新型植物乳杆菌及含该植物乳杆菌的组合物.pdf

1、(10)申请公布号 CN 102597215 A (43)申请公布日 2012.07.18 CN 102597215 A *CN102597215A* (21)申请号 200980160287.1 (22)申请日 2009.09.01 KCTC11401BP 2008.10.16 10-2009-0064091 2009.07.14 KR C12N 1/20(2006.01) (71)申请人 CJ 第一制糖株式会社 地址 韩国首尔 (72)发明人 金奉俊 郑宪雄 高志勳 金泰祯 李康杓 黄光祐 元泰焌 (74)专利代理机构 北京路浩知识产权代理有限 公司 11002 代理人 张晶 (54) 发

2、明名称 新型植物乳杆菌及含该植物乳杆菌的组合物 (57) 摘要 本 发 明 提 供 一 种 植 物 乳 杆 菌 CJLP55(Lactobacillus plantarum CJLP55)KCTC 11401BP 及含该植物乳杆菌的组合物， 所述组合 物为用于治疗肠道疾病的组合物、 或用于增强免 疫力的组合物。 (30)优先权数据 (85)PCT申请进入国家阶段日 2012.01.04 (86)PCT申请的申请数据 PCT/KR2009/004911 2009.09.01 (87)PCT申请的公布数据 WO2011/007922 KO 2011.01.20 (83)生物保藏信息 (51)Int

3、.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 17 页 序列表 1 页 附图 7 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 17 页 序列表 1 页 附图 7 页 1/1 页 2 1. 植物乳杆菌 CJLP55(Lactobacillus plantarumCJLP55)KCTC11401BP。 2. 含有植物乳杆菌 CJLP55(Lactobacillus plantarumCJLP55)KCTC11401BP 的用于预 防或治疗肠道疾病的组合物。 3. 含有植物乳杆菌 CJLP55(Lactobacillus plantarumCJLP55)KCT

4、C11401BP 的用于增 强免疫力的组合物。 4.根据权利要求3所述的组合物， 其特征在于， 其用于预防或治疗由Th2反应过剩引起 的 Th1/Th2 失衡而诱发的免疫疾病。 5. 根据权利要求 4 所述的组合物， 其特征在于， 所述免疫疾病选自过敏性疾病、 特异性 反应疾病、 癌症以及自身免疫疾病。 6. 根据权利要求 2-5 中任一项所述的组合物， 其特征在于， 其为药品。 7. 根据权利要求 2-5 中任一项所述的组合物， 其特征在于， 其为食品。 8. 根据权利要求 2-5 中任一项所述的组合物， 其特征在于， 其为饲料或饲料添加剂。 9. 根据权利要求 2-5 中任一项所述的组合物

5、， 其特征在于， 其为化妆品。 权 利 要 求 书 CN 102597215 A 2 1/17 页 3 新型植物乳杆菌及含该植物乳杆菌的组合物 技术领域 0001 本发明涉及一种新型植物乳杆菌及含该植物乳杆菌的组合物。更具体地， 涉及一 种用于预防治疗肠道疾病及免疫疾病的新型植物乳杆菌及含有该植物乳杆菌的组合物。 背景技术 0002 泡菜等传统发酵食品中含有丰富的乳酸菌， 所述乳酸菌在人体的消化系统中共 生， 具有通过分解纤维质及复合蛋白质来制备重要的营养成分的作用。将这种存活于包括 人在内的动物的胃肠器官内， 改善宿主的肠道微生物环境， 从而对宿主的健康有利的微生 物统称为益生菌。 为了使益

6、生菌具有效果， 需要经口摄取到达小肠， 附着于肠表面并维持这 种附着状态， 因此至少需要具有优异的耐酸性、 耐胆汁酸性， 以及附着于肠上皮细胞上的附 着力。 0003 在 泡 菜 等 传 统 发 酵 食 品 中 所 发 现 的 具 有 代 表 性 的 益 生 菌 有 乳 杆 菌 属 (Lactobacillus sp.)乳酸菌。 乳杆菌属微生物作为同型或异型发酵的乳酸杆菌， 常见于包 括人在内的动物的肠道及乳制品或蔬菜的发酵过程中。乳杆菌属微生物将肠内 pH 值维持 在酸性， 从而抑制大肠杆菌 (E.coli) 或梭菌 (Clostridium) 等有害菌的繁殖， 不仅能够改 善腹泻和便秘，

7、而且已知的作用还有合成维生素、 抗癌、 降低血清胆固醇等。已知由乳酸杆 菌产生的乳酸杆菌素 (acidophillin) 具有抑制痢疾杆菌、 沙门氏菌、 葡萄球菌、 大肠杆菌 等生长的作用。 并且能够抑制引起腹泻的菌繁殖， 使得肠道菌群正常， 从而具有停止腹泻的 作用。(Michael 和 Philippe， 益生菌与益生元 ： 对腹泻的影响， 营养学杂志， 第 137 卷， 2007 年 3 月， 第 803S-811S 页 ； Roberfroid， 益生元与益生菌 ： 它们是功能性食品吗？美国临床 营养学杂志， 第71卷， 2000年6月， 第1682S-1687S页)(Michael

8、and Philippe， Probiotics and prebiotics ： Effects on diarrhea， The journal of nutrition， Volume 137， March 2007， pages 803S-811S ； Roberfroid， Prebiotics and probi otics ： Are they functional foods ？， American journal of clinical nut rition， Volume 71， June 2000， pages 1682S-1687S)。 0004 利用乳杆菌属微生物的上

9、述特性来开发益生菌剂和家畜饲料的研究正在活跃地 展开。 家畜的细菌性腹泻病会降低增重率， 导致动物死亡。 因此， 为了预防上述情况的发生， 提高家畜产量， 一般一直采用的方法是在饲料中添加抗生素。 但是， 由于对抗生素的耐药菌 的出现和畜产内残留抗生素等问题， 因此目前趋势是在饲料中限制使用抗生素， 强调有机 的家畜饲养方法 ( 韩国公开专利 1998-78358)(McE wen 和 Fedorka-Cray， 动物体内抗菌药 物的应用以及耐药性， 临床传染病杂志， 第34卷， 2002年6月， 第S93-S106页)(McEwen and Fedorka-Cray， Antimicrobi

10、al use and resistance in animals， Clinical infectious Diseases， Volume34， June 2002， pages S93-S106)。 0005 并且， 乳杆菌属微生物等乳酸菌还具有增强免疫力的效果。最近， 在世界范围内 由于环境污染和速食食品摄入的增加等， 其影响使得与免疫调节异常有关的过敏性反应疾 病和特异性反应疾病正在急剧增加， 在韩国这种疾病也同样呈增加趋势。最近在欧洲， 作 说 明 书 CN 102597215 A 3 2/17 页 4 为微生物治疗 (bacteriotheraphy) 的一个环节， 通过口服乳酸菌

11、来治疗疾病， 正在努力实 现用乳酸菌来缓解或改善症状。将鼠李糖乳杆菌 GG(Lact obacillus rhamnosus GG) 对 幼儿给药时发生特异性反应疾病的概率减少到一半 (等， 益生菌在遗传性过 敏性反应疾病中的主要预防 ： 一种随机安慰剂对照实验， 柳叶刀杂志， 第 357 卷， 2001 年 4 月， 第 1076-1079 页 )(et.al.， Probiotics in primary prevention of atopic disease ： a randomized placebo-controlled trial， Lancet， Volume 357， Apr

12、il 2001， pages 1076-1079)。有报道指出对已经发生特异性反应湿疹的幼儿用鼠李糖乳杆 菌 (Lactobacillus rha mnosus) 和罗伊氏乳杆菌 (L.reuteri) 进行给药时， 湿疹部位会 变小且湿疹症状会减轻 (Rosenfeldt 等， 益生菌乳酸菌菌株对儿童的遗传过敏性皮炎、 皮 肤病以及眼部疾病的影响， 第 111 卷， 2003 年 2 月， 第 389-395 页 )(Rosenfeldt et.al.， Effect of probiotic Lactobacillus strains in children with atopic der

13、matitis， Dermatologic and ocular d iseases， Volume 111， February 2003， pages 389-395)。 0006 对这种乳酸菌的增强免疫效果的机理 (mechanism) 方面的研究还在进行， 虽然对 具体的机理还不明确， 但是大体上已知通过经口摄入， 并且在肠内栖息， 从而影响肠道的免 疫系统。 例如， 已知通过酸奶的方式来摄取乳酸菌能够增强集合淋巴小结(Peyer s patch) 淋巴细胞的抗菌活性， 根据以实验动物和人为对象实施的部分研究， 已知乳酸菌能够强化 IgA 反应。此外， 乳酸菌对先天免疫及适应性免疫都有影

14、响。已知在肠道免疫系统的先天 免疫反应(innate immunity)中通过吞噬病原菌来消灭病原菌， 从而抗感染， 起到维持健康 的作用。已知适应性免疫 (adaptive immunity) 是通过活化巨噬细胞来增加多种细胞因 子的产生， 特别是增加白介素 IL-12、 IL-18 的产生， 这是由于乳酸菌细胞壁的构成成分中 的部分成分激活巨噬细胞中的 NF-B、 STAT 信号通路， 因此增加细胞因子的生成。所述巨 噬细胞起到分解抗原， 从而提示给 T 淋巴细胞的作用。并且， 已知的还有乳酸菌作为专门 的抗原呈递细胞， 其不仅在淋巴结、 消化系统中的粘膜上较多存在的树突细胞 (dendr

15、itic cell) 中增加 IL-12、 IL-18、 TNF- 的产生， 而且其还具有增加表面分子表达的作用， 所 述表面分子与 MHC II， 以及 B7-2 一样具有活化 T 淋巴细胞的作用 (Cross 等， 发酵食品的 抗过敏特性， 乳酸菌的一个重要免疫调节机制？， 国际免疫药理学杂志， 第 1 卷， 2001 年 5 月， 第 891-901 页 )(Cross et.al.， Anti-allergy pr operties of fermented foods ： an important immunoregulatory mechan ism of lactic acid

16、bacteria ？， International Immunopharmacology， V olume 1， May 2001， pages 891-901)。 0007 T 淋巴细胞是适应性免疫 (adaptive immunity) 的核心细胞， 适应性免疫可分为 细胞性免疫的 Th1 反应和抗体性免疫的 Th2 反应。在 Th1 及 Th2 各自反应中抗原呈递细 胞 (Antigen Presenting Cell) 所产生的细胞因子相互不同， 在 Th1 反应中 IL-12、 IL-18 以及干扰素 (IFN) 的产生占优势， 而在 Th2 反应中 PGE2、 IL-4、 IL-1

17、0 的产生占优势。这 种 Th1 反应以及 Th2 反应要形成适当的均衡， 当均衡被破坏的情况下， 会发生各种免疫疾 病。Th1 细胞主要与感染病症作斗争， 而与此相反， Th2 细胞主要与过敏性反应疾病和炎性 反应相关。当它们正常发挥作用时， Th2 细胞防止灰尘及其它不需要的物质侵入身体， 从 而保护身体， 但是如果这些细胞显示出过度的活性的情况下， 会增加 IgE 抗体的产生， 从而 使原本对人体没有威胁的蛋白质 ( 例如 ： 花粉、 食物等 ) 诱发过敏反应。并且， Th1 反应和 Th2 反应必须要维持平衡， 如果其中的一种过剩或另一种不足， 就会诱发疾病。并且， 由于 说 明 书

18、CN 102597215 A 4 3/17 页 5 持续的压力， 进而不断分离皮质醇， 就会使得 Th1 反应减少， Th2 反应增加， 从而诱发癌症、 特异性反应疾病、 过敏性反应疾病、 以及自身免疫疾病 (Elenkov 和 Chrousos， 应激激素， Th1/Th2 型模型， 促炎 / 抗炎细胞因子以及对疾病的敏感性， 内分泌学与新陈代谢趋势， 第 10 卷， 1999 年 11 月， 第 359-368 页 )(Elenkov and Chrou sos， Stress hormones， Th1/Th2 patterns， pro/anti-inflammatory cytok

19、ines and susceptibility to disease， Trends in Endocrinology and Met abolism， Volume 10， November 1999， pages 359-368)。 0008 通过体内 (In vivo) 实验可知， 乳酸菌能够增加 T 淋巴细胞中作为 Th1 细胞因子 的 IFN- 的生成， 并且能够抑制作为 Th2 细胞因子的 IL-4、 IL-5 的生成 (Matsuzaki 等， 口 服干酪乳杆菌Shirota对生成小鼠的免疫球蛋白E的作用， 乳品科学杂志， 第81卷， 1998年 1月， 第48-53页)(Mat

20、suzaki et.al.， The effect of oral feeding of Lacto bacillus casei strain Shirota on immunoglobulin E production in mic e， Journal of Dairy Science， Volume 81， January 1998， pages 48-53)。并且， 在其它实验中， 用乳酸菌对偏向 于Th2反应的小鼠(ov albumin-primed mice)进行经口给药时， 脾细胞(splenocyte)中的 INF- 增加， IL-4、 IL-5 以及 IgE 减少， 所述偏

21、向于 Th2 反应的小鼠为用作 Th2 反应动物模 型的给药卵清蛋白的小鼠。并且已知用卵清蛋白给药后， 将由偏向于 Th2 反应的小鼠中提 取的脾细胞和乳酸菌一起进行培养时， 细胞因子以及 IgE 的变化与经口给药的实验相同。 但是， 仅将 T 淋巴细胞与乳酸菌进行培养时， IFN- 的生成没有明显增加， 因此可以认为在 T淋巴细胞的IFN-生成中巨噬细胞、 树突细胞等抗原呈递细胞是必需的(Kato等， 乳酸菌 通过小鼠脾细胞有效诱导白介素 12 和 - 干扰素的产生， 国际免疫药理学杂志， 第 21 卷， 1999 年 2 月， 第 121-131 页 )(Kato et.al.， Lact

22、ic acid bacterium potentl y induces the production of interleukin-12and interferon-gamma by mouse splenocytes， International Journal of Immunopharmacology， Volume 21， February 1999， pages 121-131)。另一方面， IL-12 以及 IL-18 是将 Th0 淋巴细胞分化为 Th1 淋巴细胞的重要细 胞因子， 其在巨噬细胞或树突细胞中生成， 已知在培养脾细胞或巨噬细胞时， 采用乳酸菌进 行处理， 随着浓度的

23、增加， IL-12、 IL-18 以及 IFN- 等的生成会增加。由此可知乳酸菌在 巨噬细胞中会增加 IL-12、 IL-18 以及 IFN- 等的生成， 因此会促进向 Th1 细胞分化， 并且 诱导IFN-的生成， 因此在Th2占优势的情况下能够起到调节Th1/Th2平衡的作用(Cross 等， 发酵食品的抗过敏特性 ： 乳酸菌的一个重要免疫机制， 国际免疫药理学， 第 1 卷， 2001 年 5 月， 第 891-901 页 )(Cross et.al.， Anti-allergy properties of fermented foods ： an important immunoreg

24、 ulatory mechanism of lactic acid bacteria ？， International Immunoph armacology， Volume 1， May 2001， pages 891-901)。并且， 已知乳酸菌对预防和 治疗由Th2反应过剩导致的Th1/Th2失衡而诱发的癌症、 特异性反应疾病、 过敏性反应疾病 以及自身免疫疾病有帮助。 发明内容 0009 本发明要解决的技术问题 0010 本发明的发明人研究开发出一种在调节由Th2反应过剩引起Th1/Th2失衡方面效 果大大优于现有乳酸菌的新型乳酸菌。 研究结果为从传统的发酵食品中分离并鉴定了一种 新型

25、乳杆菌属乳酸菌菌株， 从而完成了本发明。 说 明 书 CN 102597215 A 5 4/17 页 6 0011 本发明的目的在于， 提供一种新型乳杆菌属乳酸菌菌株， 其不仅具有优异的作为 益生菌基本性质的耐酸性、 耐胆汁酸性、 以及肠上皮细胞上的附着力， 而且增强免疫效果也 优异， 特别是调节由 Th2 反应过剩引起的 Th1/Th2 失衡的效果优异。 0012 本发明的另一目的在于， 提供一种含有上述新型乳杆菌属乳酸菌菌株的用于预防 或治疗肠道疾病的组合物。 0013 本发明的又另一目的在于， 提供一种含有上述新型乳杆菌属乳酸菌菌株的用于增 强免疫力的组合物。 0014 技术方案 001

26、5 为了实现上述目的， 本发明提供植物乳杆菌 CJLP55(Lactobacil lus plantarum CJLP55)( 保藏单位 ： 生命工学研究院基因银行， 保藏日期 ： 2008.10.16， 保藏编号 ： KCTC11401BP)。 0016 并且， 本发明提供一种含有上述植物乳杆菌 CJLP55 的用于预防和治疗肠道疾病 的组合物。 0017 并且， 本发明提供一种含有植物乳杆菌 CJLP55 的用于增强免疫力的组合物。 0018 下面， 进一步详细说明本发明。 0019 关于本发明的植物乳杆菌CJLP55(Lactobacillus plantarum CJL P55)的特征

27、在 于， 是一种从传统发酵食品中分离并鉴定的植物乳杆菌的新型菌株。所述传统发酵食品有 泡菜、 蔬菜发酵物、 大酱、 酱油、 清麴酱或盐渍海鲜等， 但并不限于此。 0020 为了对微生物进行鉴定和分类， 对本发明的植物乳杆菌 CJLP55 进行了有关 16S rRNA 碱基序列分析， 结果为 ： 与植物乳杆菌标准菌株 (Lactobacillus plantarum NBRC15891T， GenBank 登录号 AB326351) 显示出了最高的同源性 (99.9 )， 显示出了与 植物乳杆菌最高的分子系统学上的亲缘关系。并且， 将上述微生物鉴定为植物乳杆菌 (Lactobacillus pl

28、antarum)， 并命名为植物乳杆菌CJLP55， 于2008年10月16日保藏于生 命工学研究院基因银行 ( 保藏编号为 KCTC11401BP)。植物乳杆菌 CJLP55 的 16S rRNA 基因 的碱基序列如本说明书附件中的碱基序列表 SEQ ID NO.1 所示。 0021 本发明的植物乳杆菌 CJLP55 为革兰氏阳性杆菌， 是在有氧条件和厌氧条件下均 能够生长的兼性厌氧菌 (facultive anaerobe)， 并且不形成孢子， 无运动性， 细胞形态为杆 菌。采用本技术领域常规方法对植物乳杆菌 CJLP55 的更加具体的形态以及生理学特性进 行分析的结果如下表 1 所示。

29、0022 表 1 0023 形态及生理、 生物化学特性 结果 形态 (Morphology) 杆菌 (Rod) 运动性 (Motility) - 孢子 (Spore) - 过氧化氢酶 - 说 明 书 CN 102597215 A 6 5/17 页 7 同型与异型发酵 兼性异型发酵 15下的繁殖 + 45下的繁殖 - 在 3 NaCl 中的繁殖 + 厌氧性繁殖 + 利用葡萄糖生成 CO2 - 糖发酵特性 丙三醇 - 赤藓糖醇 - 0024 D- 阿拉伯糖- L- 阿拉伯糖- 核糖+ D- 木糖- L- 木糖- 戊五醇- 木糖苷- 半乳糖+ D- 葡萄糖+ D- 果糖+ D- 甘露糖- L- 山梨

30、糖- 鼠李糖+ 半乳糖醇- 说 明 书 CN 102597215 A 7 6/17 页 8 肌醇- 甘露醇+ 山梨醇+ D- 甘露糖苷+ D- 葡萄糖苷- 葡萄糖胺+ 苦杏仁苷+ 熊果苷+ 七叶苷+ 水杨苷+ 纤维二糖+ 麦芽糖+ 乳糖+ 蜜二糖+ 蔗糖+ 海藻糖+ 菊糖+ 松三糖 (melizitose)+ D- 蜜三糖+ 美沙酮 (amidon)- 糖原- 木糖醇- 龙胆二糖+ D- 松二糖- 说 明 书 CN 102597215 A 8 7/17 页 9 D- 来苏糖- D- 塔格糖- D- 岩藻糖- L- 岩藻糖- 0025 D- 阿拉伯糖醇- L- 阿拉伯糖醇- 葡萄糖酸盐- 2-

31、葡萄糖酸盐- 5- 葡萄糖酸盐- 0026 + ： 阳性反应 0027 - ： 阴性反应 0028 为了长时间稳定地保存本发明的植物乳杆菌 CJLP55， 优选在混合有一定量的丙三 醇的水溶液的保存溶液中， 使菌体散开， 于 -70条件下保存， 或者将其悬浮在灭菌的 10 脱脂乳中进行冷冻干燥。 0029 此外， 本发明的植物乳杆菌 CJLP55 作为益生菌， 具有乳酸菌普遍具有的整肠效果 及增强免疫效果。 0030 本发明中的益生菌 (probiotics) 理解为 ： 存活于包括人在内的动物的胃肠器官 内， 改善宿主的肠内微生物环境， 从而对宿主的健康有利的微生物。益生菌是一种具有益 生菌

32、活性的活的微生物， 其具有单一或复合菌株形态， 当以干燥的细胞形态或发酵产物形 态用于人或动物的情况下， 能够对宿主的肠道菌群产生有利的影响。为了确认是否为这种 益生菌的微生物， 首先， 需要确认其是否能够受胃液和胆汁的影响较小且经过胃并存活于 肠中， 确认其是否能够停留在肠中并且存活于肠道中， 需要其能够对宿主的肠道菌群形成 有利影响。因此， 其必须具有对胃酸的耐酸性， 对胆汁酸的耐胆汁酸性， 以及对肠上皮细胞 的附着性。 第二点， 为了确认是否为益生菌的微生物， 需要所述微生物在安全性方面没有问 题， 与此相关， 一般进行明胶液化反应检测、 苯丙氨酸脱氨生成检测、 氨生成检测、 溶血性实

33、验检测等。本发明的植物乳杆菌 CJLP55 不仅具有优异的耐酸性、 对胆汁酸的耐胆汁酸性、 以及对肠上皮细胞的附着性， 而且在明胶液化反应检测、 苯丙氨酸脱氨生成检测、 以及氨生 成检测中显示出了阴性， 在溶血性实验检测中确认为与病原性无关的 - 溶血， 从而显示 是安全的。 0031 本发明的植物乳杆菌 CJLP55 的耐酸性、 耐胆汁酸性、 以及肠上皮细胞的附着性非 常优异， 因此能够预测出具有整肠效果。由此， 从另一个侧面来说， 本发明提供一种含有植 物乳杆菌 CJLP55 的用于预防或治疗肠道疾病的组合物。 说 明 书 CN 102597215 A 9 8/17 页 10 0032 上

34、述含有本发明微生物的用于治疗肠道疾病的组合物能够用于预防或治疗包括 人在内的哺乳动物的肠道疾病， 优选为包括牛、 马、 猪等家畜。上述 “肠道疾病” 包括肠道危 害细菌感染、 以及炎症性肠道疾病等， 例如， 包括由病原性微生物 ( 大肠杆菌、 沙门氏菌、 梭 菌等 ) 引起的感染性腹泻、 肠胃炎、 炎症性肠道疾病、 神经性肠炎综合症、 小肠细菌过度生 长、 急性腹泻等， 但是并不限于这些。 上述用于治疗肠道疾病的组合物中含有的植物乳杆菌 CJLP55 能够以活菌体或死菌体方式存在， 但是优选为以活菌体方式存在。一般活菌体具有 治疗并改善由肠道菌群的异常发酵而引起的诸多症状的效果， 用于人以及动

35、物时， 能够密 集、 停留在肠内的消化道壁上， 从而起到使有害菌不能够停留的作用， 并且产生乳酸来降低 肠内的pH值， 抑制有害细菌的繁殖。 并且， 所用的活菌体生成细菌素(bacteriocin)和过氧 化物， 从而抑制病原菌的繁殖， 对负责吸收营养成分的肠绒毛的活动起到帮助作用。此外， 生成帮助吸收、 利用营养素的物质， 对于动物来说改善其饲料转化率， 还产生一种中和病原 菌产生的毒性物质的物质。 0033 对于上述本发明的用于预防或治疗肠道疾病的组合物的给药方式没有特别限定， 但是优选为经口给药。虽然给药量根据肠道疾病的种类、 疾病程度、 年龄、 性别、 人种、 治疗 或预防目的等有所不

36、同， 但是一般情况下以成人为基准， 一天可以给药 1 千万 -1000 亿个。 0034 除了具有整肠效果之外， 本发明的植物乳杆菌 CJLP55 与现有的乳酸菌相比， 还具 有显著优异的增强免疫力的效果。植物乳杆菌 CJLP55 在脾细胞 (splenocyte) 中能够增加 诱导 Th1 反应的 IL-12 的生成， 抑制诱导 Th2 反应的 IL-4 的生成。并且， 所述植物乳杆菌 CJLP55 通过刺激作为抗原呈递细胞调节 T 细胞免疫反应的巨噬细胞、 以及树突细胞等与调 节免疫相关的细胞， 从而促进诱导Th0淋巴细胞向Th1淋巴细胞分化的细胞因子的生成， 进 而确认为其具有免疫调节能

37、力， 能够调节由 Th2 反应过剩引起的 Th1/Th2 失衡。对植物乳 杆菌 CJLP55 的增强免疫效果的具体说明如下。 0035 与阴性对照组相比， 用植物乳杆菌 CJLP55 对加入卵清蛋白 (OVA) 而偏向于 Th2 反 应的小鼠脾细胞 (splenocyte) 进行处理时， 产生了高达 12.4-12.7 倍的诱导 Th1 反应的细 胞因子 IL-12， 并且将诱导 Th2 反应的细胞因子 IL-4 的生成抑制到 6.1 9.8， 能够确认 这显著优异于其它典型乳酸菌， 如鼠李糖乳杆菌 GG(KCTC5033)、 干酪乳杆菌 (KCTC3109)、 沙克乳杆菌 CJLS118(K

38、CTC13416)。植物乳杆菌 CJLP55 能够抑制 Th2 反应， 并且促进 Th1 反 应， 因此具有能够调节由 Th2 反应过剩引起的 Th1/Th2 失衡的免疫调节能力。 0036 用 植 物 乳 杆 菌 CJLP55(Lactobacillus plantarum CJLP55) 对 巨 噬 细 胞 株 RAW264.7、 以及树突细胞 JAWSII 进行处理的结果， 确认了随着乳酸菌数量的增加， 刺激巨 噬细胞株， 从而增强免疫反应。用植物乳杆菌 CJLP55 对巨噬细胞株 RAW264.7、 以及树突 细胞株 JAWSII 进行处理的结果， 能够促进诱导 Th1 分化的细胞因子

39、 IL-12、 IL-18 的生成， 并且抑制诱导 Th1 分化的细胞因子 IL-10 比 IL-12 的生成量相对少， 因此确认植物乳杆菌 CJLP55 促进诱导 Th1 的分化。并且， 由该实验结果可知植物乳杆菌 CJLP55 抑制 Th2 反应， 促进 Th1 反应， 从而具有调节由 Th2 反应过剩引起的 Th1/Th2 失衡的免疫调节能力。 0037 IL-4 来源于 Th2 细胞， 特别起到细胞免疫反应的核心作用， 抑制 Th1 细胞的细胞 因子 IL-12 的产生， 从而具有抗炎性细胞因子 (anti-i nflammatory cytokine) 的功能。 最近发现， 在过敏性

40、皮炎患者的外周血液或皮肤病变处， 主要产生 IL-4、 IL-5 等的 Th2 细 胞相对增加了 (Miraglia 等， 异位性皮炎的免疫调节异常， 过敏症与哮喘会议录， 第 27 卷， 说 明 书 CN 102597215 A 10 9/17 页 11 2006年11月-12月， 第451-455页)(Miraglia et.al， Im mune dysregulation in atopic dermatitis， Allergy and Asthma Procee dings， Volume 27， November-December 2006， pages 451-455)。并且由

41、于 Th2 反应过剩引起的 Th1/Th2 失衡会诱发特异性反应疾病等疾 病。并且， 如前面所述， 已知当 Th1 反应和 Th2 反应中只要一种过剩或另一种不足就会引起 疾病， 当 Th1 反应减少， Th2 反应增加时， 会引起癌症、 特异性反应疾病、 过敏性反应疾病、 以 及自身免疫疾病 (Elenkov 和 Chrousos， 应激激素， Th1/Th2 模式， 促炎 / 抗炎细胞因子和 疾病的易感性， 内分泌学和新陈代谢趋势， 第 10 卷， 1999 年 11 月， 第 359-368 页 )(Elenkov and Chrousos， Stress hormones， Th 1/

42、Th2 patterns， pro/anti-inflammatory cytokines and susceptibility to disease， Trends in Endocrinology and Metabolism， Volume 10， Nov ember 1999， pages 359-368)。本发明的植物乳杆菌 CJLP55 通过调节与免疫调节 有关的产生 Th1 细胞、 Th2 细胞、 巨噬细胞、 以及树突细胞的细胞因子， 从而调节由 Th2 反应 过剩引起的 Th1/Th2 失衡， 因此其有望不仅对特异性反应疾病、 过敏性反应疾病等疾病起 到有效作用， 而且还对预防

43、和治疗癌症， 以及自身免疫疾病也具有效果。 0038 本发明在另外一个侧面， 提供一种含有植物乳杆菌 CJLP55 的用于增强免疫力的 组合物。本发明的用于增强免疫力的组合物中的植物乳杆菌 CJLP55 作为乳酸菌， 由于其具 有上述现有技术中说明的一般乳酸菌所具有的增强免疫力的作用， 因此具有增强免疫力的 效果。 特别地， 如下述实施例的例证， 由于本发明的上述用于增强免疫力的组合物中的植物 乳杆菌 CJLP55 具有促进 Th1 反应的效果， 具有调节由于 Th2 反应过剩引起的 Th1/Th2 失 衡的效果， 因此对预防或治疗由于 Th2 反应过剩引起的 Th1/Th2 失衡而诱发的疾病

44、具有效 果。因此， 本发明的上述用于增强免疫力的组合物能够有效地用于预防或治疗特异性反应 疾病、 过敏性反应疾病、 癌症、 以及自身免疫疾病。上述自身免疫疾病包括哮喘、 枯草热等， 但并不限于这些。 0039 对于上述本发明的用于增强免疫力的组合物的给药方式没有特别限定， 优选为经 口给药。给药量根据增强免疫所需的疾病种类、 疾病程度、 年龄、 性别、 人种、 治疗或预防目 的等有所不同， 但是一般情况下以成人为基准， 一天可以给药 1 千万 -1000 亿个。 0040 由于含有上述本发明的植物乳杆菌 CJLP55 的用于预防或治疗肠道疾病的组合 物、 以及用于增强免疫力的组合物中含有安全性

45、得到认可的乳酸菌， 因此不会有副作用等 的顾虑， 可以作为药品、 食品、 化妆品、 饲料或饲料添加剂来使用。 0041 上述本发明的组合物作为药品使用的情况下， 可以制备成本技术领域中公知的常 规药剂学剂型。上述药品优选为经口给药剂型。例如可制成液体剂、 悬浮剂、 散剂、 颗粒剂、 片剂、 胶囊剂、 丸剂或浸膏剂等经口给药剂型。 0042 制备成上述各个剂型时， 可以加入制备各个剂型所需的并在药剂学上允许的载体 或添加剂。 制备成具有典型的用于经口给药的剂型时， 上述载体可以使用选自稀释剂、 润滑 剂、 粘结剂、 崩解剂、 甜味剂、 稳定剂以及防腐剂中的一种以上， 作为添加剂可以使用选自香 料

46、、 维生素类以及抗氧化剂中的一种以上。 0043 上述载体以及添加剂只要是药剂学上允许的均可， 优选地， 作为稀释剂具体有乳 糖、 玉米淀粉、 大豆油、 微晶纤维素或甘露醇， 作为润滑剂有硬脂酸镁或滑石粉， 作为粘结剂 有聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基纤维素。此外， 优选地， 作为崩解剂有羧甲基纤维素钙、 羧基乙 酸淀粉钠、 波拉克林钾或交联聚维酮， 作为甜味剂有白糖、 果糖、 山梨醇或阿斯巴甜， 作为稳 说 明 书 CN 102597215 A 11 10/17 页 12 定剂有羧甲基纤维素钠、 - 环糊精、 白蜡或黄原胶， 作为防腐剂有对羟基苯甲酸甲酯、 对羟 基苯甲酸丙酯或山梨酸钾。 0044

47、此外， 为了增加味觉， 除了上述成分之外， 作为公知的添加剂， 还可以混合使用梅 花香、 柠檬香、 菠萝香、 香草香等天然香料 ； 天然果汁、 叶绿酸、 类黄酮等天然色素 ； 果糖、 蜂 蜜、 糖醇、 白糖等甜味成分 ； 或柠檬酸、 柠檬酸钠等酸味剂。 0045 关于这种制剂化方法以及制剂化时所需的载体以及添加剂在 雷明顿的制药科 学 (Remington s Pharmaceutical Sciences)( 第 19 版， 1995) 中有详细记载。 0046 上述本发明的组合物可以作为食品使用。上述食品不仅是保健功能性食品， 还包 括人们每日经常摄取的一般的食品。用作保健功能性食品的情况

48、下， 可以和食品学上允许 的载体或添加剂一起制备成本技术领域公知的常规保健功能性食品的剂型， 作为所述保健 功能性食品例如可以制备成散剂、 颗粒剂、 片剂、 胶囊剂、 悬浮剂、 乳剂、 糖浆剂、 液体剂、 浸 膏剂、 茶、 果冻或饮料等。上述食品学上允许的载体或添加剂， 根据需要制备的剂型可以选 择使用在本技术领域允许使用的公知的任一载体或添加剂。 0047 由于上述本发明的组合物具有预防或治疗特异性反应疾病的效果， 因此可以用于 化妆品上。当将上述本发明的组合物用于化妆品的情况下， 可以制备成现今化妆品技术领 域公知的常规剂型的多种化妆品。制备成上述各种剂型时， 可以添加各个剂型制备所需的

49、制备化妆品时允许使用的载体或添加剂来制备。 0048 上述本发明的组合物还可以作为饲料添加剂或饲料来使用。 0049 作为饲料添加剂使用的情况下， 可以将上述组合物制备成 20-90的高浓缩液或 粉末、 或者是颗粒形态。上述饲料添加剂还可以使用包括选自柠檬酸、 富马酸、 己二酸、 乳 酸、 苹果酸等有机酸 ； 或磷酸钠、 磷酸钾、 酸性焦磷酸盐、 聚磷酸盐(聚合磷酸盐)等磷酸盐 ； 或多元酚、 儿茶酸、 - 生育酚、 迷迭香提取物、 维生素 C、 绿茶提取物、 甘草提取物、 壳聚糖、 鞣酸、 植酸等天然抗氧化剂中的一种或多种。 作为饲料使用的情况下， 可以将上述组合物制 备成常规饲料形态， 可以包括常规饲料成分。 0050 所述饲料添加剂以及饲料还可以包括谷类， 例如有粉碎或破碎的小麦、 燕麦、 大 麦、 玉米以及大米 ； 植物性蛋白饲料， 例如有以油菜、 大豆以及葵花籽为主要成分的饲料 ； 动物性蛋白饲料， 例如有血粉、 肉粉、 骨粉以及海鲜粉 ； 糖分以及乳制品， 例如有由各种奶粉 以及乳清粉构成的干燥成分等， 除此之外， 还可以包括营养补充剂、 消化吸收提高剂以及生 长促进剂等。 0051 上述饲料添加剂可以单