抗体.pdf

1、(10)申请公布号 CN 102482355 A (43)申请公布日 2012.05.30 CN 102482355 A *CN102482355A* (21)申请号 201080035456.1 (22)申请日 2010.06.09 0909906.0 2009.06.09 GB 61/185,448 2009.06.09 US 61/302,768 2010.02.09 US C07K 16/28(2006.01) (71)申请人 奥菲技术科学研究院 地址 挪威奥斯陆 (72)发明人 拉维尼娅黛安娜奇科尔塔什贡 纳松 迪德里克派于斯 (74)专利代理机构 北京邦信阳专利商标代理有 限公司

2、11012 代理人 黄泽雄 (54) 发明名称 抗体 (57) 摘要 本发明提供抗体， 所述抗体结合人 CC 趋化因 子受体 4(CCR4) 的胞外域的表位并能够抑制巨噬 细胞来源的趋化因子 (MDC) 和 / 或胸腺和激活调 节的趋化因子 (TARC) 与 CCR4 的结合。本发明还 提供特别是在医药和诊断领域中， 包含这样抗体 的免疫交联物和组合物以及包括这样抗体的方法 和应用。 (30)优先权数据 (85)PCT申请进入国家阶段日 2012.02.09 (86)PCT申请的申请数据 PCT/GB2010/001130 2010.06.09 (87)PCT申请的公布数据 WO2010/14

3、2952 EN 2010.12.16 (51)Int.Cl. 权利要求书 7 页 说明书 102 页 序列表 57 页 附图 29 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 7 页 说明书 102 页 序列表 57 页 附图 29 页 1/7 页 2 1. 一种分离的人抗体， 所述抗体结合人 CC 趋化因子受体 4(CCR4) 的胞外域中的表位 并能够抑制巨噬细胞来源的趋化因子 (MDC) 和 / 或胸腺和激活调节的趋化因子 (TARC) 与 CCR4 的结合。 2. 一种根据权利要求 1 所述的抗体， 其特征在于， 所述抗体 (a)包括至少一个包含三个CDR

4、的重链可变区和至少一个包含三个CDR的轻链可变区， 其中所述重链可变区包括 ： (i) 具有 SEQ ID NO ： 125 的氨基酸序列的可变重链 (VH)CDR1 ； (ii) 具有 SEQ ID NO ： 127 的氨基酸序列的 VH CDR2 ； 和 (iii) 具有 SEQ ID NO ： 9 的氨基酸序列的 VH CDR3 ； 或 (b) 包括至少一个包含三个 CDR 的重链可变区和至少一个包含三个 CDR 的轻链可变区 并且是可以与抗体 (a) 竞争结合人 CCR4 的抗体。 3. 一种根据权利要求 2 所述的抗体， 其特征在于， (i)SEQ ID NO ： 125 的位置 1

5、 处， X S 或 N ； 和 / 或 SEQ ID NO ： 125 的位置 4 处， X I 或 M ； 和 / 或 (ii)SEQ ID NO ： 127 的位置 1 处， X G 或 A ； 和 / 或 SEQ ID NO ： 127 的位置 3 处， X I 或 S ； 和 / 或 SEQ ID NO ： 127 的位置 5 处， X I 或 S ； 和 / 或 SEQ ID NO ： 127 的位置 6 处， X F 或 G ； 和 / 或 SEQ ID NO ： 127 的位置 8 处， X T 或 S ； 和 / 或 SEQ ID NO ： 127 的位置 9 处， X A 或

6、 T。 4. 一种根据权利要求 2 或 3 所述的抗体， 其特征在于， 所述抗体 (a) 和 / 或 (b) 的所述 轻链可变区包括 ： (iv) 具有 SEQ ID NO ： 129 的氨基酸序列的可变轻链 (VL)CDR1 ； (v) 具有 SEQ ID NO ： 131 的氨基酸序列的 VL CDR2 ； 和 / 或 (vi) 具有 SEQ ID NO ： 137 或 133 的氨基酸序列的 VL CDR3。 5. 一种根据权利要求 4 所述的抗体， 其特征在于， (iv)SEQ ID NO ： 129 的位置 3 处， X S 或 G ； 和 / 或 SEQ ID NO ： 129 的

7、位置 4 处， X T 或 G ； 和 / 或 SEQ ID NO ： 129 的位置 9 处， X S 或 R ； 和 / 或 SEQ ID NO ： 129 的位置 10 处， X R 或 H ； 和 / 或 SEQ ID NO ： 129 的位置 11 处， X Y 或 F ； 和 / 或 SEQ ID NO ： 129 的位置 13 处， X Y 或 F ； 和 / 或 (v)SEQ ID NO ： 131 的位置 3 处， X H 或 N ； 和 / 或 (vi)SEQ ID NO ： 133 或 137 的位置 2 处， X A 或 V ； 和 / 或 SEQ ID NO ： 13

8、3 或 137 的位置 6 处， X S 或 T。 6. 一种根据权利要求 2-5 任意一项所述的抗体， 其特征在于， 所述抗体 (a) 和 / 或 (b) 的所述重链可变区包括 ： (i) 具有 SEQ ID NO ： 126、 135 或 136 的氨基酸序列的可变重链 (VH)CDR1 ； (ii) 具有 SEQ ID NO ： 128 的氨基酸序列的 VH CDR2 ； 和 / 或 权 利 要 求 书 CN 102482355 A 2 2/7 页 3 (iii) 具有 SEQ ID NO ： 9 的氨基酸序列的 VH CDR3 ； 和 / 或 其中所述抗体 (a) 或 (b) 的所述轻

9、链可变区包括 ： (iv) 具有 SEQ ID NO ： 130 的氨基酸序列的可变轻链 (VL)CDR1 ； (v) 具有 SEQ ID NO ： 132 的氨基酸序列的 VL CDR2 ； 和 / 或 (vi) 具有 SEQ ID NO ： 134 或 138 的氨基酸序列的 VL CDR3。 7. 一种根据权利要求 2-6 任意一项所述的抗体， 其特征在于， 所述抗体 (a) 和 / 或 (b) 的所述重链可变区包括 ： (i) 具有 SEQ ID NO ： 101 或 7 的氨基酸序列的可变重链 (VH)CDR1 ； (ii) 具有 SEQ ID NO ： 8 的氨基酸序列的 VH C

10、DR2 ； 和 / 或 (iii) 具有 SEQ ID NO ： 9 的氨基酸序列的 VH CDR3 ； 和 / 或 其中所述抗体 (a) 或 (b) 的所述轻链可变区包括 ： (iv) 具有 SEQ ID NO ： 10 或 108 的氨基酸序列的可变轻链 (VL)CDR1 ； (v) 具有 SEQ ID NO ： 11 或 110 的氨基酸序列的 VL CDR2 ； 和 / 或 (vi) 具有 SEQ ID NO ： 12 或 112 的氨基酸序列的 VL CDR3。 8.一种根据权利要求7的抗体， 其特征在于， 所述抗体(a)和/或(b)的所述重链可变 区包括 ： (i) 具有 SEQ

11、ID NO ： 101 的氨基酸序列的可变重链 (VH)CDR1 ； (ii) 具有 SEQ ID NO ： 8 的氨基酸序列的 VH CDR2 ； 和 (iii) 具有 SEQ ID NO ： 9 的氨基酸序列的 VH CDR3 ； 和 其中所述抗体 (a) 或 (b) 的所述轻链可变区包括 ： (iv) 具有 SEQ ID NO ： 10 的氨基酸序列的可变轻链 (VL)CDR1 ； (v) 具有 SEQ ID NO ： 11 的氨基酸序列的 VL CDR2 ； 和 (vi) 具有 SEQ ID NO ： 12 的氨基酸序列的 VL CDR3。 9.一种根据权利要求7所述的抗体， 其特征在

12、于， 所述抗体(a)和/或(b)的所述重链 可变区包括 ： (i) 具有 SEQ ID NO ： 7 的氨基酸序列的可变重链 (VH)CDR1 ； (ii) 具有 SEQ ID NO ： 8 的氨基酸序列的 VH CDR2 ； 和 (iii) 具有 SEQ ID NO ： 9 的氨基酸序列的 VH CDR3 ； 和 其中所述抗体 (a) 或 (b) 的所述轻链可变区包括 ： (iv) 具有 SEQ ID NO ： 108 的氨基酸序列的可变轻链 (VL)CDR1 ； (v) 具有 SEQ ID NO ： 110 的氨基酸序列的 VL CDR2 ； 和 (vi) 具有 SEQ ID NO ： 1

13、12 的氨基酸序列的 VL CDR3。 10. 一种根据权利要求 7 所述的抗体， 其特征在于， 所述抗体 (a) 和 / 或 (b) 的所述重 链可变区包括 ： (i) 具有 SEQ ID NO ： 7 的氨基酸序列的可变重链 (VH)CDR1 ； (ii) 具有 SEQ ID NO ： 8 的氨基酸序列的 VH CDR2 ； 和 (iii) 具有 SEQ ID NO ： 9 的氨基酸序列的 VH CDR3 ； 和 其中所述抗体 (a) 或 (b) 的所述轻链可变区包括 ： (iv) 具有 SEQ ID NO ： 10 的氨基酸序列的可变轻链 (VL)CDR1 ； 权 利 要 求 书 CN

14、102482355 A 3 3/7 页 4 (v) 具有 SEQ ID NO ： 11 的氨基酸序列的 VL CDR2 ； 和 (vi) 具有 SEQ ID NO ： 12 的氨基酸序列的 VL CDR3。 11. 一种根据权利要求 1-10 任意一项所述的抗体， 其特征在于， 所述抗体 (a) 具有 VH 域和 / 或 VL 域， 其中所述 VH 域具有 SEQ ID NO ： 139 的序列或与其有至少 70一致性的序 列， 所述 VL 域具有 SEQ ID NO ： 140 的序列或与其有至少 70一致性的序列。 12. 一种根据权利要求 11 所述的抗体， 其中所述抗体 (a) 具有

15、VH 域和 / 或 VL 域， 其 中所述 VH 域具有 SEQ ID NO ： 71 或 105 的序列或与 SEQ ID NO ： 71 或 105 之一有至少 70 一致性的序列， 所述 VL 域具有 SEQ ID NO ： 72 或 115 之一的序列或与 SEQ ID NO ： 72 或 115 有至少 70一致性的序列。 13. 一种根据权利要求 2 所述的抗体， 其特征在于， 所述抗体 (b) 的所述重链可变区包 括 ： (i) 具有 SEQ ID NO ： 125 的氨基酸序列或与其基本同源的序列的可变重链 (VH)CDR1 ； (ii) 具有 SEQ ID NO ： 127

16、的氨基酸序列或与其基本同源的序列的 VH CDR2 ； 和 / 或 (iii) 具有 SEQ ID NO ： 9 的氨基酸序列或与其基本同源的序列的 VH CDR3 ； 和 / 或 其中所述抗体 (b) 的所述轻链可变区包括 ： (iv)具有SEQ ID NO ： 129的氨基酸序列或与其基本同源的序列的可变轻链(VL)CDR1 ； (v) 具有 SEQ ID NO ： 131 的氨基酸序列或与其基本同源的序列的 VL CDR2 ； 和 / 或 (vi) 具有 SEQ ID NO ： 133 或 137 的氨基酸序列或与其基本同源的序列的 VL CDR3 ； 其中所述基本同源序列是与给出的 C

17、DR 序列相比包含 1、 2 或 3 个氨基酸取代的序列， 或其中所述基本同源序列是包含在给出的 CDR 序列中具有保守氨基酸取代的序列。 14.一种根据权利要求2-13任意一项所述的抗体， 其特征在于， 所述抗体(b)可以结合 与所述抗体 (a) 结合的表位基本相同的表位。 15. 一种根据权利要求 1-14 任意一项所述的抗体， 其特征在于， 所述抗体是完全人抗 体。 16. 根据权利要求 1-15 任意一项所述的抗体， 其特征在于， 所述抗体包括一种抗体重 链恒定区和 / 或一种抗体轻链恒定区的全部或一部分。 17. 根据权利要求 16 所述的抗体， 其特征在于， 所述抗体是 IgG 形

18、式的抗体。 18. 根据权利要求 16 或权利要求 17 所述的抗体， 其特征在于， 所述抗体包括重链和轻 链， 所述重链包括 SEQ ID NO ： 91、 119 或 123 的氨基酸序列或与其有至少 70一致性的序 列， 所述轻链包括 SEQ ID NO ： 92、 120 或 124 的氨基酸序列或与其有至少 70一致性的序 列。 19. 根据权利要求 1-18 中任意一项所述的抗体， 其特征在于， 所述抗体具有改变的糖 基化模式。 20. 根据权利要求 19 所述的抗体， 其特征在于， 连接至所述抗体的 Fc 区的全部复 合 N- 糖苷连接的糖链中至少 10、 20、 30、 40、

19、 50、 60、 75、 80、 85、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97、 98或至少 99是其中岩藻糖没有连接至所述糖 链的还原末端的 N- 乙酰氨基葡萄糖的糖链。 21. 根据权利要求 1-20 任意一项所述的抗体， 其特征在于， 所述抗体是抗体的抗原结 合片段。 权 利 要 求 书 CN 102482355 A 4 4/7 页 5 22.根据权利要求21所述的抗体， 其特征在于， 所述抗体的抗原结合片段是Fab 、 Fab、 F(ab )2、 单域抗体、 TandAb 二聚物、 Fv、 scFv、 dsFv、 ds-scFv、 Fd、 线性抗体、 小体、 双

20、价抗 体、 双特异抗体片段、 双靶向抗体、 三靶向抗体、 sc- 双价抗体、 () 抗体、 BiTE、 DVD-Ig、 SIP、 SMIP、 DART 或包括一个或多个 CDR 的小抗体类似物。 23. 一种免疫交联物， 包括与至少第二种治疗试剂或诊断试剂连接的权利要求 1-22 任 意一项的抗体。 24. 根据权利要求 23 所述的免疫交联物， 其特征在于， 所述抗体与至少一种放射疗法 试剂、 化学疗法试剂、 抗血管新生试剂、 诱导细胞凋亡试剂、 抗微管蛋白药物、 抗细胞或细胞 毒性试剂、 类固醇、 细胞因子拮抗剂、 细胞因子表达抑制剂、 趋化因子拮抗剂、 趋化因子表达 抑制剂、 抗炎症皮质

21、类固醇或 NSAID、 凝结剂或抗病毒试剂连接， 其中所述抗病毒试剂优选 地选自核苷、 核苷逆转录酶抑制剂、 非核苷逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂。 25. 根据权利要求 24 所述的免疫交联物， 其特征在于， 所述抗体与道诺霉素、 阿霉素、 阿糖胞苷、 6- 硫鸟嘌呤、 米托蒽醌、 白消安 (Myleran)、 达沙替尼 (SprycelTM)、 强的松、 硫 酸长春新碱 (Oncovin)、 苯丁酸氮芥、 氟达拉滨、 喷司他丁或克拉屈滨连接。 26. 一种组合物， 包括至少第一种根据权利要求 1-22 任意一项的抗体或其免疫交联 物， 其中所述组合物优选地是制药学可接受的组合物。 27. 根

22、据权利要求 26 所述的组合物， 其特征在于， 所述组合物是脂质体或纳米粒子组 合物。 28. 根据权利要求 26 或 27 所述的组合物， 其特征在于， 所述组合物进一步包括至少第 二种治疗试剂。 29. 一种核酸分子， 包括编码权利要求 1-22 任意一项所述的抗体的核苷酸序列区。 30. 根据权利要求 29 所述的核酸分子， 其特征在于， 所述核苷酸序列区具有 SEQ ID NO ： 103、 SEQ ID NO ： 113或SEQ ID NO ： 45的核苷酸序列或与任意一条所述序列有至少70 一致性的序列。 31. 一种包括权利要求 29 或 30 所述的核酸分子的表达载体。 32.

23、 一种包括权利要求 29 或 30 的核酸分子或权利要求 31 的表达载体的宿主细胞。 33. 一种包括权利要求 29 或 30 的核酸分子或权利要求 31 的表达载体的病毒。 34. 一种试剂盒， 在至少第一个容器中包括 ： (a) 权利要求 1-22 任意一项所述的抗体 ； (b) 权利要求 23-25 任意一项所述的免疫交联物 ； (c) 权利要求 26-28 任意一项所述的组合物 ； (d) 权利要求 29 或 30 所述的核酸分子 ； (e) 权利要求 31 所述的表达载体 ； (f) 权利要求 32 所述的宿主细胞 ； 或 (g) 权利要求 33 所述的病毒。 35. 一种制备抗体

24、的方法， 包括 ： (a) 在有效表达编码的抗体的条件下培养包含权利要求 31 的表达载体的宿主细胞， 和 (b) 从所述宿主细胞中获得表达的抗体。 36.一种结合CCR4的方法， 包括用权利要求1-22任意一项所述的抗体或其免疫交联物 权 利 要 求 书 CN 102482355 A 5 5/7 页 6 接触包含 CCR4 的组合物。 37. 一种检测 CCR4 的方法， 包括在有效形成所述 CCR4 和所述抗体的复合物的条件下， 用权利要求 1-22 任意一项所述的抗体或其免疫交联物接触疑似含有 CCR4 的组合物， 并检 测所形成复合物。 38. 一种诊断动物中与 CCR4 表达相关的疾

25、病的方法， 包括步骤 ： (a) 用权利要求 1-22 任意一项所述的抗体或其免疫交联物接触动物或取自所述动物 的检测样品。 39. 根据权利要求 38 所述的方法， 进一步包括步骤 ： (b)测量或检测所述动物或检测样品中抗体-抗原复合物的存在和/或量和/或位置 ； 以及， 可选地， (c) 将所述动物或检测样品中抗体 - 抗原复合物的存在和 / 或量与对照进行比较。 40. 根据权利要求 38-39 任意一项所述的方法， 其中所述与 CCR4 相关的疾病是由 CCR4 介导的疾病或其特征是 CCR4+ 细胞的异常增殖的疾病。 41. 根据权利要求 38-40 任意一项所述的方法， 其特征在

26、于， 所述疾病是癌症、 免疫紊 乱或炎症情况。 42. 根据权利要求 38-41 任意一项所述的方法， 其特征在于， 所述检测样品中有增加量 的 CCR4 为诊断出肿瘤细胞。 43. 根据权利要求 38-41 任意一项所述的方法， 其特征在于， 所述检测样品中有增加量 的 CCR4 为诊断出病毒感染的细胞。 44. 根据权利要求 43 所述的方法， 其特征在于， 所述病毒感染的细胞感染有选自爱泼 斯坦 - 巴尔病毒和 HIV 的病毒。 45. 根据权利要求 38-44 任意一项所述的方法， 其特征在于， 所述抗体是包括所述抗体 的至少两个抗原结合片段的二价或多价抗体。 46. 一种减少动物中与

27、 CCR4 表达相关的免疫抑制的方法， 包括对所述动物施用权利要 求 1-22 任意一项所述的抗体或其免疫交联物， 施用量为在所述动物中有效形成所述抗体 和 CCR4 的复合物， 从而减少动物中与 CCR4 表达相关的免疫抑制。 47. 根据权利要求 46 所述的方法， 其特征在于， 所述动物患有癌症或病毒感染。 48. 根据权利要求 38-47 任意一项所述的方法， 其特征在于， 所述动物是人受试者。 49. 一种治疗动物中与 CCR4 表达或活性相关的疾病的方法， 包括对患有所述疾病的动 物施用治疗有效量的权利要求 1-22 任意一项所述的抗体或其免疫交联物。 50. 根据权利要求 49

28、所述的方法， 其特征在于， 所述与 CCR4 表达或活性相关的疾病是 由 CCR4 介导的疾病或特征是 CCR4+ 细胞的异常增殖的疾病。 51. 根据权利要求 49-50 任意一项所述的方法， 其特征在于， 所述疾病是癌症、 炎症疾 病、 免疫疾病或传染病， 优选地选自 ： (a) 过敏性疾病， 如全身过敏或超敏反应、 药物过敏 症、 过敏性支气管肺曲霉病 (ABPA)、 虫刺过敏症和食物过敏症 ； (b) 炎性肠疾病， 如克罗恩 氏病、 溃疡性结肠炎、 回肠炎和肠炎 ； (c) 阴道炎 ； (d) 牛皮癣和炎症性皮肤病， 如皮炎、 湿 疹、 遗传过敏性皮炎、 过敏性接触皮炎、 风疹和瘙痒症

29、 ； (e) 血管炎 ； (f) 脊柱关节病 ； (g) 硬 皮病 ； (h) 哮喘和呼吸过敏性疾病， 如过敏性哮喘、 过敏性鼻炎、 慢性阻塞性肺病、 超敏肺疾 病等等 ； (i) 自身免疫疾病， 如关节炎 ( 包括风湿性的和牛皮癣的 )、 多发性硬化、 系统性红 权 利 要 求 书 CN 102482355 A 6 6/7 页 7 斑狼疮、 I型糖尿病、 肾小球性肾炎等等 ； (j)移植排斥(包括同种异体移植排斥和移植物抗 宿主病 ) 和 (k) 不期望的炎症反应需要被抑制的其它疾病， 如动脉硬化、 肌炎、 T 细胞介导 的神经变性疾病、 多发性硬化、 脑炎、 脑膜炎、 肝炎、 肾炎、 脓毒

30、病、 结节病、 过敏性结膜炎、 耳 炎、 卡斯托曼病、 窦炎、 LPS 诱导的内毒素休克、 白塞病和痛风 ； (I) 癌症， 优选地乳癌、 结肠 直肠癌、 食道癌、 胃癌、 肝细胞癌、 肺癌、 黑色素瘤、 卵巢癌、 胰腺癌、 成人T细胞白血病/淋巴 瘤 (ATL)、 外周 T 细胞淋巴瘤、 非特异的弥漫性大 B 细胞淋巴瘤、 霍奇金淋巴瘤、 B 细胞慢性 淋巴细胞白血病、 蕈状真菌病、 塞扎里综合征 ； (m) 传染病， 如爱泼斯坦 - 巴尔病毒 (EBV) 感 染、 HIV 感染和其它病毒感染。 52. 根据权利要求 49-51 任意一项所述的方法， 其特征在于， 所述抗体或其免疫交联物 引

31、起以下一种或多种 ： (a) 诱导 CCR4+ 细胞的 ADCC ； (b) 抑制 CCR4 与至少 MDC 和 / 或 TARC 结合 ； (c) 诱导体内抗肿瘤效果 ； (d) 诱导 CCR4+ 细胞的 CDC ； (e)抑制对CCR4配体的CCR4介导的细胞应答， 优选地， 抑制对CCR4配体的应答中胞内 钙离子浓度的增加。 53. 根据权利要求 49-52 任意一项所述的方法， 进一步包括对所述动物施用第二种治 疗试剂。 54. 根据权利要求 49-53 任意一项所述的方法， 其特征在于， 所述抗体或其免疫交联物 减少了所述动物中与 CCR4 相关的免疫抑制。 55. 根据权利要求 4

32、9-54 任意一项所述的方法， 其特征在于， 所述抗体是包括所述抗体 的至少两个抗原结合片段的二价或多价抗体。 56. 根据权利要求 49-53 任意一项所述的方法， 其特征在于， 所述动物是人受试者。 57. 根据权利要求 1-22 任意一项所述的抗体或其免疫交联物， 用于治疗、 成像或诊断。 58.根据权利要求57所述的抗体或免疫交联物用于治疗、 成像或诊断与CCR4表达或活 性相关的情况。 59. 根据权利要求 58 所述的抗体或免疫交联物， 其特征在于， 所述与 CCR4 相关的情况 是由 CCR4 介导的疾病或特征是 CCR4+ 细胞异常增殖的疾病。 60. 根据权利要求 59 所述

33、的抗体或免疫交联物， 其特征在于， 所述疾病是癌症、 炎症疾 病、 免疫疾病或传染病。 61. 根据权利要求 1-22 任意一项所述的抗体在制备治疗以下疾病的药物中的应用， 所述疾病为病毒感染， 优选地， 选自 (a) 过敏性疾病， 如全身过敏或超敏反应、 药物过敏症、 过敏性支气管肺曲霉病 (ABPA)、 虫刺过敏症和食物过敏症 ； (b) 炎性肠疾病， 如克罗恩氏 病、 溃疡性结肠炎、 回肠炎和肠炎 ； (c) 阴道炎 ； (d) 牛皮癣和炎症性皮肤病， 如皮炎、 湿疹、 遗传过敏性皮炎、 过敏性接触皮炎、 风疹和瘙痒症 ； (e) 血管炎 ； (f) 脊柱关节病 ； (g) 硬皮 病 ；

34、 (h) 哮喘和呼吸过敏性疾病， 如过敏性哮喘、 过敏性鼻炎、 慢性阻塞性肺病、 超敏肺疾病 等等 ； (i) 自身免疫疾病， 如关节炎 ( 包括风湿性的和牛皮癣的 )、 多发性硬化、 系统性红斑 狼疮、 I 型糖尿病、 肾小球性肾炎等等 ； (j) 移植排斥 ( 包括同种异体移植排斥和移植物抗 宿主病 ) 和 (k) 不期望的炎症反应需要被抑制的其它疾病， 如动脉硬化、 肌炎、 T 细胞介导 权 利 要 求 书 CN 102482355 A 7 7/7 页 8 的神经变性疾病、 多发性硬化、 脑炎、 脑膜炎、 肝炎、 肾炎、 脓毒病、 结节病、 过敏性结膜炎、 耳 炎、 卡斯托曼病、 窦炎、

35、 LPS 诱导的内毒素休克、 白塞病和痛风 ； (I) 癌症， 优选地乳癌、 结肠 直肠癌、 食道癌、 胃癌、 肝细胞癌、 肺癌、 黑色素瘤、 卵巢癌、 胰腺癌、 成人T细胞白血病/淋巴 瘤 (ATL)、 外周 T 细胞淋巴瘤、 非特异的弥漫性大 B 细胞淋巴瘤、 霍奇金淋巴瘤、 B 细胞慢性 淋巴细胞白血病、 蕈状真菌病、 塞扎里综合征 ； (m) 传染病， 如爱泼斯坦 - 巴尔病毒 (EBV) 感 染、 HIV 感染和其它病毒感染。 权 利 要 求 书 CN 102482355 A 8 1/102 页 9 抗体 技术领域 0001 本发明一般涉及抗体、 CCR4 生物学和相关的治疗领域。更

36、具体地， 本发明提供了 与 CCR4 结合的抗体。这样的抗 CCR4 抗体具有诊断和治疗与 CCR4 相关的疾病和状况的应 用， 如肿瘤血管成像、 治疗癌症及治疗病毒和其它感染、 和炎症及免疫疾病。本发明的基于 抗体的组合物和方法同样延伸至免疫交联物和其它治疗组合物、 试剂盒和方法的应用。 背景技术 0002 G 蛋白偶联受体 (GPCR) 有 800 多个成员， 代表了涉及信号传输的细胞表面分子的 最大家族， 占 2的人类基因组编码的全部基因。GPCR 超家族的成员具有一种共同的膜 拓扑结构 ： 细胞外的N末端、 细胞内的C末端和七次跨膜(TM)螺旋， 其通过三个细胞内的环 和三个细胞外的环

37、连接。 基于它们共同的拓扑结构， GPCR也被认为是七次跨膜(7TM)受体。 这些受体控制关键的生理机能， 包括神经传递、 从内分泌腺和外分泌腺释放激素和酶、 免疫 反应、 心肌和平滑肌收缩及血压调节。它们的功能紊乱与一些最流行的人类疾病有关。呈 现的实验数据和临床数据显示 ： GPCR 在癌症的进程和转移中具有至关重要的作用。因此， 有一种可能 ： 一些 GPCR 可能是抗癌药物的合适目标。 0003 趋化因子在多种疾病和失调的免疫和炎症应答中起重要作用， 所述疾病和失调包 括癌症、 病毒感染、 哮喘和过敏性疾病以及自身免疫病状如风湿性关节炎和动脉硬化。 这些 小的、 分泌的分子是逐渐增长的

38、 8-14kDa 蛋白超家族， 其特征是保守的四个半胱氨酸基序。 0004 研究已经证明 ： 趋化因子的作用通过 G 蛋白偶联受体的亚家族介导， 其中的受体 是被指定为趋化因子 (C-C 基序 ) 受体 4 或 CC 趋化因子受体 4(CCR4) 的受体。CCR4 的具 体配体包括趋化因子胸腺和激活调节的趋化因子 (TARC)( 也被认为是 CCL17) 和源于巨噬 细胞的趋化因子 (MDC)( 也被认为是 CCL22)。CCR4 也可以与 RANTES、 MCP-1 和 MIP-1 结 合， 且已经报导了响应这些配体的 CCR4 信号转导。 0005 已经认为 CCR4 在 T 细胞趋化作用

39、和吞噬细胞迁移至炎症位点中是重要的。优选 地， CCR4 在辅助性 T 细胞 2 型 (Th2) 细胞和调节性 T(Treg) 细胞上表达 ； 然而在其它健康 细胞或组织上仅发生有限量的表达。 0006 肿瘤细胞， 特别是成人T细胞白血病/淋巴瘤细胞， 可能为CCR4阳性。 肿瘤细胞表 达CCR4与皮肤相关联。 一些T细胞恶性肿瘤典型地定位在皮肤上。 例如， 在皮肤T细胞淋巴 瘤病变中发现高水平的 CCR4。最近， 已经发现一些实体瘤同样表达 CCR4(WO2009/037454)。 CCR4 的表达被认为是实体瘤， 特别是宫颈癌、 食道癌、 肾癌、 脑癌、 乳癌、 卵巢癌、 前列腺癌、 胃癌

40、和胰腺癌癌变的早期事件。 因此， 血液癌细胞和非血液癌细胞都可以表达CCR4。 因此， 可以使用抗 CCR4 抗体诊断、 监测和治疗这些癌症。 0007 此外， CCR4 在常规免疫和肿瘤免疫中具有重要作用。重要部分的 CD4+CD25+调节 性T细胞(Treg)为CCR4阳性(Baatar等， 2007b)。 这些Treg通过多种机制抑制免疫反应， 并且已经显示它们可以抑制肿瘤特异的免疫性。 在多种癌症中， 浸润基质、 肿瘤本身或引流 淋巴结的 Treg 的数量增加与恶化的结果相关。在小鼠模型中的研究表明 ： 降低 Treg 活性 说 明 书 CN 102482355 A 9 2/102 页

41、 10 导致内源抗肿瘤免疫性增加以及通过免疫系统的抗肿瘤发明的功效增强。因此， 抑制 Treg 功能在肿瘤的免疫疗法中是有前景的方案。 所述抑制可以通过杀死Treg(耗尽)、 干扰它们 的抑制剂作用、 改变它们的通讯模式或改变它们的分化而实现。 0008 在一组患有 CCR4+T 细胞白血病 / 淋巴瘤的患者中， 所述肿瘤细胞本身作为 Treg 细胞， 使肿瘤在面对宿主抗肿瘤免疫反应时能够存活。在其它类型的癌症中， MDC 和 TARC 由肿瘤细胞和肿瘤微环境产生， 并将 CCR4+Treg 细胞吸引至肿瘤， 在这里它们创造了使肿 瘤从宿主免疫反应中逃脱的有利环境。已经报导了在患有以下癌症的病

42、患的外周血中具 有更高频率的 Treg ： 乳癌、 结肠直肠癌、 食管癌、 胃癌、 肝细胞癌、 肺癌、 黑色素瘤、 卵巢癌和 胰腺癌。已经报导 Treg 细胞为肿瘤创造了一种有利的环境。因此， 阻止 CCR4 和它的配体 (如MDC)之间交互作用对治疗或预防癌症、 特别是上面列出的癌症是有用的。 已经报导 ： 在 SCID 小鼠模型中， 抗人 MDC/CCL22 抗体能够阻止人 Treg 细胞渗透至移植的人卵巢肿瘤中。 据认为， 存在于人实体瘤中的 Treg 细胞防止免疫效应物反应发展， 其可能对减慢肿瘤生长 和转移有作用。因此， 通过使用抗 CCR4 的中和 MAb( 单克隆抗体 ) 杀死肿

43、瘤块中的 Treg 细 胞和/或防止Treg细胞转移至肿瘤位点可以导致针对实体瘤的增强的免疫反应， 并作为惯 例的细胞毒素疗法或抗激素疗法的辅助。 0009 癌症引起大约 13的人类死亡。根据美国癌症协会的资料， 在 2007 年， 全世界有 七百六十万人死于癌症， 因此仍然强烈和迫切地需要更多的抗肿瘤疗法。 0010 CCR4 已经显示在炎症和免疫失调中起作用。Th2 细胞和嗜碱细胞是在肺和皮肤的 过敏性反应中的关键细胞。已经有许多报导描述了表达 CCR4 的 T 细胞的存在以及伴随着 CCR4 配体 (MDC、 TARC) 在过敏原激发的哮喘的支气管活组织切片中的气道上皮细胞上的表 达 (

44、Panina-Bordignon 等， 2001)。同样在患有遗传过敏性皮炎的病患中发现数量增加的 CCR4+T细胞， 当疾病转好时， 发现CCR4+T细胞显著减少。 使用人源化的哮喘SCID小鼠模型， 结果显示 ： 在过敏原刺激之前用抗体封闭CCR4减少了过敏性气道炎症以及肺中的Th2细胞 因子水平。对于哮喘病患， 通过肺递送封闭抗体耗尽 CCR4+T 细胞可能是合适的治疗选择。 对于遗传过敏性皮炎， 将 CCR4 封闭抗体靶定递送至皮肤可能也是一种有吸引力的治疗。 0011 在过敏性哮喘中， 高水平的过敏原特异的 IgE 的存在反映了对普通吸入的环境过 敏原的异常的 Th2 细胞免疫反应。

45、哮喘的特点是 Th2 淋巴细胞和嗜酸性粒细胞的浸润以及 Th2趋化因子的产生。 过敏原通过树突细胞(DC)出现在T细胞上， 所述树突细胞持续地采取 进入的外来抗原。基于通过 DC 的合适的活化作用， 存在于患病气道中的过敏原特异的淋巴 细胞生产 Th2 细胞因子白介素 (IL)-4、 IL-5 和 IL-13， 它们进一步地控制白细胞溢出、 杯状 细胞增生和支气管过度反应性 (BHR)。由 DC 产生的 TARC 和 MDC 通过引发 CCR4 诱导了 Th2 细胞而非 Th1 细胞的选择性转移 (Perros 等， 2009)。在哮喘的鼠科动物模型中已经显示 ： 在过敏原刺激之后， 使用抗

46、TARC 抗体的治疗减少了支气管肺泡灌洗 (BAL) 流体中 CD4+T 细 胞和嗜酸性粒细胞的数量、 Th2 细胞因子的产生和气道过度反应 (Kawasaki 等， 2001)。相 反， 缺乏 CCR4 的小鼠显示了对气道炎症和 BHR 没有保护作用 (Chvatchko 等， 2000)。使用 哮喘的人源化 SCID 小鼠模型显示 ： 在过敏原刺激之前用抗体封闭 CCR4 减少了过敏性气道 炎症并肺中降低了 Th2 细胞因子水平 (Perros 等， 2009)。这些数据显示封闭 CCR4 对于抑 制人类中的过敏性炎症是一种可行的策略。 0012 Treg 细胞可以抑制树突细胞 (DC)，

47、 因此推动了疾病 ( 特别是传染病和癌症 ) 的发 说 明 书 CN 102482355 A 10 3/102 页 11 展和进程。能够阻止 Treg 细胞对树突细胞的抑制的抗 CCR4 抗体可能因此用作疫苗中的佐 剂， 特别是作为肿瘤接种疫苗或抗传染病的疫苗中的佐剂。因此， 抗 CCR4 抗体可以提高疫 苗的治疗效果， 特别是提高疫苗诱导的免疫反应。 0013 结合 CCR4 的化合物已经被报导在鼠科过敏性炎症中显示出功效 (Purandare 等， 2007 ； Burdi 等， 2007)。已经有报导称 CCR4 结合化合物在体内具有合理的潜能， 因为 TARC 诱导的 CCR4 依赖的

48、白细胞补充物募集到腹膜被抑制了差不多 90。Yokoyama 和其同事 提供了一种靶定 CCR4 的喹唑啉衍生物， 其被证明在体内对减少小鼠模型的超敏反应有作 用 (Yokoyama 等， 2008b) ； 该化合物的一种衍生物被证明是基于经口给药在相似的体内小 鼠模型中有作用 (Yokoyama 等， 2009)。最近， 一组科学家使用电脑模拟 (in silico) 建模 方法已经鉴定了一些 CCR4 拮抗剂 (Bayry 等， 2008 ； Davies 等， 2009)。通过将化合物引入 (docking) 至建模的 CCR4 中， 作者发现分子能够在跨膜区域内结合。16 种化合物抑制

49、了 CCR4介导的CCRF-CEM细胞的转移。 当在体内用结核分支杆菌和乙肝疫苗检测CCR4拮抗剂 的佐剂功能时， 观察到细胞和体液的免疫反应都提高的免疫原性。该观察到的效果归因于 Treg 活性的抑制 (Bayry 等， 2008 ； Davies 等， 2009)。本领域熟知 ： Treg 细胞的一种明显部 分为 CCR4 阳性 (Baatar 等， 2007b)。据认为， 所述观察到的效果不仅对抗传染性疾病 ( 如， 由病毒、 细菌、 分支杆菌或如原生动物的寄生虫引起 ) 的疫苗有用， 对癌症疫苗也有作用。 0014 由于这些化合物作为佐剂功效的原因是基于通过阻止 CCR4 介导的信号转导抑制 Treg， 期望以拮抗剂方式结合 CCR4 的抗体可以以相同的方式起作用 ； 比作小分子药物的抗 体的药理学优势是本领域已知的。据我们所知， 唯一一个目前在开发的抗 CCR4 抗体是由 Kyowa-Hakko 进行的 KW-0761。但是该抗体仅对 ADCC 有效 ； 它不阻止经由 CCR4 受体的配 体介导的信号转导。因此， 期望本发明描述的抗体在通过 Treg 调节免疫反应方面有明显优 势。 0015 调节 Treg 对临床有用的另一种应用是癌症治疗。Treg 可以抑制肿瘤特异的免疫 性， 并且在一些癌症中它们的数量