银杏叶聚戊烯醇和银杏叶提取物(GBE)的制备方法及其用途 本发明涉及银杏叶聚戊烯醇和银杏叶提取物(GBE)的提取分离和制备方法以及银杏叶聚戊烯醇的用途。
银杏叶提取物(GBE)及其制剂中药用活性成分为黄酮甙和萜内酯，已广泛用于心脑血管和外周血管疾病的治疗和防治，国内外已有大量的专利报道。用银杏叶制备聚戊烯醇曾有日本专利报道。但以银杏叶为原料，先提取、制备聚戊烯醇，再从提取过的残渣中提取、制备含银杏萜内酯和黄酮甙的银杏叶提取物未见报道。
本发明的目的是提供一种以银杏叶为原料先以亲脂性溶剂提取、制备聚戊烯醇，再以提取后的银杏叶残渣为原料，用亲水性溶剂制备含银杏萜内酯和银杏黄酮甙的银杏叶提取物(GBE)的方法。本发明提供的制备方法，可同时生产银杏叶聚戊烯醇和银杏叶提取物(GBE)，也可单独生产银杏叶聚戊烯醇。
日本专利(JP昭58-201747和EP0166436A2)报道可用溶剂提取、柱层析分离、溶剂溶解分级、冷冻沉淀分离、分子精馏等方法制备银杏叶聚戊烯醇，从实施例看，主要是用银杏黄叶为原料，氯仿室温浸泡、硅胶柱分离制备聚戊烯醇乙酸酯、再经水解和硅胶柱分离，制备聚戊烯醇，产品得率仅有0.2％-0.3％。该方法工艺复杂，成本高，难以工业化生产；并且该方法旨在通过分离聚戊烯醇来合成多萜醇，从而对多萜醇及其磷酸酯(胺)进行相关药理研究和药物开发，但没有考虑银杏叶提取物(GBE)的加工，无法综合加工银杏叶的药用活性成分(如银杏叶黄酮甙、萜内酯和聚戊烯醇等)。
本发明方法采用的银杏叶为3-10年的银杏青叶，采集季节为8-9月，其聚戊烯醇的含量为0.8％以上，黄酮甙含量1.0％以上，萜内酯含量0.25％以上；单独制备银杏叶聚戊烯醇时，可采用3年以上树龄的银杏青叶，也可使用20年以上树龄的银杏黄叶，其聚戊烯醇含量为0.8％以上。制备的聚戊烯醇得率约0.3％-1.0％，银杏叶提取物(GBE)得率约2.0％-3.0％。
在本发明中，首先用亲脂性溶剂例如石油醚和正己烷提取银杏叶，然后用亲水性溶剂例如乙醇-水的混合溶剂提取剩下的银杏叶，依次提取分离银杏叶聚戊烯醇和银杏叶提取物。溶剂用量是银杏叶重量的5-15倍，热提取和冷浸提均可，优选热回流提取，真空浓缩回收溶剂，制备亲脂性溶剂抽提物软膏(见表1-2)和亲水性溶剂提取物。
在本发明制备聚戊烯醇的方法中，用无机强碱的水溶液例如NaOH-H2O、KOH-H2O或醇溶液(NaOH-EtOH/MeOH、KOH-EtOH/MeOH)，优选NaOH-H2O和NaOH-EtOH。碱-水溶液的浓度为3％-50％，优选10％-30％，碱-醇溶液的浓度为5％-35％，优选10％-20％(见表3)。皂化后萃取用非极性溶剂为C5-C7地脂肪烷烃、石油醚(60℃-90℃)、乙醚等，优选石油醚(60℃-90℃)和正己烷。溶剂沉淀是用石油醚(60℃-90℃)、乙醚、乙酸乙酯、丙酮等中的一种或几种溶剂对萃取相进行溶解和沉淀，温度为-20℃-50℃。去除不溶物，制备聚戊烯醇粗制品，其聚戊烯醇含量为50％-75％。柱层析分离是用氧化铝、硅胶、硅藻土、活性炭、纤维素等中一种或几种介质为填料对聚戊烯醇粗制品进行分离，优选氧化铝、硅胶和活性炭；柱层析分离所用淋冼剂为C5-C7的脂肪烷烃、石油醚(60℃-90℃)、乙醚、丙酮中的一种或几种，可以单独淋洗也可二种混合溶液淋洗。再经浓缩、干燥制备聚戊烯醇精制品，其聚戊烯醇的含量为70％-95％(见表4)。
表1.亲脂性溶剂对不同叶源银杏叶的浸提结果序 投入计量 软膏得率 聚戊烯醇含量 聚戊烯醇浸出率
叶源号 (g) (％) (％) (％)1 邳州苗叶
300 6.0 16.8 77.5
(3-5年)2 邳州苗叶 15 6.2 16.1 76.8
(5-10年)3 郯城苗叶 50 5.1 18.7 75.1
(3-5年)4 郯城苗叶 300 5.0 18.2 71.7
(5-10年)
泰兴老树5 叶(20年 500 4.4 12.0 75.4
以上)
从表1可知，选用的亲脂性溶剂对银杏叶中聚戊烯醇的浸出率均高于70％，但幼树叶中聚戊烯醇含量高，其浸膏中聚戊烯醇的含量也高于老树叶，同时根据我们以前的研究，银杏苗叶中萜内酯和黄酮苷等其它有效成分的含量都较老树叶高，为目前GBE生产用的主要原料。
因此本发明实施方案中，考虑银杏叶的综合利用，优选苗叶作为生产用叶，其聚戊烯醇＞0.8％，黄酮甙＞1.0％，萜内酯＞0.25％。
表2.不同浸提方式下亲脂性溶剂对聚戊烯醇浸提结果序
浸提方式 浸提条件 投料量 浸膏得率 聚戊烯醇含量 浸出率号 (g) (％) (％) (％)1 索氏提取 3-8hr 300 6.0 16.8 77.5
60～70℃2 热回流 2hr-5hr 300 4.4 16.2 54.8
80℃3 热回流 4hr-6hr 300 5.06 14.3 55.7
50℃4 室温冷泡 4天/1 300 3.4 27.1 70.9
天5 室温冷泡 2天/1 300 1.8 34.2 47.4
天
表3.亲脂性溶剂抽提物软膏的皂化和萃取结果序
叶源 软膏重量 皂化方式 聚戊烯醇萃取物收率号 (g) (％)1 邳州苗叶 15 NaOH-EtOH 382 泰兴老树 200 NaOH-EtOH 50.5
青叶3 泰兴老树 140 NaOH-EtOH 56
黄叶4 邳州苗叶 10 NaOH-H2O 31
表4.聚戊烯醇精制产品序号 叶源 产品得率(％) 聚戊烯醇含量(％)1 邳州苗叶 0.7～1.0 ＞752 郯城苗叶 0.7～1.0 ＞753 邳州苗叶 0.8～1.3 50～704 泰兴老树叶 0.5～0.6 40～505 邳州苗叶 0.3～0.6 ＞90
在本发明制备银杏叶提取物的实施方案中，离心沉降是将亲水性溶剂提取的浓缩物(比重为1.10-1.20)用水稀释至原银杏叶重量的3-6倍进行离心，去除不溶物。树脂吸附是将离心沉降后的澄清液用大孔吸附树脂(D101、D201、D130、AB-8)和聚酰胺树脂等介质进行吸附和解附，优选D130、AB-8和聚酰胺等树脂，分离制备银杏叶提取物。解附所用的洗脱液用脂肪族低级醇和水的混合溶剂，醇与水的比例为10％-80％，优选乙醇；有机萃取是用极性较小或非极性溶剂对柱层析解附液进行萃取，萃取剂为C5-C7的脂肪烷烃、石油醚(60℃-90℃)、乙醚和氯仿等；极性较小溶剂是指乙酸乙酯、乙醚、丁醇和丁酮等。优选氯仿、正己烷、乙醚、乙酸乙酯等。目的是控制GBE产品中的有机酚酸小于5ppm。干燥是对萃取后的水层进行浓缩、真空干燥或喷雾干燥。产品为银杏叶提取物(GBE)，其中黄酮甙＞24％，萜内酯＞6％，银杏酸＜5ppm。
本发明的另一目的是提供按本发明制备的银杏叶聚戊烯醇，作为主要的生物活性成分，用于抗肿瘤和辅助化疗肿瘤制剂。
按本发明方法制备的银杏叶聚戊烯醇属桦木聚戊烯醇型，其化学结构如下：
ω-单元 trans-单元 cis-单元 α-单元其中m＝2，n＝11-18，简写为ω-(trans)m-(cis)n-α。
本发明制备的聚戊烯醇制品以聚戊烯基单元数为17(C85)、18(C90)的聚戊烯醇为主，其中C85为25-30％，C90为30-40％，C90和C85之和约60-70％左右。不同链长聚戊烯醇的相对含量如下：C75：0-3％， C80：5-10％， C85：25-30％， C90：30-40％，C95：15-20％， C100：3-8％， C105：3-5％， C110：0-3％.
银杏叶聚戊烯醇与人体中多萜醇(Dolichol)结构和组成相似，在体内能代谢为多萜醇磷酸酯(Dolichyl phosphate)，参与细胞膜糖蛋白的生物合成。人体中多萜醇磷酸酯不足，将影响机体的免疫功能、细胞分裂和再生，并导致癌变。肿瘤病人的血、尿中多萜醇含量明显高于正常人。
在聚戊烯醇生物活性方面，拉脱维亚和俄罗斯报道了从欧洲赤松、云杉等针叶(RU2,053,992和GB2,310,138)分离制备的聚戊烯醇的毒药理研究结果，开发了聚戊烯醇制剂“ROPREN”，用于免疫功能调节。俄罗斯专利RU2005475还报道了利用西佰利亚云杉针叶聚戊烯醇合成聚戊烯醇磷酸酯，用于制备抗病毒药物。银杏叶聚戊烯醇组成和针叶聚戊烯醇有所不同，关于银杏叶聚戊烯醇的制剂和药效未见报道。
用本发明制备的聚戊烯醇进行的毒、药理研究表明，银杏叶聚戊烯醇无毒，其小鼠急性经口毒性试验结果表明，雌雄小鼠LD50值大于21.5g/kg，属无毒级；对移植性肿瘤具有明显的抑制作用，与化疗常用药联合使用，可提高抑瘤率，可用作肿瘤的防治和辅助化疗药。
聚戊烯醇为脂溶性油状物，其剂型可为软胶囊、口服液、注射液、乳剂等，优选软胶囊和乳剂。以下所述实施例，详细说明了本发明。实例1
取干燥银杏叶5kg，加60kg石油醚(60℃-90℃)，热回流提取，时间4小时，第二次提取加30kg石油醚(60℃-90℃)，重复以上操作。合并提取液，50℃下减压回收尽溶剂，得石油醚(60℃-90℃)抽提物220g，加3L25％ NaOH-EtOH溶液，70℃下反应3小时，回收尽乙醇，加水至3L，用石油醚和乙醚的混合溶液2L萃取，重复4次，合并萃取液，回收溶剂，得浓缩物75g；再分别用0.5L石油醚、乙醇和丙酮溶解，过滤去除不溶物，回收溶剂，得浓缩物48g，为聚戊烯醇粗品(50％-75％)。将粗品进行柱层析，取氧化铝0.2kg和硅胶0.5kg，分别用0.8L石油醚和乙醚及丙酮洗脱，将石油醚和乙醚洗脱液进行活性炭脱色，回收溶剂，浓缩物为淡棕色油状物，即为聚戊烯醇精制品30g(75％-95％)。
将石油醚提取后的银杏叶，加50kg50％乙醇水溶液，加热回流，温度为80-90℃，时间3小时，过滤，第二次提取加30kg50％乙醇水溶液，时间2小时，合并滤液，65℃下减压浓缩至比重为1.20，加水至30kg，离心沉淀，澄清液用5kgD130大孔树脂进行吸附，分别用15kg水、10kg20％乙醇-水、5kg70％乙醇-水洗脱，65℃下减压浓缩回收溶剂。将低浓度醇洗脱液浓缩至无醇味，用等体积的乙酸乙酯萃取3次，回收溶剂为乙酸乙酯浓缩物；再将高浓度醇洗脱液的浓缩物和乙酸乙酯浓缩物合并，用3L氯仿和正己烷萃取3次，水层浓缩后进行喷雾干燥，产品为淡黄色粉末130g，即为银杏叶提取物(GBE)，其中黄酮甙＞24％，萜内酯＞6％，银杏酸＜5ppm。实例2
取干燥银杏叶1kg，加10kg石油醚(60℃-90℃)，室温冷浸静泡3天，第二次加1kg石油醚(60℃-90℃)，重复以上操作。合并提取液，50℃下减压回收尽溶剂，得石油醚(60℃-90℃)抽提物30g，加0.2L35％NaOH-H2O溶液，70℃下反应4小时，回收尽乙醇，加水至0.5L，用石油醚和乙醚的混溶液0.3L萃取，重复4次，合并萃取液，回收溶剂，得浓缩物11g；再分别用0.5L石油醚、乙醇和丙酮溶解，过滤去除不溶物，回收溶剂，得浓缩物7.6g，为聚戊烯醇粗品(50％-75％)。将粗品进行柱层析，取氧化铝50g和硅胶50g，分别用100ML石油醚和乙醚及丙酮洗脱，将石油醚和乙醚洗脱液进行活性炭脱色，回收溶剂，浓缩物为淡棕色油状物，即为聚戊烯醇精制品4g(75％-95％)。
将石油醚提取后的银杏叶渣转移到提取罐，加入45％乙醇水溶液8L，加热回流，温度为80-90℃，时间3小时，过滤，第二次提取加6L25％乙醇水溶液，时间2小时，合并滤液，65℃下减压浓缩至比重为1.20，加水至4L，离心沉淀，澄清液用1kgAB-8大孔树脂和0.5kg聚酰胺树脂吸附，分别用2L水、2L20％乙醇-水、1L70％乙醇-水洗脱，65℃下减压浓缩回收溶剂。将低浓度醇洗脱液浓缩至无醇味，用等体积的乙酸乙酯萃取3次，回收溶剂为乙酸乙酯浓缩物；再将高浓度醇洗脱液的浓缩物和乙酸乙酯浓缩物合并，用0.5L氯仿和正己烷萃取3次，水层浓缩后进行喷雾干燥，产品为淡黄色粉末20g，即为银杏叶提取物(GBE)，其中黄酮甙＞24％，萜内酯＞6％，银杏酸＜5ppm。实例3
取干燥银杏叶2kg，加正己烷20kg，在60℃-80℃温度下用索氏提取装置提取6-8小时，提取液50℃下减压回收尽溶剂，得正己烷抽提物105g，加1.2L15％ KOH-EtOH溶液，70℃下反应2小时，冷却，用正己烷1L萃取，重复4次，合并萃取液，回收溶剂，得浓缩物44g；再分别用0.5L正己烷、乙醇和丙酮溶解，过滤去除不溶物，澄清液通过装有硅胶(0.5kg)的填充柱进行柱层析，用1L正己烷洗脱，洗脱液中加入0.2kg的活性炭，静置半小时，过滤，50℃下减压浓缩正己烷溶液，其浓缩物为淡黄色油状物12g，即为银杏叶聚戊烯醇精制品(75％-95％)。
剩下的叶渣，用于制备银杏叶提取物(GBE)，其方法同实例2。精制得60g浅黄色粉末，即为银杏叶提取物(GBE)，其中黄酮甙＞24％，萜内酯＞6％，银杏酸＜5ppm。银杏叶聚戊烯醇的药效试验结果如下：一.银杏叶聚戊烯醇抗移植性肿瘤的药效作用1.1 供试样品
银杏叶聚戊烯醇为橙黄色油状液体，聚戊烯醇活性成分的含量大于75％，生产批号991218，简写为GP-1。加少量吐温80，边研磨边加蒸馏水配制成所需浓度。1.2 材料
氟脲嘧啶(5-Fu)，南通制药厂生产，批号991018；盐酸阿霉素注射液(ADM)，深圳万乐药业有限公司制造，批号0001E2；环磷酰胺(CTX)，上海华联制药厂，批号000312；顺铂(PDD)，齐鲁制药厂，批号000201。以上试剂均以蒸馏水配制，4℃保存备用。1.3 受试动物
ICR小鼠雌雄各半，体重18-22克，由江苏省肿瘤防治研究所动物房提供，动物合格证号：苏动质字第97005号。1.4 小鼠移植性肿瘤模型
肝癌实体型Heps，肉瘤S180，艾氏癌实体型EC，均由中国科学院上海药物研究所提供，由江苏省肿瘤防治研究所动物房传代保种。1.5 实验方法
取健康、肿瘤生长旺盛的荷瘤小鼠，颈椎脱臼处死，无菌条件下取出瘤块，制备成单细胞悬液，调节细胞浓度为1×108/ml，接种于健康小鼠右前肢下，每只0.2毫升。接种后24小时随机分组，分对照组(给予相应溶媒)，给药组(给予不同剂量的GP-1)和阳性对照组(5-Fu或ADM)并开始分别灌胃给药(ig)，每日给药一次，连续8～10日，停药24小时后处死小鼠，称体重，解剖剥离瘤块，称瘤重，对照组平均瘤重1克以上可进行结果分析。按公式计算抑瘤率，t检验统计处理。抑瘤率≥30％以上判断为有一定的抗癌作用。
抑瘤率＝(1-给药组平均瘤重/对照组平均瘤重)×100％1.6 结果1.6.1 银杏叶聚戊烯醇(GP-1)对小鼠移植性肝癌Heps的抑制作用
以80mg/Kg，40mg/Kg，20mg/Kg和10mg/Kg灌胃给药，结果如表5.
表5 GP-1对小鼠移植性肝癌Heps的抑制作用(n＝30)分组 药物剂量 给药 体重变化(克) 瘤重(克) 抑瘤
mg/kg× 途径 给药前 给药后 x±S 率
d (％)H2O 25×8 ig 19.8±1.5 26.0±4.8 2.8±0.54GP-1 80×8 ig 119.2±1.7 26.1±4.4 1.88±0.51** 33.80GP-1 40×8 ig 19.1±1.3 23.3±2.9 1.71±0.63** 39.79GP-1 20×8 ig 19.1±1.8 25.1±4.7 2.19±0.48* 22.895-Fu 25×8 ig 19.1±1.8 25.1±4.7 1.04±0.19** 61.94H2O 25×8 ig 18.4±2.7 23.8±3.0 2.42±0.59GP-1 40×8 ig 18.6±2.8 24.2±2.4 1.63±0.39** 32.64GP-1 20×8 ig 18.6±2.3 23.8±2.6 1.77±0.30** 26.86GP-1 10×8 ig 18.7±2.6 24.8±2.2 1.62±0.37** 33.065-Fu 25×8 ig 18.2±0.83 19.6±2.2 0.81±0.21** 66.53
平均值(n＝30)H2O 25×8 ig 2.93±0.71GP-1 40×8 ig 1.71±0.56** 41.6GP-1 20×8 ig 1.95±0.43** 33.45GP-1 10×8 ig 1.96±0.34** 33.115-Fu 25×9 ig 1.21±0.33** 58.70H2O 25×9 ig 21.4±2.4 27.1±5.8 3.53±0.90GP-1 40×9 ig 21.4±2.9 25.0±3.6 1.79±0.64** 49.29GP-1 20×9 ig 21.3±2.5 24.5±3.4 1.89±0.49** 46.46GP-1 10×9 ig 21.7±2.1 26.2±2.6 2.29±0.45** 35.135-Fu 25×9 ig 21.8±2.2 24.2±2.1 1.77±0.49** 49.86*p＜0.01 **p＜0.005
表5实验结果表明：GP-1对移植性肝癌Heps有较好的抑制作用，实验最高抑瘤率达49.29％。给药剂量为40.0mg/kg，20.0mg/kg和10.0mg/kg的三次实验平均抑瘤率分别为40.57％，32.07％和34.11％。从表5看，给药9天较给药8天的抑瘤率更高并呈明显的量效关系，提示用药时间增长，似可提高GP-1对移植性肝癌Heps的抑瘤效果。1.6.2 银杏叶聚戊烯醇(GP-1)对小鼠移植性肉瘤S180的抑制作用
GP-1以40mg/Kg，20mg/Kg和10mg/Kg灌胃给药，对移植性肉瘤S180的抑制作用见表6.
表6 GP-1对小鼠移植性肉瘤S180的抑制作用(n＝10)分组 药物剂 给药 体重变化(克) 瘤重(克) 抑瘤率
量mg/kg 途径 给药前 给药后 x±S (％)
×dH2O 25×8 ig 19.2±2.2 29.3±2.2 2.02±0.96GP-1 40×8 ig 19.7±1.6 30.0±2.6 1.2±0.45** 37.13GP-1 20×8 ig 19.4±1.4 30.1±3.0 1.28±0.21* 36.63GP-1 10×8 ig 19.0±2.0 29.2±2.4 1.08±0.28* 46.535-Fu 25×8 ig 19.8±1.2 24.5±2.5 0.42±0.05*** 79.21H2O 25×8 ig 20.1±3.8 29.9±4.8 2.85±0.59GP-1 10×8 ig 20.0±3.4 27.4±2.0 1.13±0.52*** 60.35GP-1 40×8 ig 21.5±2.0 29.5±4.5 0.70±0.25*** 60.895-Fu 25×8 ig 0.60±0.23*** 66.48
平均值(n＝10)H2O 25×8 ig 2.02±0.96GP-1 40×8 ig 1.27±0.45** 37.13 GP-1 20×8 ig 1.28±0.21* 36.63GP-1 10×8 ig 1.08±0.28* 46.535-Fu 25×8 ig 0.79±0.28** 60.81*p＜0.01 **p＜0.005 ***p＜0.001
从表6.看三个实验剂量组的GP-1对移植性肉瘤S180都有较强的抑制，40mg/Kg和20mg/kg剂量组平均抑瘤率相差不大，均为37％左右，而低剂量组10mg/kg平均抑瘤率可达46.53％，最高时可达60.89％，显示低剂量的抑瘤率更高。1.6.3 银杏叶聚戊烯醇(GP-1)对小鼠移植性艾氏癌EC的抑制作用
GP-1以40mg/Kg，20mg/Kg和10mg/Kg灌胃给药，对移植性艾氏癌EC抑制作用见表7.
表7 GP-1对小鼠移植性艾氏癌EC的抑制作用(n＝30)分组 药物剂量 给药 体重变化(克) 瘤重(克) 抑瘤
mg/kg×d 途径 给药前 给药后 x±S 率
(％)H2O 25×8 ig 19.3±1.8 27.0±1.7 1.43±0.33GP-1 40×8 ig 19.0±1.1 24.5±2.2 0.72±0.21** 49.65GP-1 20×8 ig 19.2±1.6 26.8±2.0 0.96±0.26** 32.87GP-1 10×8 ig 19.1±1.6 25.7±2.3 0.93±0.20*** 34.965-Fu 25×8 ig 19.0±1.2 24.4±2.2 0.52±0.16*** 63.64
平均值(n＝30)H2O 25×8 ig 1.62±0.61GP-1 40×8 ig 0.77±0.23** 52.47GP-1 20×8 ig 1.08±0.32** 33.33GP-1 10×8 ig 0.97±0.32*** 40.125-Fu 25×8 ig 0.56±0.16*** 65.43*p＜0.01 **p＜0.005 ***p＜0.001
表7.实验结果表明GP-1对移植性艾氏癌EC抑制作用较强，40mg/Kg，20mg/Kg和10mg/Kg的平均抑瘤率为52.47％、33.33％、40.12％，但量效关系不明显，低剂量10mg/Kg抑瘤率高于20mg/Kg剂量抑瘤率，高剂量组40mg/Kg实验最高抑瘤率达52.47％(p＜0.005)。
上述实验结果表明银杏叶聚戊烯醇(GP-1)对移植性肿瘤Heps，S180和EC都有较好的抑制效果，其最高抑瘤率分别为49.29％、60.89％和52.47％，且对S180似较敏感。因此GP-1有较强的抗肿瘤作用。二.银杏叶聚戊烯醇(GP-1)辅助化疗肿瘤作用1.1 受试样品、材料、受试动物、S180瘤谱和实验方法见GP-1抗移 植性肿瘤的1.1、1.2、1.3、1.4、1.5。2.2 实验结果
选择临床常用化疗药如盐酸阿霉素(ADM)、环磷酰胺(CTX)和顺铂(PDD)对移植性肿瘤肉瘤S180进行抑瘤实验，同时分别联合银杏叶聚戊烯醇(GP-1)对移植性肿瘤肉瘤S180进行抑瘤实验，结果如表8。表8 GP-1联合化疗药对移植性肿瘤肉瘤S180的抑瘤作用(n＝10)分组 药物剂量 给药 瘤重(克) 抑瘤 抑瘤提高
mg/kg×d 途径 x±S 率(％) 率(％)H2O 25×8 ig 1.85±0.59GP-1 10×8 ig 1.13±0.52** 60.35GP-1+ADM (20+1)×8 ig 0.65±0.26*** 77.10 8.90GP-1+ADM (10+1)×8 ig 1.04±0.30*** 63.51ADM 1×8 ig 0.83±0.35*** 70.88H2O 25×10 ig 2.09±0.38GP-1 5×10 ig 1.30±0.37*** 37.80GP-1+CTX (5+25)×10 ig 0.63±0.11*** 69.89 14.10GP-1+PDD (5+1)×10 ig 0.83±0.18*** 60.29 40.01GP-1+5-Fu (5+25)×10 ig 0.90±0.23*** 56.94 22.69CTX 25×10 ig 0.81±0.22*** 61.24PDD 1×10 ig 1.19±0.22*** 43.065-Fu 25×10 ig 1.12±0.33*** 46.41*p＜0.01 **p＜0.005 ***p＜0.001
从表8的结果可知，5mg/kg GP-1联合CTX、PDD、5-Fu明显提高对S180的疗效(p＜0.001)，尤其是辅助PDD作用更加明显，可使1.0mg/kg PDD抑瘤率从43.06％提高到60.29％。同剂量的CTX、PDD、5-Fu对S180抑瘤提高率分别为14.10％、40.01％、22.69％。GP-1与ADM联合化疗可提高ADM的疗效，20.0mg/kg的GP-1可使1.0mg/kg的ADM的抑瘤率从70.88％提高到77.10％(p＜0.001)。
因此，银杏叶聚戊烯醇对移植性肿瘤具有明显的辅助化疗作用。