掺入酶的水溶性组合物及其制备方法.pdf

1、10申请公布号CN104169411A43申请公布日20141126CN104169411A21申请号201380014651X22申请日2013031213/422,70920120316USC11D17/0420060171申请人蒙诺苏尔有限公司地址美国印地安那州72发明人大卫M李詹妮弗L希姆希74专利代理机构北京德琦知识产权代理有限公司11018代理人康泉王珍仙54发明名称掺入酶的水溶性组合物及其制备方法57摘要本文公开的是水溶性组合物，例如膜，所述水溶性组合物包括第一水溶性树脂、酶和酶稳定剂的混合物，所述酶稳定剂包含酶的功能底物；制备此类组合物的方法；和使用此类组合物的方法，例如制备含

2、有功能成分的包。酶可包括蛋白酶和蛋白酶与其他酶的混合物，并且组合物提供在膜加工和贮存后酶功能的良好保留。30优先权数据85PCT国际申请进入国家阶段日2014091686PCT国际申请的申请数据PCT/US2013/0304032013031287PCT国际申请的公布数据WO2013/138288EN2013091951INTCL权利要求书2页说明书37页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书37页10申请公布号CN104169411ACN104169411A1/2页21一种水溶性膜，所述水溶性膜包含下述的水溶性混合物水溶性树脂，酶，和酶底物。2一种水溶性膜，所述

3、水溶性膜包含下述的水溶性混合物包含丙烯酰胺基2甲基丙磺酸酯的水溶性树脂，和酶组合物，其中在形成后的所述膜中的酶活性恢复为酶组合物原材料中的酶活性的至少87。3根据权利要求1所述的水溶性膜，其中所述水溶性树脂由乙烯醇/乙酸乙烯酯/丙烯酸甲酯三聚物组成。4根据权利要求2所述的水溶性膜，其中所述水溶性树脂由乙烯醇/丙烯酰胺基2甲基丙磺酸酯共聚物组成。5根据前述权利要求中任一项所述的水溶性膜，其中所述酶组分由单一酶组成，并且所述酶不是淀粉酶。6根据前述权利要求中任一项所述的水溶性膜，其中所述酶是蛋白酶。7根据权利要求14或6中任一项所述的水溶性膜，所述水溶性膜在所述膜中还包含第二酶。8根据前述权利要求

4、中任一项所述的水溶性膜，其中所述酶或第二酶选自由淀粉酶、脂酶、蛋白酶、氧化还原酶、纤维素酶、甘露聚糖酶及其组合组成的组中。9根据前述权利要求中任一项所述的水溶性膜，其中所述水溶性膜中包括的酶总量是至少约01PHR，任选在约01至约20PHR的范围内，例如2PHR。10根据权利要求69中任一项所述的水溶性膜，其中所述蛋白酶活性与第二酶活性的比率在约021至约101的范围内。11根据前述权利要求中任一项所述的水溶性膜，其中所述酶包含蛋白酶，并且所述酶底物包含蛋白质，任选大豆蛋白质；或所述酶包含脂酶，并且所述酶底物包含脂质，任选甘油单油酸酯；或所述酶包含淀粉酶，并且所述底物包含复合碳水化合物，任选淀

5、粉；或所述酶包含纤维素酶，并且所述底物包含纤维素，任选甲基纤维素；或所述酶包含甘露聚糖酶，并且所述底物包含甘露聚糖，任选瓜尔胶。12根据前述权利要求中任一项所述的水溶性膜，其中所述酶底物是大豆蛋白质。13根据前述权利要求中任一项所述的水溶性膜，其中所述酶底物以至少约2PHR的量，任选以在约2至约8PHR的范围内的量存在于所述膜中。14根据前述权利要求中任一项所述的水溶性膜，其中所述水溶性树脂选自由聚乙烯醇、经修饰的聚乙烯醇、水溶性丙烯酸酯共聚物、聚丙烯酸酯、聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮、支链淀粉、瓜尔胶、黄原胶、角叉菜胶、淀粉、乙氧基化淀粉、羟丙基化淀粉、聚丙烯酰胺基2甲基丙磺酸钠、聚马来酸单甲

6、酯、其共聚物以及上述任何的组合组成的组中。15根据前述权利要求中任一项所述的水溶性膜，其中基于所述膜的总重量，所述水溶性树脂以至少约35重量的量，任选以在约35重量至约90重量的范围内的量存在于所述水溶性膜中。16根据前述权利要求中任一项所述的水溶性膜，所述水溶性膜还包含增塑剂。权利要求书CN104169411A2/2页317根据权利要求16所述的水溶性膜，其中所述增塑剂选自由山梨糖醇、甘油、二甘油、丙二醇、乙二醇、二甘醇、三甘醇、四甘醇、高达MW400的聚乙二醇、2甲基1,3丙二醇、乳酸、单乙酸甘油酯、三乙酸甘油酯、柠檬酸三乙酯、1,3丁二醇、三羟甲基丙烷TMP、聚醚三醇及其组合组成的组中。

7、18根据权利要求16或17中任一项所述的水溶性膜，其中所述增塑剂或增塑剂组合以至少约25PHR的量，任选以在约25至约50PHR的范围内的量存在。19根据前述权利要求中任一项所述的水溶性膜，所述水溶性膜还包含表面活性剂。20根据权利要求19所述的水溶性膜，其中所述表面活性剂选自由二烷基磺基琥珀酸酯、甘油和丙二醇的乳酸化脂肪酸酯、脂肪酸乳酰酯、烷基硫酸钠、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯65、聚山梨醇酯80、烷基聚乙二醇醚、卵磷脂、甘油和丙二醇的乙酰化脂肪酸酯、月桂基硫酸钠、脂肪酸乙酰化酯、肉豆蔻酰二甲基氧化胺、牛酯烷基三甲基氯化铵、季铵化合物、其盐以及前述的任何的组合组成的组中。21

8、根据权利要求1920中任一项所述的水溶性膜，其中所述表面活性剂以至少约005PHR的量，任选以在约005至约2PHR的范围内的量存在于所述水溶性膜中。22根据前述权利要求中任一项所述的水溶性膜，其中在形成后的所述膜中的酶活性恢复为用于制备所述膜的酶组合物原材料中的原始酶活性的至少70。23一种形成水溶性膜的方法，所述方法包括提供溶解于水中的根据前述权利要求中任一项所述的水溶性混合物；将所述溶解的混合物铸造到预热至低于77的温度的表面上，所述温度任选在约66至约77的范围内，或约74；经过小于24小时的时期，使来自所述铸造混合物的水干燥，所述时期任选小于12小时、任选小于8小时、任选小于2小时、

9、任选小于1小时、任选小于45分钟、任选小于30分钟、任选小于20分钟、任选小于10分钟，例如在约6分钟至约10分钟的范围内，或8分钟，以形成水溶性膜。24一种形成水溶性膜的方法，其中所述水溶性膜由根据下述步骤制备的水溶性混合物铸造提供水溶性树脂、水和除酶外的任选添加剂的混合物；将所述混合物煮沸至少约30分钟；使所述混合物在烘箱中在至少40的温度下除气；所述温度任选在40至70的范围内，例如约65；在65或更低的温度下，将至少一种酶、任选的至少一种增塑剂和任选另外的水加入所述混合物；和将所述混合物任选不含涡旋地搅拌直至所述混合物在颜色和稠度上看起来是基本上均匀时；任选所述搅拌持续在30分钟至90

10、分钟范围内的时间段，任选至少1小时；和在所述搅拌时间段后迅速铸造所述混合物。权利要求书CN104169411A1/37页4掺入酶的水溶性组合物及其制备方法技术领域0001本公开内容一般涉及水溶性膜。更具体而言，本公开内容涉及包含第一水溶性树脂、酶和酶稳定剂的混合物的水溶性膜，所述酶稳定剂包含酶的功能底物。背景技术0002水溶性膜是本领域众所周知的。水溶性膜具有许多应用，例如包装材料，其中膜自身可构成水溶性包。这些组合物具有易于分配DOSE、处理、转运和贮存的优点。0003水溶性包非常适合于单一剂量应用，其中该包封入洗衣用洗涤剂、漂白剂或其他洗衣用添加剂、织物护理、洗碗盘、硬表面清洁、美容护理、

11、皮肤护理、其他个人护理或食物产品组合物。通常在水溶性包中封入的是活性剂，所述活性剂在其他活性剂的存在下可变得不稳定，或者可导致其他成分变得不稳定，由此限制哪些活性剂可在单一剂型中预包装在一起。0004在先前已知的膜中的酶活性趋于很低并且随着贮存时间降低。当酶组合物包括蛋白酶时，这种活性丧失趋于尤为严重，因为蛋白酶可分解自身或其他酶。在补偿酶活性的降低的尝试中，大浓度的酶已包括在膜组合物中，并且该方法不总是成功产生具有至少适度活性的膜。相应地，高度希望产生维持高水平的酶活性而无需由高浓度的酶起始的膜即在加工和贮存后的高酶恢复百分比。0005通常用作洗衣和洗碗盘应用中的添加剂的活性剂包括酶例如蛋白

12、酶、淀粉酶、脂酶和氧化还原酶，包括但不限于催化漂白剂形成的氧化还原酶。因此，尤其是含有在蛋白酶的存在下维持高水平活性的酶的水溶性膜，对于在封入洗涤剂或其他洗衣或洗碗盘添加剂的水溶性单一剂量包中使用是有利的。发明内容0006本公开内容的一个方面是包括第一水溶性树脂、酶和酶底物的水溶性混合物的水溶性组合物。该组合物可采取例如膜的形式。0007本公开内容的另一个方面是包括水溶性树脂和酶的水溶性混合物的水溶性组合物例如膜，所述水溶性树脂包含丙烯酰胺基2甲基丙磺酸酯，其中在膜形成后的酶活性恢复为至少87。0008本公开内容的另一个方面是形成水溶性膜的方法，所述方法包括下述步骤提供溶解于水中的根据本公开内

13、容的水溶性混合物；将水溶性混合物铸造到预热至低于77的温度的表面上，所述温度任选在约66至约77或约74的范围内；经过小于24小时的时期，使来自铸造混合物的水干燥，所述时期任选小于12小时、任选小于8小时、任选小于2小时、任选小于1小时、任选小于45分钟、任选小于30分钟、任选小于20分钟、任选小于10分钟，例如在约6分钟至约10分钟或8分钟的范围内，以形成水溶性膜。0009本公开内容的另一个方面是形成水溶性膜的方法，其中所述水溶性膜由根据下述步骤制备的水溶性混合物铸造说明书CN104169411A2/37页50010提供水溶性树脂、水和除酶外的任何任选添加剂的混合物；将混合物煮沸30分钟；使

14、混合物在烘箱中在至少40的温度下除气；所述温度任选在40至70的范围内，例如约65；0011在65或更低的温度下，将至少一种酶、任选的至少一种增塑剂和任选另外的水加入混合物；并且将混合物任选不含涡旋地搅拌直至混合物在颜色和稠度上看起来是基本上均匀时；任选搅拌持续在30分钟至90分钟范围内的时间段，任选至少1小时；并且在搅拌时间段后迅速铸造混合物，例如在4小时或2小时内，或在1小时或更短时间内。0012任选地，本文描述的水溶性膜可热成型，例如可热成型为袋。0013虽然本公开内容提供了膜例子，但组合物可采取其他形式和形状，包括具有基本上超过通常视为膜的厚度的形式和形状。0014对于本文描述的组合物

15、和方法，任选特点包括但不限于组分、其组成范围、取代物、条件和步骤，考虑选自本文提供的多个方面、实施例和例子。0015根据下述详细说明书的回顾，进一步的方面和优点对于本领域普通技术人员将是显而易见的。虽然组合物和方法对多种形式的实施例是容许的，但下文说明书包括应理解为本公开内容是举例说明性的具体实施例，并且不预期使本发明限制于本文描述的具体实施例。具体实施方式0016本文公开的是包括第一水溶性树脂、酶和酶稳定剂的水溶性混合物的水溶性组合物例如膜，所述酶稳定剂是酶的功能底物。任选地，水溶性膜包括两种或更多种类型的酶。本公开内容的一个方面的水溶性膜可以是特别有利的，因为它们可这样进行设计，使得高百分

16、比的酶在膜形成后保持活性。根据本公开内容的水溶性膜可任选这样进行设计，使得当膜在约5至约45范围内的温度下贮存至少2周或约2周至2年例如3个月的范围时，高百分比的酶保持活性。本文公开内容的水溶性膜可具有一种或多种其他任选优点，包括在含有蛋白酶和第二酶的膜中出乎意料地酶活性的高恢复，可热成型例如成为袋或包，用于酶递送至无尘基底的固体形式。0017膜、包及其制造方法和用途考虑包括这样的实施例，所述实施例包括下文进一步描述的另外任选元件、特点和步骤包括任何附图中所示的那些中的一种或多种的任何组合，除非另有说明。0018如本文使用的，术语“包含”指示除具体指定的之外，其他试剂、元件、步骤或特点的潜在包

17、括。0019如本文使用的并除非另有说明，否则以厘泊CP表示的粘度的所有测量均为20下的4溶液的。0020如本文使用的，“酶恢复百分比”指在一个或多个加工步骤或贮存时间后，例如在水溶性组合物例如膜加工步骤例如混合、铸造和干燥和在约5下约1个月的贮存时期后，保持活性的酶百分比。相应地，如本文使用的，“酶活性的恢复”或“酶活性恢复”指与原始酶活性相比较，例如与在加入膜中的原材料酶组合物的代表性样品中测量的酶活性相比较，在过程或贮存时间后维持的水溶性组合物中的酶活性。因此，例如，酶活性恢复可以是在制备组合物例如膜的加工步骤和在约5下约一个月的贮存时期后的酶活性与加说明书CN104169411A3/37

18、页6入膜中的原始酶组合物的酶活性的比率。考虑的加工步骤包括个别或组合的本文描述的每个步骤，例如但不限于加热步骤、溶解步骤、混合步骤例如湿混合步骤和干燥步骤例如任选伴随热的施加。酶活性可通过任何合适方法进行测量，只要相同或等价方法用于酶原材料测量和酶装载的、加工的组合物例如含酶膜测量。在一类实施例中，酶活性可通过比色方法进行测定。用于蛋白酶、淀粉酶和脂酶活性的比色测量在下文与实验结合进行描述。0021如本文使用的并除非另有说明，否则术语“重量”意指按整个膜的重量计的“干燥”非水份当适用时或按在袋内封入的整个组合物的重量计的份当适用时的鉴定元件的组成。如本文使用的并除非另有说明，否则术语“PHR”

19、意指每一百份水溶性聚乙烯醇PVOH树脂的鉴定元件份数的组成。0022水溶性膜、在其中使用的任选成分及其制备方法是本领域众所周知的。在一类实施例中，水溶性膜包括PVOH。PVOH是一般通过聚乙烯乙酸酯的醇解通常称为水解或皂化制备的合成树脂。其中基本上所有乙酸酯基团已转化为醇基的完全水解的PVOH是强氢键合的、高度结晶的聚合物，其仅溶解于热水大于约140F60中。如果在聚乙烯乙酸酯水解后允许保留足够数目的乙酸酯基团，PVOH聚合物随后被称为部分水解的，则它是较弱氢键合的并且更少结晶的并且在冷水小于约50F10中可溶的。中间产物冷/热水可溶性膜可包括例如中间产物部分水解的PVOH例如具有约94至约9

20、8的水解程度，并且仅在温水中是容易可溶的例如在约40和更高的温度下快速溶解。完全和部分水解的PVOH类型通常均被称为PVOH均聚物，尽管部分水解类型技术上是乙烯醇乙酸乙烯酯共聚物。0023在本公开内容的水溶性膜中包括的PVOH的水解程度可以是约75至约99。随着水解程度降低，由树脂制成的膜将具有减少的机械强度，但在约20以下的温度下更快的可溶性。随着水解程度增加，由树脂制成的膜将趋于在机械上更强，并且热成型性将趋于降低。PVOH的水解程度可这样加以选择，使得树脂的水溶性是温度依赖性的，并且因此由树脂和另外的成分制成的膜的可溶性也受影响。在一类实施例中，膜是冷水可溶的。在低于10的温度下的水中可

21、溶的冷水可溶性膜可包括具有在约75至约90范围内、或在约80至约90范围内、或在约85至约90范围内的水解程度的PVOH。在另一类实施例中，膜是热水可溶的。在至少约60的温度下的水中可溶的热水可溶性膜可包括具有至少约98的水解程度的PVOH。0024除PVOH之外或替代PVOH使用的其他成膜树脂可包括但不限于经修饰的聚乙烯醇，聚丙烯酸酯，水溶性丙烯酸酯共聚物，聚丙烯酰胺，聚乙烯吡咯烷酮，支链淀粉，水溶性天然聚合物包括但不限于瓜尔胶、黄原胶、角叉菜胶和淀粉，水溶性聚合物衍生物包括但不限于乙氧基化淀粉和羟丙基化淀粉、聚丙烯酰胺基2甲基丙磺酸钠、聚马来酸单甲酯、其共聚物以及上述任何的组合。在一类实施

22、例中，成膜树脂是由乙烯醇、乙酸乙烯酯和丙烯酰胺基2甲基丙磺酸钠组成的三聚物。出乎意料的是，在水溶性膜中包括和不包括酶底物的两者中，基于乙烯醇、乙酸乙烯酯和丙烯酰胺基2甲基丙磺酸钠三聚物的水溶性膜已证实酶活性的高恢复百分比。0025水溶性树脂可以任何合适的量包括在水溶性膜中，例如在约35重量至约90重量范围内的量。与所有酶、酶稳定剂和第二添加剂的组合量相比较，水溶性树脂量的优选说明书CN104169411A4/37页7重量比可以是任何合适的比率，例如在约05至约5、或约1至3、或约1至2范围内的比率。0026用于本文描述的膜中的水溶性树脂包括但不限于PVOH树脂的特征可在于关于所需膜特性的任何合

23、适粘度，任选在约50至约300CP、或约100CP至约25CP范围内的粘度。PVOH树脂的粘度通过使用具有UL适配器的BROOKELDLV型粘度计测量新鲜制备的溶液进行测定，如BRITISHSTANDARDENISO1502322006ANNEXEBROOKELDTEST方法中描述的。陈述在20下4聚乙烯醇水溶液的粘度是国际实践。本文以CP指定的所有PVOH粘度均应理解为指在20下4聚乙烯醇水溶液的粘度，除非另有说明。0027本领域充分已知PVOH树脂的粘度与相同PVOH树脂的重均分子量关联，并且通常粘度用作的取代物。因此，水溶性树脂的重均分子量任选可在约35,000至约190,000、或约8

24、0,000至约160,000的范围内。树脂的分子量仅需要足以允许其通过合适技术塑模，以形成薄塑料膜。0028酶0029考虑任何所需类型的酶均可用于本文描述的膜中。0030例如，此类酶包括在下述六个常规酶学委员会ENZYMECOMMISSIONEC类别中的任何一个中分类的酶即EC1的氧化还原酶其催化氧化/还原反应、EC2的转移酶其转移官能团，例如甲基或磷酸基、EC3的水解酶其催化多种键的水解、EC4的裂解酶其通过除水解和氧化外的方式切割多种键、EC5的异构酶其催化分子内的异构化改变和EC6的连接酶其以共价键连接两种分子。此类酶的例子包括EC1中的脱氢酶和氧化酶，EC2中的转氨酶和激酶，EC3中的

25、脂酶、纤维素酶、淀粉酶、甘露聚糖酶和肽酶亦称为蛋白酶或蛋白水解酶，EC4中的脱羧酶，EC5中的异构酶和变位酶，以及EC6中的合成酶和合酶。0031氧化还原酶0032氧化还原酶包括但不限于作用于供体的CHOH基团的氧化还原酶；作用于供体的醛或氧基的氧化还原酶；作用于供体的CHCH基团的氧化还原酶；作用于供体的CHNH2基团的氧化还原酶；作用于供体的CHNH基团的氧化还原酶；作用于NADH或NADPH的氧化还原酶；作用于作为供体的其他含氮化合物的氧化还原酶；作用于供体的硫基团的氧化还原酶；作用于供体的血红素基团的氧化还原酶；作用于作为供体的二酚和相关物质的氧化还原酶；作用于作为受体的过氧化物的氧化

26、还原酶；作用于作为供体的氢的氧化还原酶；作用于单一供体伴随分子氧的掺入的氧化还原酶加氧酶；作用于配对供体，伴随分子氧的掺入或还原的氧化还原酶；作用于作为受体的超氧化物自由基的氧化还原酶；氧化金属离子的氧化还原酶；作用于CH或CH2基团的氧化还原酶；作用于作为供体的铁硫蛋白的氧化还原酶；作用于作为供体的还原型黄素氧还蛋白的氧化还原酶；作用于供体中的磷或砷的氧化还原酶；作用于XH和YH以形成XY键的氧化还原酶；和作用于供体中的卤素的氧化还原酶。0033作用于供体的CHOH基团的氧化还原酶可包括但不限于下述氧化还原酶使用NAD或NADP作为受体包括醇脱氢酶、醇脱氢酶NADP、高丝氨酸脱氢酶、R,R丁

27、二醇脱氢酶、甘油脱氢酶、磷酸丙二醇脱氢酶、3磷酸甘油脱氢酶NAD、D木酮糖还原酶、L木酮糖还原酶、D阿拉伯糖醇4脱氢酶、L阿拉伯糖醇4脱氢酶、L阿拉伯糖醇2脱说明书CN104169411A5/37页8氢酶、L艾杜糖醇2脱氢酶、D艾杜糖醇2脱氢酶、半乳糖醇2脱氢酶、1磷酸甘露醇5脱氢酶、肌醇2脱氢酶、葡糖醛酸还原酶、葡糖醛酸内酯还原酶、醛还原酶、UDP葡萄糖6脱氢酶、组氨醇脱氢酶、奎尼酸脱氢酶、莽草酸脱氢酶、乙醛酸还原酶、L乳酸脱氢酶、D乳酸脱氢酶、甘油酸脱氢酶、3羟丁酸脱氢酶、3羟基异丁酸脱氢酶、3羟3甲戊醛酸还原酶、3羟3甲戊醛酸还原酶NADPH、羟甲基戊二酰辅酶A还原酶NADPH、3羟酰辅

28、酶A脱氢酶、乙酰乙酰辅酶A还原酶、苹果酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶草酰乙酸脱羧、苹果酸脱氢酶脱羧、苹果酸脱氢酶草酰乙酸脱羧NADP、异柠檬酸脱氢酶NAD、异柠檬酸脱氢酶NADP、磷酸葡萄糖酸2脱氢酶、磷酸葡萄糖酸脱氢酶脱羧、L古洛糖酸3脱氢酶、L阿拉伯糖1脱氢酶、葡萄糖1脱氢酶、半乳糖1脱氢酶、6磷酸葡萄糖脱氢酶、3羟基类固醇脱氢酶B特异性、3或17羟基类固醇脱氢酶、3羟基胆烷酸脱氢酶、3或20羟基类固醇脱氢酶、烯丙醇脱氢酶、乳醛还原酶NADPH、核糖醇2脱氢酶、果糖酮酸还原酶、塔格糖酮酸还原酶、3羟基丙酸脱氢酶、2羟基3氧化丙酸还原酶、4羟丁酸脱氢酶、雌二醇17脱氢酶、睾酮17脱氢酶、睾酮17脱氢

29、酶NADP、吡哆醇4脱氢酶、羟基癸酸脱氢酶、甘露醇2脱氢酶、葡糖酸5脱氢酶、醇脱氢酶NADP、甘油脱氢酶NADP、辛醇脱氢酶、R氨基丙醇脱氢酶、S,S丁二醇脱氢酶、乳醛还原酶、甲基乙二醛还原酶NADH依赖性、乙醛酸还原酶NADP、异丙醇脱氢酶NADP、羟基丙酮酸还原酶、苹果酸脱氢酶NADP、D苹果酸脱氢酶脱羧、二甲基苹果酸脱氢酶、3异丙基苹果酸脱氢酶、酮酸还原异构酶、高异柠檬酸脱氢酶、羟甲基戊二酰辅酶A还原酶、芳基醇脱氢酶、芳基醇脱氢酶NADP、草酰乙醇酸还原酶脱羧、酒石酸脱氢酶、3磷酸甘油脱氢酶NADP、磷酸甘油酸脱氢酶、二碘苯丙酮酸还原酶、3羟苄基醇脱氢酶、R2羟基脂肪酸脱氢酶、S2羟基脂

30、肪酸脱氢酶、3氧酰基酰基载体蛋白还原酶、酰基甘油酮磷酸还原酶、3脱氢鞘氨醇还原酶、L苏氨酸3脱氢酶、4氧脯氨酸还原酶、全反式视黄醇脱氢酶NAD、泛解酸4脱氢酶、吡哆醛4脱氢酶、肉毒碱3脱氢酶、吲哚乳酸脱氢酶、3咪唑5基乳酸脱氢酶、茚满醇脱氢酶、L木糖1脱氢酶、芹糖1还原酶、核糖1脱氢酶NADP、D阿拉伯糖1脱氢酶、D阿拉伯糖1脱氢酶NADP、葡萄糖1脱氢酶NAD、葡萄糖1脱氢酶NADP、半乳糖1脱氢酶NADP、醛糖1脱氢酶、D苏醛糖1脱氢酶、山梨糖5脱氢酶NADP、果糖5脱氢酶NADP、2脱氧D葡糖酸3脱氢酶、2脱氢3脱氧D葡糖酸6脱氢酶、2脱氢3脱氧D葡糖酸5脱氢酶、L艾杜糖2脱氢酶、L苏氨

31、酸3脱氢酶、3脱氢L古洛糖酸2脱氢酶、甘露糖醛酸还原酶、GDP甘露糖6脱氢酶、DTDP4脱氢鼠李糖还原酶、DTDP6脱氧L塔罗糖4脱氢酶、GDP6脱氧D塔罗糖4脱氢酶、UDPN乙酰葡糖胺6脱氢酶、核糖醇5磷酸2脱氢酶、甘露醇2脱氢酶NADP、山梨糖醇6磷酸2脱氢酶、15羟基前列腺素脱氢酶NAD、D松醇脱氢酶、红杉醇脱氢酶、紫苏醇脱氢酶、3羟基5类固醇脱氢酶、11羟基类固醇脱氢酶、16羟基类固醇脱氢酶、雌二醇17脱氢酶、20羟基类固醇脱氢酶、21羟基类固醇脱氢酶NAD、21羟基类固醇脱氢酶NADP、3羟基5雄甾烷17酮3脱氢酶、墨蝶呤还原酶、脲基乙醇酸脱氢酶、甘油2脱氢酶NADP、3羟基丁酰辅酶

32、A脱氢酶、UDPN乙酰胞壁酸脱氢酶、7羟基类固醇脱氢酶、双氢丁萘酮脱氢酶、胆甾烷四醇26脱氢酶、赤藓酮糖还原酶、环戊醇脱氢酶、十六醇脱氢酶、2炔1醇脱氢酶、羟基环己烷羧酸脱氢酶、羟基丙二酸脱说明书CN104169411A6/37页9氢酶、2脱氢泛酸内酯还原酶A特异性、2脱氢泛解酸2还原酶、3羟基4甲基胆甾烯羧酸3脱氢酶脱羧、2氧己二酸还原酶、L鼠李糖1脱氢酶、环己烷1,2二醇脱氢酶、D木糖1脱氢酶、12羟基类固醇脱氢酶、甘油3磷酸1脱氢酶NADP、3羟基2甲基丁酰辅酶A脱氢酶、D木糖1脱氢酶NADP、胆甾5烯3,7二醇3脱氢酶、香叶醇脱氢酶、羰基还原酶NADPH、L乙二醇脱氢酶、DTDP半乳糖

33、6脱氢酶、GDP4脱氢D鼠李糖还原酶、前列腺素F合酶、前列腺素E29还原酶、吲哚3乙醛还原酶NADH、吲哚3乙醛还原酶NADPH、长链醇脱氢酶、5氨基65磷酸核糖胺尿嘧啶还原酶、松柏醇脱氢酶、肉桂醇脱氢酶、15羟基前列腺素D脱氢酶NADP、15羟基前列腺素脱氢酶NADP、冰片脱氢酶、SUSNATE还原酶、醛糖6磷酸还原酶NADPH、7羟基类固醇脱氢酶NADP、1,3丙二醇脱氢酶、糖醛酸脱氢酶、IMP脱氢酶、托品酮还原酶I、薄荷醇脱氢酶、新薄荷醇脱氢酶、3或17羟基类固醇脱氢酶、3或20羟基类固醇脱氢酶、长链3羟基酰基辅酶A脱氢酶、3氧酰基酰基载体蛋白还原酶NADH、3羟基类固醇脱氢酶A特异性、

34、2脱氢泛酸内酯还原酶B特异性、葡糖酸2脱氢酶、法尼醇脱氢酶、苄基2甲基羟丁酸脱氢酶、吗啡6脱氢酶、二氢山柰酚4还原酶、6丙酮酰四氢蝶呤2还原酶、吐叶醇4脱氢酶、R4羟苯基乳酸脱氢酶、异薄荷二烯醇脱氢酶、甘露糖6磷酸6还原酶、十氯酮还原酶、4羟基环己烷羧酸脱氢酶、冰片脱氢酶、桧萜醇脱氢酶、二乙基2甲基3氧代琥珀酸还原酶、3羟基甘草亭酸脱氢酶、15羟基前列腺素I脱氢酶NADP、15羟基二十碳四烯酸脱氢酶、N酰基甘露糖胺1脱氢酶、黄烷酮4还原酶、8氧代助间型霉素还原酶、托品酮还原酶II、羟丙基丙酮酸还原酶、12羟基类固醇脱氢酶、317羟基类固醇脱氢酶NAD、N乙酰己糖胺1脱氢酶、6内羟基桉叶素脱氢酶

35、、香芹醇脱氢酶、甲醇脱氢酶、环己醇脱氢酶、紫檀素合酶、可待因酮还原酶NADPH、多花罂栗碱还原酶NADPH、D阿拉伯糖醇2脱氢酶、半乳糖醇1磷酸5脱氢酶、四羟基萘还原酶、S肉毒碱3脱氢酶、甘露醇脱氢酶、芴9醇脱氢酶、4羟甲基苯磺酸脱氢酶、6羟基己酸脱氢酶、3羟基庚二酰辅酶A脱氢酶、甲基庚烯酮还原酶、SN甘油1磷酸脱氢酶、4羟基苏氨酸4磷酸脱氢酶、1,5无水D果糖还原酶、L艾杜糖5脱氢酶、3甲基丁醛还原酶、DTDP4脱氢6脱氧葡萄糖还原酶、1脱氧D木酮糖5磷酸还原异构酶、2R羟丙基COM脱氢酶、2S羟丙基COM脱氢酶、3酮类固醇还原酶、GDPL岩藻糖合酶、R2羟酸脱氢酶、魏氏波瑞木胺VELLOS

36、IMINE脱氢酶、2,5二脱氢葡糖酸还原酶、反香芹醇脱氢酶、丝氨酸3脱氢酶、3羟基5类固醇脱氢酶、3羟基5类固醇脱氢酶、R3羟酸酯脱氢酶、S3羟酸酯脱氢酶、GDP4脱氢6脱氧D甘露糖还原酶、奎尼酸/莽草酸脱氢酶、甲基乙二醛还原酶NADPH依赖性、S羟甲基谷胱甘肽脱氢酶、3“脱氨基3“氧代烟酰胺还原酶、异柠檬酸高异柠檬酸脱氢酶、D阿拉伯糖醇脱氢酶NADP、黄氧素脱氢酶、山梨糖还原酶、4磷酸赤藓糖酸脱氢酶、2羟甲基戊二酸脱氢酶、1,5无水D果糖还原酶形成1,5无水D甘露醇、叶绿素IDEB还原酶、稻壳酮A合酶、二氢香芹醇脱氢酶、柠檬烯1,2二醇脱氢酶、3羟基丙酸脱氢酶NADP、苹果酸脱氢酶NADP、

37、NADP视黄醇脱氢酶、D阿拉伯糖醇磷酸脱氢酶、2,5二氨基6核糖氨基43H嘧啶酮5磷酸还原酶、二乙酰还原酶形成R乙偶姻、二乙酰还原酶形成S乙偶姻、UDP葡糖醛酸脱氢酶UDP4酮己糖醛酸HEXAURONICACID说明书CN104169411A7/37页10脱羧、S羟甲基真菌硫醇脱氢酶、D木糖还原酶、磷酸乙醛还原酶NADH、磺基丙二醇3脱氢酶、S磺基乳酸脱氢酶、S1苯基乙醇脱氢酶、2羟基4羧基粘康酸半醛半缩醛脱氢酶、磺基乙醛还原酶、大根香叶烯A醇脱氢酶和11顺式视黄醇脱氢酶；或使用细胞色素作为受体的氧化还原酶包括甘露醇脱氢酶细胞色素、L乳酸脱氢酶细胞色素、D乳酸脱氢酶细胞色素、D乳酸脱氢酶细胞色

38、素C553、聚乙烯醇脱氢酶细胞色素、甲醇脱氢酶细胞色素C和醇脱氢酶细胞色素C；或使用氧作为受体的氧化还原酶包括苹果酸氧化酶、葡萄糖氧化酶、己糖氧化酶、胆固醇氧化酶、芳基醇氧化酶、L古洛糖酸内酯氧化酶、半乳糖氧化酶、吡喃糖氧化酶、L山梨糖氧化酶、吡哆醇4氧化酶、醇氧化酶、儿茶酚氧化酶二聚化、S2羟酸氧化酶、蜕皮激素氧化酶、胆碱氧化酶、伯醇氧化酶、4羟基扁桃酸氧化酶、长链醇氧化酶、甘油3磷酸氧化酶、硫胺氧化酶、羟基植烷酸氧化酶、核苷氧化酶、N酰基己糖胺氧化酶、聚乙烯醇氧化酶、D阿拉伯糖1,4内酯氧化酶、香草醇氧化酶、核苷氧化酶形成H2O2、和D甘露醇氧化酶、糖醛氧化酶；或使用二硫化物作为受体包括维

39、生素K环氧化物还原酶华法林敏感的或维生素K环氧化物还原酶华法林不敏感的；或使用醌或相似化合物作为受体包括醌蛋白葡萄糖脱氢酶、甘油3磷酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶醌、醇脱氢酶醌、甲酸脱氢酶N、环状醇脱氢酶醌、和奎尼酸脱氢酶醌；或使用其他已知受体包括醇脱氢酶天青蛋白和葡萄糖6磷酸脱氢酶辅酶F420；或使用其他受体包括胆碱脱氢酶、2羟基戊二酸脱氢酶、葡糖酸2脱氢酶受体、脱氢葡糖酸脱氢酶、D2羟酸脱氢酶、乳酸苹果酸转氢酶、吡哆醇5脱氢酶、葡萄糖脱氢酶受体、果糖5脱氢酶、山梨糖脱氢酶、葡糖苷3脱氢酶、乙醇酸脱氢酶、纤维二糖脱氢酶受体、烷1醇脱氢酶受体、D山梨糖醇脱氢酶受体、甘油脱氢酶受体、羟酸酮酸转氢酶、3羟

40、基环己酮脱氢酶、R泛内酯脱氢酶黄素、葡萄糖果糖氧化还原酶、吡喃糖脱氢酶受体、2酮酸还原酶、S扁桃酸脱氢酶、L山梨糖1脱氢酶、甲酸脱氢酶受体、可溶性醌蛋白葡萄糖脱氢酶、NDMA依赖性醇脱氢酶和NDMA依赖性甲醇脱氢酶。0034作用于供体的醛或氧基的氧化还原酶可包括但不限于下述氧化还原酶使用NAD或NADP作为受体包括甲酸脱氢酶、醛脱氢酶NAD、醛脱氢酶NADP、醛脱氢酶NADP、苯甲醛脱氢酶NADP、甜菜醛脱氢酶、甘油醛3磷酸脱氢酶NADP、乙醛脱氢酶乙酰化、天冬氨酸半醛脱氢酶、甘油醛3磷酸脱氢酶磷酸化、甘油醛3磷酸脱氢酶NADP磷酸化、丙二酸半醛脱氢酶、琥珀酸半醛脱氢酶NADP、乙醛酸脱氢酶酰

41、化、丙二酸半醛脱氢酶乙酰化、氨基丁醛脱氢酶、戊二酸半醛脱氢酶、乙醇醛脱氢酶、乳醛脱氢酶、2氧醛脱氢酶NAD、琥珀酸半醛脱氢酶NAD、2氧异戊酸脱氢酶酰化、2,5二氧戊酸脱氢酶、甲基丙二酸半醛脱氢酶酰化、苯甲醛脱氢酶NAD、芳基醛脱氢酶、芳基醛脱氢酶NADP、L氨基己二酸半醛脱氢酶、氨基粘糠酸半醛脱氢酶、R脱氢泛解酸脱氢酶、视黄醛脱氢酶、N乙酰谷氨酰磷酸还原酶、苯基乙醛脱氢酶、3,7,12三羟基胆烷酸26AL26氧化还原酶、谷氨酸5半醛脱氢酶、十六醛脱氢酶酰化、甲酸脱氢酶NADP、肉桂酰辅酶A还原酶、甲醛脱氢酶、4三甲基氨基丁醛脱氢酶、长链醛脱氢酶、2氧醛脱氢酶NADP、长链脂肪酰基辅酶A还原酶

42、、丙酮酸脱氢酶NADP、氧戊二酸脱氢酶NADP、4羟基苯基乙醛脱氢酶、胍基丁醛脱氢酶、丁醛脱氢酶、苯基乙醛酸脱氢酶酰化、甘油醛3磷酸脱氢酶说明书CN104169411A108/37页11NADP磷酸化、5羧甲基2羟基粘康酸半醛脱氢酶、4羟基粘康酸半醛脱氢酶、4甲酰苯磺酸脱氢酶、6氧己酸脱氢酶、4羟基苯甲醛脱氢酶、水杨醛脱氢酶、香兰素脱氢酶、松柏醛脱氢酶、氟乙醛脱氢酶、谷氨酰TRNA还原酶、琥珀酰谷氨酸半醛脱氢酶、赤藓糖4磷酸脱氢酶、磺基乙醛脱氢酶、ABIETADIENAL脱氢酶、丙二酰辅酶A还原酶形成丙二酸半醛、琥珀酸半醛脱氢酶乙酰化、3,4脱氢己二酰辅酶A半醛脱氢酶NADP、2甲酰苯甲酸脱氢

43、酶、琥珀酸半醛脱氢酶NADP、长链酰基酰基载体蛋白还原酶、磺基乙醛脱氢酶酰化、以及脱辅基4胡萝卜醛加氧酶；或使用细胞色素作为受体包括甲酸脱氢酶细胞色素、甲酸脱氢酶细胞色素C553、和一氧化碳脱氢酶细胞色素B561；或使用氧作为受体包括醛氧化酶、丙酮酸氧化酶、草酸氧化酶、乙醛酸氧化酶、丙酮酸氧化酶辅酶A乙酰化、吲哚3乙醛氧化酶、吡哆醛氧化酶、芳基醛氧化酶、视黄醛氧化酶、4羟基苯基丙酮酸氧化酶和脱落酸醛氧化酶；或使用二硫化物作为受体包括丙酮酸脱氢酶乙酰转移、氧戊二酸脱氢酶琥珀酰转移和3甲基2氧丁酸脱氢酶2甲基丙酰转移；或使用醌或相似化合物作为受体包括丙酮酸脱氢酶醌；或使用铁硫蛋白作为受体包括丙酮酸

44、合酶、2氧丁酸合酶、2氧戊二酸合酶、一氧化碳脱氢酶铁氧还蛋白、醛铁氧还蛋白氧化还原酶、甘油醛3磷酸脱氢酶铁氧还蛋白、3甲基2氧丁酸脱氢酶铁氧还蛋白、吲哚丙酮酸铁氧还蛋白氧化还原酶和草酸氧化还原酶；或使用其他受体包括一氧化碳脱氢酶受体、醛脱氢酶吡咯喹啉醌、甲醛歧化酶、甲酰甲烷呋喃脱氢酶、羧酸还原酶和醛脱氢酶FAD不依赖性。0035作用于供体的CHCH基团的氧化还原酶可包括但不限于下述氧化还原酶使用NAD或NADP作为受体例如二氢嘧啶脱氢酶NAD、二氢嘧啶脱氢酶NADP、43氧类固醇5还原酶、可的松还原酶、葫芦素23还原酶、延胡索酸还原酶NADH、内消旋酒石酸脱氢酶、酰基辅酶A脱氢酶NADP、烯酰

45、酰基载体蛋白还原酶NADH、烯酰酰基载体蛋白还原酶NADPH、B特异性、2香豆酸还原酶、预苯酸脱氢酶、预苯酸脱氢酶NADP、二氢乳清酸脱氢酶NAD、二氢乳清酸脱氢酶NADP、硝基丙烯酸还原酶、3亚甲基羟吲哚还原酶、犬尿烯酸7,8二氢二醇脱氢酶、顺式1,2二氢苯1,2二醇脱氢酶、反式1,2二氢苯1,2二醇脱氢酶、7脱氢胆固醇还原酶、胆甾烯酮5还原酶、胆绿素还原酶、1,6二羟基环己2,4二烯1羧酸脱氢酶、二氢吡啶二羧酸还原酶、2十六醛还原酶、2,3二氢2,3二羟基苯甲酸脱氢酶、顺式1,2二氢1,2二羟基萘脱氢酶、孕酮5还原酶、2烯醇还原酶、马来酰乙酸还原酶、原叶绿素还原酶、2,4二烯酰辅酶A还原酶

46、NADPH、磷脂酰胆碱去饱和酶、缝籽嗪脱氢酶、顺式2烯酰辅酶A还原酶NADPH、反式2烯酰辅酶A还原酶NADPH、烯酰酰基载体蛋白还原酶NADPH、A特异性、2羟基6氧6苯基己2,4二烯酸还原酶、眼黄素还原酶、12氧代植二烯酸还原酶、阿罗酸脱氢酶、反式2烯酰辅酶A还原酶NAD、2羟基异黄酮还原酶、鹰嘴豆芽素A还原酶、茴蒿素1,2还原酶、15氧前列腺素13氧化酶、顺式3,4二氢菲3,4二醇脱氢酶、2羟基黄豆苷元还原酶、2甲基支链烯酰辅酶A还原酶、3S,4R3,4二羟基环己1,5二烯1,4二羧酸脱氢酶、前咕啉6A还原酶、顺式2,3二羟基联苯基2,3二醇脱氢酶、间苯三酚还原酶、2,3二羟基2,3二氢

47、对香豆酸脱氢酶、二苯并噻吩二氢二醇脱氢酶、对苯二甲酸1,2顺式二氢二醇脱氢酶、庚二酰辅酶A脱氢酶、2,4二氯苯甲酰辅酶A还原酶、邻苯二甲酸4,5顺式二氢二醇脱说明书CN104169411A119/37页12氢酶、5,6二羟基3甲基2氧1,2,5,6四氢喹啉脱氢酶、顺式二氢乙基儿茶酚脱氢酶、顺式1,2二羟基4甲基环己3,5二烯1羧酸脱氢酶、1,2二羟基6甲基环己3,5二烯羧酸脱氢酶、玉米素还原酶、14甾醇还原酶、24241甾醇还原酶、24甾醇还原酶、1,2二氢吐楞宁还原酶、2链烯还原酶、二乙烯叶绿素A8乙烯基还原酶、前咕啉2脱氢酶、花青素还原酶、阿罗酸脱氢酶NADP、阿罗酸脱氢酶NADP、红色叶

48、绿素代谢产物还原酶、胡薄荷酮还原酶、异胡椒酮还原酶、牻牛儿基牻牛儿基二磷酸还原酶、丙烯酰辅酶A还原酶NADPH、巴豆酰基辅酶A羧化酶/还原酶、巴豆酰基辅酶A还原酶、3顺式5,6二羟基环己1,3二烯1基丙酸脱氢酶、TRNA二氢尿苷16/17合酶NADP、TRNA二氢尿苷47合酶NADP、TRNA二氢尿苷20A/20B合酶NADP和TRNA二氢尿苷20合酶NADP，或使用细胞色素作为受体，例如L半乳糖内酯脱氢酶，或使用氧作为受体例如粪卟啉原氧化酶、原卟啉原氧化酶、胆红素氧化酶、酰基辅酶A氧化酶、二氢尿嘧啶氧化酶、四氢小檗碱氧化酶、开联蕃木鳖苷合酶、色氨酸,氧化酶、吡咯喹啉醌合酶和L半乳糖内酯氧化酶

49、，或使用醌或相关化合物作为受体例如琥珀酸脱氢酶泛醌、二氢乳清酸脱氢酶醌、原卟啉原IX脱氢酶甲萘醌、延胡索酸还原酶甲萘醌、15顺式八氢番茄红素去饱和酶以及9,9二顺式胡萝卜素去饱和酶，或使用铁硫蛋白作为受体例如6羟基烟酸还原酶、15,16二氢胆绿素铁氧还蛋白氧化还原酶、藻红素铁氧还蛋白氧化还原酶、植物光敏胆色素PHYTOCHROMOBILIN铁氧还蛋白氧化还原酶、藻蓝素铁氧还蛋白氧化还原酶、藻红素合酶、铁氧还蛋白原叶绿素还原酶ATP依赖性、苯甲酰辅酶A还原酶和4羟基苯甲酰辅酶A还原酶，或使用黄素作为受体例如丁酰辅酶A脱氢酶或4,4二脱辅基八氢番茄红素去饱和酶，或使用其他已知受体例如二氢乳清酸脱氢酶延胡索酸，或使用其他受体例如琥珀酸脱氢酶、酰基辅酶A脱氢酶、3氧类固醇1脱氢酶、3氧代5类固醇4脱氢酶、3氧代5类固醇4脱氢酶、戊二酰辅酶A脱氢酶、2糠酰辅酶A脱氢酶、异戊酰辅酶A脱氢酶、2甲基酰基辅酶A脱氢酶、长链酰基辅酶A脱氢酶、环己酮脱氢酶、异喹啉1氧化还原酶、喹啉2氧化还原酶、喹哪啶酸4氧化还原酶、喹啉4羧酸2氧化还原酶、R苄基琥珀酰