物可以抑制IL-4和抗-CD40抗体介导的B-细胞增殖。
3.DC细胞表面标记的调节
用可经商业获得的试剂盒(Miltenyi)，经淘析或经PBMC阴性选择制备人外周血单核细胞。得到的单核细胞密度通常为对CD14阳性＞97％，经FACS染色测定CD14的纯度确定。在5ml添加了1％的FCS、链霉素和谷氨酰胺的IMDM培养基中，将单核细胞以3×10⁶个细胞/孔的浓度接种于6孔培养板中。在所试化合物不存在或存在下，加入40ng/ml的IL-4和15ng/ml的GM-CSF后培养6天诱导不成熟的Mo-DC的产生。最初的2天后，用新培养基、细胞因子和化合物(适当时)替换一半量的培养基。培养的第6天，经FACS染色，测定CD86和HLA-DR的细胞表面表达水平。
通过用100ng/ml的LPS(Sigma)活化不成熟的DC，或通过用包含20ng/ml的GM-CSF、100U/ml的IFN-γ、20U/ml的TNF-α和4μg/ml的交联的抗-CD40单克隆抗体的混合物诱导24小时使不成熟的DC成为成熟的DC。然后，用FACS测定CD83和CD25的细胞表面表达水平。
这些试验表明，本发明化合物抑制CD86、HLA-DR、CD83和CD25的细胞表面表达水平。
4.DC介导的抗原特异性自体T-细胞刺激测定
在所试化合物不存在或存在下，产生不成熟的Mo-DC。然后，在所试化合物存在或不存在下，用100μg/ml的KLH对细胞进行脉冲过夜并再与自体CD4-阳性T-细胞共同培养9天以引发原代T-细胞反应。洗涤细胞后，不加入化合物，用新KLH-脉冲的DC在不同的T/DC比率下再刺激致敏的T-细胞3天。在最后16小时，加入1μCi的氚标胸苷。在硝基纤维素滤膜上收集细胞并经液体闪烁计数测数结合的DNA的放射性。
这些试验表明，本发明化合物抑制DC介导的T-细胞增殖。
5.T-细胞的细胞因子生成
48小时后，自DC/T-细胞再刺激培养物(见上文)中提取上清液并用可经商业获得的试剂盒经ELISA测定GM-CSF和IL-2。
这些试验表明，本发明化合物抑制DC介导的T-细胞的细胞因子生成。
6.本发明化合物在血浆中的稳定性的测定
由人类志愿者和Balb/c小鼠获得肝素化血。于室温(RT)下，将获得的血于13,000rpm离心4分钟，得到血浆。向血浆的等份样本(1ml)中加入所试化合物，即本发明化合物(1μl的10mM在DMSO或水中的储备液)。于37℃下温育样本。于不同时间点，从上述样本中取100μl的等份样本。加入一份内标(5μl的100μg/ml内标化合物的甲醇溶液)，然后加入300μl的甲醇(或乙腈或乙腈/1M的HCl，视要求而定)。以13,000rpm离心分离样本5分钟。
为便于分析，将得到的50μl的上清液注入HPLC系统(HP1090)，配有Hypersil BDS C-8柱(5μm，250×4.6mm)及预柱(10×4.6mm)。于55℃下，并以流速1.5ml/min用乙腈和10mm的(NH₄)₂SO₄的混合物(pH2.7；对不同物质所用混合物的乙腈含量为55-65％)等度洗脱柱。
特定化合物的分析可能需要不同的HPLC-系统，例如柱：ZorbaxExtend C18(3.5μm，150×4.6mm)；预柱：Hypersil BDS，C-8(5μm，10×4.6mm)；RT；溶剂的乙腈含量：65％。
于277nm进行UV检测。为便于校准，血浆样本可与式I化合物(其中R₄为氢)或式I化合物(其中R₄为如上定义，但不为氢)混合；两者的浓度都在0.5-20μm范围内，还包括内标。用这些校准设置计算绝对浓度。
在这些测定试验中，申请人发现在血浆中，其中R₄为如上定义、但不为氢的式I化合物的稳定性低于其中R₄为氢的式I化合物。由此可以可知，其中R₄为如上定义、但不为氢的式I化合物可以作为其中R₄为氢的式I化合物的前药。另一方面，其中R₄为氢的式I化合物可以成为高活性物质，例如可以以此确定在体外和体内均显现出很好的活性的本发明化合物的基本结构。因此，其中R₄为氢的式I化合物可以作为那些具有常规药物结构的化合物。
在如口服后，本发明化合物显示出优良的溶解性和优良的血浆水平。
因此，本发明化合物可以用作DC功能调节剂和免疫球蛋白合成抑制剂，尤其是IgE合成抑制剂，并因此可以用于治疗IgE介导的疾病，特别IgE介导的过敏性疾病，例如由IgE表达介导的疾病，如变应性皮炎(特别是在儿童中的变应性皮炎)、荨麻疹(特别是急性荨麻疹)、过敏性哮喘、过敏性鼻炎、食物过敏、过敏性结膜炎、枯草热、大疱性类天疱疮以及工业过敏。此外，这些化合物可以用于治疗以炎症为主要病理的其它疾病，例如自身免疫性疾病(如系统性红斑狼疮、牛皮癣和风湿性关节炎)以及肠胃疾病(例如克罗恩氏病)和移植物慢性排斥反应。
另一方面，本发明提供了胺在制备用于治疗IgE合成介导的疾病、自身免疫性疾病、肠胃疾病和移植物慢性排斥反应的药物中的用途，所述胺可被下列基团所取代：
-苯基-取代的嘧啶；和
-苯基；和
-第三种取代基，
所述胺为例如本发明化合物，
第三种取代基包括例如如上定义的基团R₄。
在一个优选方面，本发明提供了式I化合物(其中取代基R₁至R₄为如上定义)在制备用于治疗IgE合成介导的疾病、自身免疫性疾病、肠胃疾病和移植物慢性排斥反应的药物中的用途。
当然，根据例如所使用的特定化合物、给药方式和所期望的治疗，在上述用途中所采用剂量有所不同。然而，通常而言，当以约1mg/kg至约30mg/kg动物体重的日剂量给予化合物时(相应地以分剂量每日给予2至4次)均可获得满意的结果。对于大多数大哺乳动物来讲，适当给予总日剂量为约70mg至约2000mg，例如，以分剂量每日分4次给予或以缓释形式给药。单位剂量包括，例如，约17.5mg至约1000mg的化合物与至少一种固体或液体药学上可接受的赋形剂(例如载体或稀释剂)的混合物。
本发明化合物可以以已知标准的类似方法给药，例如糖皮质激素和抗组胺药。也可以与常规治疗可接受的载体和稀释剂以及任选的另外的赋形剂混合，并且可以以例如口服形式给药，例如片剂、胶囊剂；或者，也可以局部给药，例如以常规形式，如气雾剂、软膏或霜剂；胃肠外或静脉内给药。当然，物质的浓度可以例如根据所给的化合物、所需治疗以及给药形式的性质有所不同。然而，通常而言，当局部给药时，浓度为约0.05％(重量)至约5％(重量)，特别是约0.1％(重量)至约1％(重量)时，即可以获得满意的效果。
另一方面，本发明提供了本发明化合物在制备用于治疗IgE介导的疾病(例如IgE表达介导的疾病)、自身免疫性疾病、肠胃疾病和移植物慢性排斥反应的药物中的用途。
用于治疗IgE介导的疾病、自身免疫性疾病、肠胃疾病和移植物慢性排斥反应的药物组合物可以通过将本发明化合物与至少一种药学上可接受的赋形剂(例如载体或稀释剂)混合在一起来制备。
另一方面，本发明提供了治疗IgE介导的疾病、自身免疫性疾病、肠胃疾病和移植物慢性排斥反应的方法，该方法包括给予需要此类治疗的宿主治疗有效量的本发明化合物，例如以药物组合物形式。
本发明化合物具有良好的耐受性，这可以通过常规方法证明。本发明化合物具有有益的药理学性质，例如在各种溶剂中具有优良的可溶性。
另一方面，本发明提供了可以用作药物的本发明化合物，优选用于治疗IgE介导疾病、自身免疫性疾病、肠胃疾病和移植物慢性排斥反应。
本发明化合物可以以药学上可接受的盐的形式(例如酸加成盐或金属盐)或游离形式形式给药，任选以溶剂合物的形式。盐形式的本发明化合物与游离形式(任选以溶剂合物形式)的本发明化合物显现出相同的活性。
另一方面，本发明提供含有本发明化合物与至少一种药物赋形剂(例如载体或稀释剂)的药物组合物。这些组合物可以根据常规方法生产。
根据本发明，本发明的一种或多种化合物可以单独或与一种或多种其他药用活性物质联合用作药物进行治疗，例如用于治疗IgE介导的疾病(特别是IgE介导的过敏性疾病)，例如IgE表达介导的疾病，如变应性皮炎(特别是儿童变应性皮炎)，荨麻疹(特别是急性荨麻疹)、过敏性哮喘、过敏性鼻炎、食物过敏、过敏性结膜炎、枯草热、大疱性类天疱疮以及工业过敏。此外，这些化合物也可用于治疗其他炎症为主要病理的疾病，例如自身免疫性疾病(如系统性红斑狼疮、牛皮癣和风湿性关节炎)以及肠胃疾病(例如克罗恩氏病)和移植物慢性排斥反应。所述其他药用活性物质包括例如类固醇、抗组胺药、子囊霉素、ASM981、雷帕霉素。
联合包括固定联合，其中在同一制剂中含有两种或多种药用活性物质；试剂盒，其中两种或多种药用活性物质以分开的制剂形式在同一包装中一起销售，例如在该包装中还包括关于联合给药的说明；以及自由联合，其中联合使用的药用活性物质分别进行包装，但同时提供关于同时或顺序给药的说明。
另一方面，本发明提供了药物组合，该组合包含作为活性成分的本发明化合物和联合(例如包括固定联合、试剂盒和自由联合)的一种或多种其他药用活性物质，例如其他药用活性物质选自如类固醇、抗组胺药、子囊霉素、ASM981、雷帕霉素。
在下列说明本发明的实施例中，提及的温度为摄氏度且未经校正。在给出的¹H-NMR数据中，化学位移的单位为δ；J值的单位为Hz。并且使用了下列缩写：
m.p.熔点
RT室温
br.宽峰
实施例1
N-[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-三氟甲基-苯基)-胺
A)1-(3-氯-苯基)-3-二甲基氨基-丙烯酮
于约100℃，将50g的3-氯苯乙酮和65ml的N，N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛加热约24小时并冷却至室温。滤出形成的沉淀，洗涤并干燥。得到40g的1-(3-氯-苯基)-3-二甲基氨基-丙烯酮，为晶体形式。熔点72.8℃。
B)N-(4-三氟甲基-苯基)-胍碳酸盐
将13.75ml的37％HCl水溶液滴加入17.5ml的4-三氟甲基苯胺和28ml水的混合物中，将得到的混合物预热至约75℃约20分钟。于约75℃，向得到的混合物中滴加入12.9g氨腈的13ml水溶液，并于该温度下继续搅拌约4小时。得到的混合物冷却至室温并滴加入9.26g的Na₂CO₃的43ml水溶液。向得到的混合物中再加入140ml水并将得到的混合物搅拌过夜。滤出固体沉淀，洗涤并干燥。得到14g的N-(4-三氟甲基-苯基)-胍碳酸盐，为晶体形式，熔点125.3℃。
C)N-[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-三氟甲基-苯基)-胺
于120℃，将1.5g的1-(3-氯-苯基)-3-二甲基氨基-丙烯酮、1.7g的N-(4-三氟甲基-苯基)-胍碳酸盐和15ml的n-丁醇的混合物加热24小时，得到的混合物冷却至室温，得到固体沉淀。滤出该沉淀并用n-丁醇再结晶。得到1.0g的N-[4-(3-氯-苯基)-嘧啶-2-基]-N-(4-三氟甲基-苯基)-胺，为晶体形式，熔点201.5℃。
类似于实施例1所述方法，但采用适当的起始原料，可以得到下式化合物：

其中R_1EX、R_2EX和R_3EX如下表1定义且R_4EX为H，其熔点在下表1中给出：
                   表1