一种红毛七总碱的制备工艺.pdf

本发明公开了一种红毛七总生物碱的提取工艺，原料选用红毛七根及根茎，红毛七药材经乙醇提取和酸水提取后，酸水提取液再经阳离子交换树脂柱吸附，上样液流速为每小时1.1～1.3倍柱体积，水洗至近中性后，再依次分别用含2％～4％氨水的甲醇和含1～2％盐酸的甲醇洗脱，洗脱液流速为每小时0.5～0.6倍柱体积，合并洗脱液，浓缩，得到红毛七总生物碱浸膏。

1.  一种红毛七总生物碱的制备工艺，原料选用红毛七根及根茎，其特征在于，包括下列步骤：
提取步骤：
取红毛七根及根茎粗粉原料300重量份，先用原料8倍量的90％乙醇提取1次，然后再用原料8倍量的70％乙醇提取2次，每次提取时间2小时，合并上述提取液并浓缩，得到室温下密度为1.32的浸膏100重量份；
将得到的浸膏用稀盐酸提取2次，第一次提取将浸膏置入12倍量的浓度为0.3～2％稀盐酸中，搅匀后静置2～3天，自然沉降至界面不再下降，取上清液，得到加入稀盐酸量的65％的第一次提取液；
第一次提取后的沉淀物再用5倍量0.2～1％的稀盐酸提取一次，静置沉降2～3天，取上清液，得到加入稀盐酸量的95％的第二次提取液；合并两次提取液，得到的提取液总量为浸膏量的12.5倍；
纯化步骤：
将稀盐酸提取液用LSD001型阳离子交换树脂柱吸附分离，取树脂72重量份，流速为每小时1.1～1.3倍柱体积，上完样后用自来水冲洗柱子，直至水洗脱液pH6～7，弃去水洗脱液，得到纯化的红毛七总生物碱；
洗脱步骤：
纯化的红毛七总生物碱先用6～8倍柱体积含2～4％氨水的甲醇洗脱，再用4～5倍柱体积含1～2％盐酸的甲醇洗脱，洗脱液流速控制在每小时0.5～0.6倍柱体积，洗脱过程中用碘化铋钾试剂检测是否洗脱完全；
收集洗脱液，合并，减压浓缩，减压干燥，得到红毛七总碱粗品6.5～10重量份。

一种红毛七总碱的制备工艺
技术领域
本发明涉及一种从红毛七根及根茎中提取红毛七总生物碱的方法，特别涉及一种红毛七总碱的制备工艺。
背景技术
红毛七(Radix et Rhizoma Leonticis)为小檗科植物类叶牡丹Leonticerobustum(Maxim.)Diels.的根及根茎，产于秦岭和大巴山区，原苏联、日本也有分布，属于非药典收录天然药物，含木兰花碱、塔斯品碱、N-甲基金雀花碱、右旋羽扇豆碱等生物碱。具有降压、兴奋子宫平滑肌、抗菌、抗病毒、抗炎、抗风湿、抗痉挛等多种药理作用，具有较大研究价值，但目前国内研究较少。
本工艺以前，红毛七总碱的提取工艺尚没有成熟的技术，而已有的制备方法主要是利用萃取技术，方法繁琐，需要用大量低极性有机溶剂，不利于工业生产，得到的总碱在数量上和种类上都不完全，大量制备也存在困难，这都不利于红毛七总碱的后续研究。
已知的制备红毛七总生物碱的方法如下：
取红毛七药材粗粉，用8倍量90％乙醇提取一次，8倍量70％乙醇提取两次，每次2小时，提取液合并浓缩得到浸膏，再用2％盐酸提取两次，第一次3～4倍量，第二次1～2倍量，过滤，滤液用氯仿萃取至氯仿层几乎无色，萃取后水层用氢氧化钠溶液(或氨水)调pH9～10，氯仿萃取10次以上，氯仿萃取液浓缩，干燥，得到极性较小的生物碱，水层再用正丁醇萃取，得到极性大的生物碱。该方法需要用大量的氯仿和正丁醇，要萃取多次，且容易产生乳化现象，不利于工业生产，而且不易萃取完全，造成浪费，用正丁醇萃取时还会引入较多极性大的杂质(如皂苷)。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种快速、简便制备红毛七总生物碱的制备工艺，该工艺能适应工业化生产，为红毛七总碱的后续研究提供充足的原料，拓宽红毛七总碱的应用范围。
实现上述目的采用的技术方案是，将红毛七药材粗粉用不同浓度乙醇加热回流提取三次，减压浓缩得到浸膏，浸膏再用稀盐酸提取两次，所得酸水液上阳离子交换树脂柱，吸附流速为每小时1.1～1.3倍柱体积，洗脱工艺为：先用含2％～4％氨水的甲醇洗脱，再用含1～2％盐酸的甲醇洗脱，洗脱液流速为每小时0.5～0.6倍柱体积，即可得到红毛七总碱。
本发明的工艺通过离子交换树脂柱制备红毛七总碱，避免了使用低极性有机溶剂，总碱得率约为原方法的2～3倍，而且可以进行工业化生产，可大量制备红毛七总碱。
具体实施方式
按照上述技术方案，本发明的红毛七总生物碱的制备工艺，按以下步骤进行：
提取步骤：
取红毛七根及根茎粗粉原料300重量份，先用原料8倍量的90％乙醇提取1次，然后再用原料8倍量的70％乙醇提取2次，每次提取时间2小时，合并上述提取液并浓缩，得到室温下密度为1.32的浸膏100重量份；
将得到的浸膏用稀盐酸提取2次，第一次提取将浸膏置入12倍量的浓度为0.3～2％稀盐酸中，搅匀后静置2～3天，自然沉降至界面不再下降，取上清液，得第一次提取液为加入稀盐酸量的65％；
第一次提取后的沉淀物再用5倍量0.2～1％的稀盐酸提取一次，静置沉降2～3天，取上清液，得到加入稀盐酸量的95％的第二次提取液；合并两次提取液，得到的提取液总量为浸膏量的12.5倍；
纯化步骤：
将稀盐酸提取液用LSD001型阳离子交换树脂柱吸附分离，取树脂72重量份(原药材300重量份或醇提浸膏100重量份所需)，流速为每小时1.1～1.3倍柱体积，上完样后用自来水冲洗柱子，直至水洗脱液pH6～7，弃去水洗脱液，得到纯化的红毛七总生物碱。
洗脱步骤：
纯化的红毛七总生物碱先用6～8倍柱体积含2～4％氨水的甲醇洗脱，再用4～5倍柱体积含1～2％盐酸的甲醇洗脱，洗脱液流速控制在每小时0.5～0.6倍柱体积，洗脱过程中用碘化铋钾试剂检测是否洗脱完全；
收集洗脱液，合并，减压浓缩，减压干燥，得到红毛七总碱粗品6.5～10重量份。
以下是发明人给出的实施例。
实验例1：上样流速的考察
将2％盐酸提取液(每12.5ml提取液相当于1g浸膏或3g原药材)上样于LSD001型阳离子交换树脂柱(树脂重80g，柱体积100ml，柱径∶柱高＝1∶2)的过程中，分别采用不同的流速，以改良碘化铋钾试剂检测，考察了上样流速与吸附量的关系，结果如下：
上样流速
                                                折合原药材量
              上样体积(ml)      折合浸膏量(g)
(ml.min^-1)
                                                (g)
1             2200              176             528
2             1700              136             408
3             1300              104             312
结果表明：上样液流速与上样量呈负相关，流速越大，吸附量越小。考虑到1ml.min^-1流速太小，耗时较长，而流速大于3ml.min^-1时，吸附量又偏低，耗用树脂量大，所以上样时采用2ml.min^-1的流速，即上样流速为每小时1.2倍柱体积。
实验例2：洗脱溶剂的考察
将已交换于LSD001型阳离子交换树脂柱(树脂重80g，柱体积100ml，柱径∶柱高＝1∶2)上的红毛七总生物碱，分别采用以下系统进行洗脱：(1)含不同浓度氨水的甲醇系统；(2)含2％盐酸的甲醇系统；(3)先用含盐酸的甲醇后用含氨水的甲醇系统；(4)先用含氨水的甲醇后用含盐酸的甲醇系统；以改良碘化铋钾试剂检测，考察了不同洗脱系统的洗脱效率，洗脱流速采用2ml.min^-1，其结果如下：
洗脱系统(1)：分别用含2％，5％，10％，20％氨水的甲醇洗脱，洗脱效率无明显差别，可见柱上有一条深红色带被洗下，洗脱至10倍柱体积时都不能将生物碱完全洗下，碘化铋钾试剂反应阳性，树脂颜色仍较深，呈暗红色。
洗脱系统(2)：采用含2％盐酸的甲醇系统洗脱，洗脱至3倍柱体积时洗脱液颜色由深红色变为浅黄色，但洗下的生物碱量较少，洗脱至10倍柱体积，树脂柱颜色仍呈深红色，未能洗下更多生物碱。
洗脱系统(3)：先用4倍柱体积的含2％盐酸的甲醇洗脱，再用含2％氨水的甲醇洗脱，共洗脱至12倍柱体积时，洗脱液碘化铋钾试剂反应阳性，树脂颜色较深，洗脱效果不够理想。
洗脱系统(4)：先用8倍柱体积的含2％氨水的甲醇洗脱，再用4倍柱体积的含2％盐酸的甲醇洗脱，洗脱后树脂柱颜色明显变浅，呈红黄色，最终洗脱液碘化铋钾试剂反应阴性，洗脱效果较好。
结果表明，洗脱系统(4)洗脱较完全，洗脱效率较高，所以选用洗脱系统(4)洗脱LSD001型阳离子交换树脂上吸附的红毛七总生物碱，即先用6倍柱体积的含2％氨水的甲醇洗脱，再用4倍柱体积含2％盐酸的甲醇系统进行洗脱。
实施例1：
取红毛七醇提浸膏(密度约为1.32(室温))250g，用稀盐酸提取两次，第一次用12倍量2％稀盐酸，第二次用5倍量1％稀盐酸，静置沉降，得上清液共3100ml，取2200ml上LSD001型阳离子交换树脂柱。树脂重约80g(柱体积100ml，柱径∶柱高＝1∶2)，上样流速为每小时0.6倍柱体积，上完样后用自来水冲洗柱子，至水洗脱液pH6～7，弃去水洗脱液；先用8倍柱体积的含2％氨水的甲醇洗脱，再用4倍柱体积的含2％盐酸的甲醇洗脱，洗脱液流速应控制在每小时0.5～0.6倍柱体积，洗脱过程中用碘化铋钾试剂检测是否洗脱完全。收集洗脱液，合并，减压浓缩，减压干燥，得到红毛七总碱粗品20.5g。
实施例2：
取红毛七醇提浸膏(密度约为1.32(室温))200g，用稀盐酸提取两次，第一次12倍量2％稀盐酸，第二次5倍量1％稀盐酸，静置沉降，得上清液共2500ml，取1700ml上LSD001型阳离子交换树脂柱。树脂重约80g(柱体积100ml，柱径∶柱高＝1∶2)上样流速为每小时1.2倍柱体积，上完样后用自来水冲洗柱子，至水洗脱液pH6～7，弃去水洗脱液；先用6倍柱体积地含2％氨水的甲醇洗脱，再用4倍柱体积的含2％盐酸的甲醇洗脱，洗脱液流速应控制在每小时0.5～0.6倍柱体积，洗脱过程中用碘化铋钾试剂检测是否洗脱完全。收集洗脱液，合并，减压浓缩，减压干燥，得到红毛七总碱粗品13g。
实施例3：
取红毛七醇提浸膏(密度约为1.32(室温))150g，用稀盐酸提取两次，第一次12倍量2％稀盐酸，第二次5倍量1％稀盐酸，静置沉降，得上清液共1800ml，取1300ml上LSD001型阳离子交换树脂柱。树脂重约80g(柱体积100ml，柱径∶柱高＝1∶2)上样流速为每小时1.8倍柱体积，上完样后用自来水冲洗柱子，至水洗脱液pH6～7，弃去水洗脱液；先用6倍柱体积的含2％氨水的甲醇洗脱，再用4倍柱体积的含2％盐酸的甲醇洗脱，洗脱流速应控制在每小时0.5～0.6倍柱体积，洗脱过程中用碘化铋钾试剂检测是否洗脱完全。收集洗脱液，合并，减压浓缩，减压干燥，得到红毛七总碱粗品12.7g。