抗病毒核苷衍生物 【技术领域】
本发明涉及抗病毒核苷衍生物，更具体地说是一类拉米夫定衍生物。
背景技术
拉米夫定是一个核苷类逆转录酶的抑制剂，是目前用于治疗乙肝病毒感染的最有效的药物之一。此外，拉米夫定还能和齐多夫定合用治疗爱滋病，拉米夫定最早由Belleau和Bernard合成(EP0382526A2)，同时，他们合成了一系列的以拉米夫定为母核的衍生物，此后，Liotta等人(WO91/11186)又在此基础上合成了一系列的在5位上衍生化的衍生物，Charvet-faury等(WO95/32200)在N4位上进行了很多衍生物的合成工作，M，Camplo等人(J.Med.Chem.(1994)29，357-362)用视黄酸作为侧链，对拉米夫定的氨基和羟基进行了衍生化。
本发明提供的化合物相对于拉米夫定而言，可能会具有更长的半衰期和更高的生物利用度，部分化合物可能会有降低体内转氨酶的作用，部分化合物可能有明显的肝靶向作用。
【发明内容】
本发明的目的在于提供一类新的具有抗病毒作用的拉米夫定的衍生物，即抗病毒核苷衍生物。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
如通式I或通式II表示的化合物及其药用酸的加成盐：
通式(I)通式(II)
其中，R1和R2表示酰基或烷氧甲酰基；
A和D表示二酰基或烷氧二酰基；
B和E表示核苷、核苷衍生物或其他类别的化合物。
所述R1为C1-C10的直链或带有支链地酰基、或C1-C10的直链或带有支链的酰基烷氧酰基。
所述A具有以下结构
或
其中，R3和R4为C1-C10的直链或带有支链的烷基、或含有杂原子的C1-C10的直链或带有支链的烷基。
所述B和D为拉米夫定、齐多夫定、联苯双酯、双环醇、水飞蘚素、胆酸等。
所述C具有以下结构
或
其中，R5为含有杂原子的C1-C10的直链或带有支链的烷基；R6为C1-C10的直链或带有支链的烷基、或含有杂原子的C1-C10的直链或带有支链的烷基。
所述杂原子为O或S或N。
一种抗HBV病毒或抗HIV的药物，它含有权利要求1所述通式I或通式II表示的化合物。
一种抗HBV病毒或抗HIV的药物，它含有权利要求1所述通式I和通式II表示的化合物。
本发明提供的化合物相对于拉米夫定而言，可能会具有更长的半衰期和更高的生物利用度，部分化合物可能会有降低体内转氨酶的作用，部分化合物可能有明显的肝靶向作用。
【具体实施方式】
实施例1、拉米夫定盐酸盐的制备
取6.3g拉米夫定溶于适量的无水甲醇中，通入经干燥后HCl气体，反应液变得浑浊，有白色沉淀生成，当没有固体析出时，停止通气，过滤，固体用甲醇洗涤，真空干燥，得到7.0g拉米夫定盐酸盐。收率94％，mp.192-193(分解)。
实施例2、5’-乙酰拉米夫定盐酸盐的制备
取7.3g拉米夫定盐酸盐和73ml冰醋酸加入到250ml的三颈瓶中，搅拌下滴加36.5ml的乙酰氯，滴加完后，反应液在30℃的条件下继续搅拌23个小时，反应完后，减压蒸干溶液，得一白色固体，用无水乙醚反复洗涤，真空干燥，得5’-乙酰拉米夫定盐酸盐8.8g，收率86％，mp.195(分解)。
实施例3、己二酰(二(5’-乙酰拉米夫定)胺)的制备
取己二酸1.9g，悬浮在20ml的二氯亚砜中，滴入1滴DMF，然后在室温下搅拌过夜，反应液变得澄清，减压蒸去未反应完的二氯亚砜，加入甲苯30ml，减压蒸干，除去残留的二氯亚砜，冷至室温，加入20ml二氯甲烷得己二酰氯溶液，另取5’-乙酰拉米夫定盐酸盐4.0g悬浮在30ml二氯甲烷中，加入N-甲基吗啡啉1.5ml，固体全部溶解，再加1小时，减压蒸干，再加入50ml的二氯甲烷溶解，然后依次用水、5％的柠檬酸溶液、饱和碳酸氢钠溶液|、饱和氯化钠溶液洗涤，分出有机层，用无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶拄层析，洗脱剂为二氯甲烷∶甲醇＝15∶1，得到白色粉末5.2g，收率61.2％。
其核磁数据为：10.883(s，2H)，8.170(d，2H，J＝7Hz)，7.252(t，2H，J＝7.5Hz)，6.225(d，2H，J＝7.5Hz)，5.416(t，2H，J＝4Hz)，4.426(d，4H，J＝5Hz)，3.568(m，2H)，3.229(m，2H)，2.349(m，4H)，2.065(s，6H)，1.540(s，4H)。
实施例4、己二酰(二拉米夫定胺)的制备
取己二酰(二(5’-乙酰拉米夫定)胺1g，溶于甲醇中，冰浴下慢慢滴入1ml氨水，然后搅拌1小时，加入稀盐酸调节PH到中性，蒸去溶剂，二氯甲烷重结晶得白色晶体0.4g，收率：51％，mp.195-196(分解)。
其核磁数据为：10.879(s，2H)，8.170(d，2H，J＝7Hz)，7.254(t，2H，J＝7.5Hz)，6.230(d，2H，J＝7.5Hz)，5.412(t，2H，J＝4Hz)，5.521(s，2H)，4.420(d，4H，J＝5Hz)，3.572(m，2H)，3.226(m，2H)，2.321(m，4H)，1.535(s，4H)。
实施例5、二甘醇酰(二(5’-乙酰拉米夫定)胺)的制备
取二甘醇酸1.75g，悬浮在20ml的二氯亚砜中，滴入1滴DMF，然后在室温下搅拌过夜，反应液变得澄清，减压蒸去未反应完的二氯亚砜，加入甲苯30ml，减压蒸干，除去残留的二氯亚砜，冷至室温，加入20ml二氯甲烷得己二酰氯溶液，另取5’-乙酰拉米夫定盐酸盐4.0g悬浮在30ml二氯甲烷中，加入N-甲基吗啡啉1. 5ml，固体全部溶解，再加入吡啶20ml，在冰水浴下滴加己二酰氯溶液，在二十分钟滴加完毕，然后在室温下再搅拌1小时，减压蒸干，再加入50ml的二氯甲烷溶解，然后依次用水、5％的柠檬酸溶液、饱和碳酸氢钠溶液|、饱和氯化钠溶液洗涤，分出有机层，用无水硫酸钠干燥，浓缩，硅胶拄层析，洗脱剂为二氯甲烷∶甲醇＝15∶1，得到白色粉末1.2g，收率29％。
其核磁数据为：10.790(s，2H)，8.214(d，2H，J＝7Hz)，7.215(t，2H，J＝7.5Hz)，6.238(d，2H，J＝7.5Hz)，5.437(t，2H，J＝4Hz)，4.473(d，4H，J＝5Hz)，4.257(s，4H)，3.584(m，2H)，3.251(m，2H)，2.506(s，6H)。
实施例6、二甘醇酰(二拉米夫定胺)的制备
取二甘醇酰(二(5’-乙酰拉米夫定)胺1g，溶于甲醇中，冰浴下慢慢滴入1ml氨水，然后搅拌1小时，加入稀盐酸调节pH到中性，蒸去溶剂，二氯甲烷重结晶得白色晶体0.5g，收率为62％。
其核磁数据为：10.765(s，2H)，8.210(d，2H，J＝7Hz)，7.214(t，2H，J＝7.5Hz)，6.242(d，2H，J＝7.5Hz)，5.433(t，2H，J＝4Hz)，5.532(s，2H)，4.469(d，4H，J＝5Hz)，4.254(s，4H)，3.580(m，2H)，3.256(m，2H)。
实施例7、1，3-丙二氧羰基二拉米夫定胺的制备
取5’-乙酰拉米夫定盐酸盐4.0g悬浮在30ml二氯甲烷中，加入N-甲基吗啡啉3ml，搅拌使之溶解，再加入10ml吡啶，将它慢慢滴入到10％光气甲苯溶液中，滴完后继续搅拌1小时，另取1，3-丙二醇1.2ml，加入10ml二氯甲烷，慢慢滴加到上述制备的溶液中，然后搅拌过夜，反应完全后，蒸去溶剂，加入30ml二氯甲烷溶解，依次水、5％柠檬酸溶液、饱和碳酸氢钠溶液、饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，加入乙醇溶解，加入氨水，搅拌一小时，加稀盐酸调节pH到中性，浓缩至干，拄层析，得到白色固体1.7g。收率31％。
其核磁数据为：10.760(s，2H)，8.214(d，2H，J＝7Hz)，7.220(t，2H，J＝7.5Hz)，6.244(d，2H，J＝7.5Hz)，5.430(t，2H，J＝4Hz)，5.532(s，2H)，4.464(d，4H，J＝5Hz)，4.238(s，4H)，4.127(m，4H)，3.541(m，2H)，3.238(m，2H)，1.841(m，2H)。
实施例8、一缩二乙氧羰基二拉米夫定胺的制备
用一缩二乙醇代替1，3-丙二醇，反应条件同实施例7，收率为33％。
核磁数据为：10.870(s，2H)，8.224(d，2H，J＝7Hz)，7.280(t，2H，J＝7.5Hz)，6.254(d，2H，J＝7.5Hz)，5.468(t，2H，J＝4Hz)，5.578(s，2H)，4.476(d，4H，J＝5Hz)，4.234(s，4H)，4.176(m，4H)，3.549(m，2H)，3.406(m，4H)，3.238(m，2H)。
实施例9、N，N-二甲基氨基亚甲基拉米夫定的制备
在100ml的三颈瓶中，加入10g拉米夫定，9ml的DMF-DMA，150ml二氯甲烷，在50下搅拌21个小时，反应液变澄清，减压蒸去溶剂，加入10ml的乙醚和10ml的乙醇的混合溶液，有白色固体析出，过滤，洗涤，干燥，得到N，N-二甲基氨基亚甲基拉米夫定11g，收率90％。
实施例10、二甘醇酰(二拉米夫定酯)的制备
取二甘醇酸1.75g，悬浮在20ml的二氯亚砜中，滴入1滴DMF，然后在室温下搅拌过夜，反应液变得澄清，减压蒸去未反应完的二氯亚砜，加入甲苯30ml，减压蒸干，除去残留的二氯亚砜，冷至室温，加入20ml二氯甲烷得二甘醇酰氯溶液，另取N，N-二甲基氨基亚甲基拉米夫定2g，吡啶10ml，DMAPO.2g，加入到50ml的三颈瓶中，在0℃下滴加二甘醇酰氯溶液，滴加完后，在室温下继续搅拌2小时，反应液浓缩至干，加入50ml二氯甲烷溶解，依次水、5％柠檬酸溶液、饱和碳酸氢钠溶液、饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，然后浓缩二氯甲烷溶液到15ml，加入5ml甲醇，搅拌下加入5ml 80％的醋酸溶液，反应过夜，蒸去溶剂，在残留的油状物中加入20ml的丙酮，有白色固体析出，过滤，洗涤，干燥得二甘醇酸(二拉米夫定酯)0.2g，收率26％。
其核磁数据为：7.683(d，2H，J＝7.5Hz)，7.200(d，4H，J＝25Hz)，6.239(t，2H，J＝6Hz)，5.761(d，2H，J＝7.5Hz)，5.379(t，2H，J＝4Hz)，4.443(d，4H，J＝5Hz)，4.301(s，4H)，3.420(m，2H)，3.101(m，2H)。
实施例11、亚硫基二乙酰(二拉米夫定酯)的制备
用亚硫基二乙酸代替二甘醇酸，按上法操作，收率为22％。
其核磁数据为：7.675(d，2H，J＝7.5Hz)，7.195(d，4H，J＝25Hz)，6.227(t，2H，J＝6Hz)，5.761(d，2H，J＝7.5Hz)，5.360(t，2H，J＝4Hz)，4.424(d，4H，J＝5Hz)，4.376(s，4H)，3.418(m，2H)，3.091(m，2H)。
实施例12、1，3-丙二氧羰基二拉米夫定酯
取N，N-二甲基氨基亚甲基拉米夫定4.0g悬浮在30ml二氯甲烷中，加入N-甲基吗啡啉3ml，搅拌使之溶解，再加入10ml吡啶，将它慢慢滴入到10％光气甲苯溶液中，滴完后继续搅拌1小时，另取1，3-丙二醇1.2ml，加入10ml二氯甲烷，慢慢滴加到上述制备的溶液中，然后搅拌过夜，反应完全后，怔去溶剂，加入30ml二氯甲烷溶解，依次水、5％柠檬酸溶液、饱和碳酸氢钠溶液、饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩二氯甲烷溶液到15ml，加入5ml甲醇，搅拌下加入5ml 80％的醋酸溶液，反应过夜，蒸去溶剂，在残留的油状物中加入20ml的丙酮，有白色固体析出，过滤，洗涤，干燥得0.2g，收率：27％
其核磁数据为：7.668(d，2H，J＝7.5Hz)，7.178(d，4H，J＝25Hz)，6.232(t，2H，J＝6Hz)，5.758(d，2H，J＝7.5Hz)，5.366(t，2H，J＝4Hz)，4.428(d，4H，J＝5Hz)，4.231(m，4H)，3.432(m，2H)，3.096(m，2H)，1.852(m，2H)。
实施例13、一缩二乙氧羰基二拉米夫定酯的制备
按实施例12操作，用一缩二乙醇代替1，3-丙二醇，反应的收率为：21％。
核磁数据为7.673(d，2H，J＝7.5Hz)，7.205(d，4H，J＝25Hz)，6.230(t，2H，J＝6Hz)，5.777(d，2H，J＝7.5Hz)， 5.373(t，2H，J＝4Hz)，4.435(d，4H，J＝5Hz)，4.106(m，4H)，3.436(m，2H)，3.410(m，4H)，3.102(m，2H)。
实施例14、一缩二乙氧羰基二拉米夫定酯片的处方
一缩二乙氧羰基二拉米夫定酯 300mg
淀粉 100mg
微晶纤维素 60mg
L-HPC 54.6mg
硬脂酸镁 5.4mg
CMC-Na 20mg
4％HPMC 适量
540mg/片
取淀粉/微晶纤维素、L-HPC各过80目筛备用，将原辅料按处方称好后以等量递加法混匀，加入适量的HPMC溶液，制成软材，过16目筛，制成湿粒，在60下℃的干燥箱中，干燥3小时，18目筛整粒，加如处方量的硬脂酸镁和CMC-Na，混合均匀，压片即得。
实施例15、二甘醇酰(二拉米夫定酯)对2.2.15细胞培养液内HBV DNA的抑制实验
2.2.15细胞(北京市肿瘤研究所提供)培养上清中HBV-DNA提取：2.2.15细胞接种6孔细胞培养板，培养后24小时加入不同浓度的，每4天换原浓度药液，培养第8天收取上清液，加入聚乙二醇沉淀，离心去上清，加蛋白酶K裂解细胞，加入酵母T-RNA酶，用苯酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)抽提2次，10000g离心，取上清，加无水乙醇沉淀核酸，真空抽干，重溶于TE缓冲液中作样品。
斑点杂交：取20ul(DNA含量25ug)，加变性液变性，用中和液将其中和，并以20×SSC缓冲液对倍稀释至1∶128倍，点样于硝酸纤维素膜上，放室温晾干后放置在80℃烤箱中干烤，以固定DNA。将硝酸纤维素膜装于塑料袋中加预杂交液，放置于水浴中预杂交2小时加入5×107CPM α32P-dCTP标记的变性HBV-DNA探针，于42℃水浴中杂交14-18小时。夹片，曝光，以常规方法冲洗X光片放射自显影。扫描仪扫描光片，用gel-pro软件(PowerLab公司提供)测定IOD值，计算抑制率及IC50。
2.2.15细胞培养液中HBV-DNA抑制＝CIOD-TIOD/CIOD×100％
注：CIOD：加药组IOD值TIOD：无药对照组IOD值
统计和分析：对HBV-DNA抑制效果以及gel-pro凝胶分析软件分析光片相对密度，计算抑制率及半数有效量(IC50)。
结果：二甘醇酰(二拉米夫定酯)的IC50为10.25ug，抑制率为80％。