1、(10)申请公布号 CN 102676625 A (43)申请公布日 2012.09.19 CN 102676625 A *CN102676625A* (21)申请号 201210178993.2 (22)申请日 2012.05.24 C12P 21/06(2006.01) (71)申请人 中国海洋大学 地址 266100 山东省青岛市崂山区松岭路 238 号 (72)发明人 曾名湧 苑宁 赵元晖 王海涛 王伟 刘尊英 董士远 (54) 发明名称 一种能抑制神经氨酸酶活性肽的制备方法 (57) 摘要 本发明涉及一种能抑制神经氨酸酶活性肽的 制备方法， 其特征在于以鳕鱼皮为原料， 经过胃蛋 白酶
2、水解制得。 所得活性肽具有很强的抗H1N1流 感病毒活性， 并且无毒副作用。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 1 页 1/1 页 2 1. 一种能抑制神经氨酸酶活性肽的制备方法， 其特征在于以鳕鱼皮为原料， 用 HCl 浸 泡 20-30min， 将浸泡后的鳕鱼皮和蒸馏水按 1 5-7g/ml 的比例匀浆， 用 NaOH 将浆液的 pH 值调为 2.0-2.5 后加入胃蛋白酶， 加入量为鳕鱼皮质量的 1， 在 37的温度下酶解 6-8 小 时制得。 权 利 要 求 书 CN 10
3、2676625 A 2 1/1 页 3 一种能抑制神经氨酸酶活性肽的制备方法 技术领域 0001 本发明属于生物技术领域， 具体涉及一种能抑制神经氨酸酶活性肽的制备方法。 背景技术 0002 流感是一种常见多发的急性病毒性呼吸道传染病， 它严重地危害着人类健康， 流 行于全世界， 其波及范围之广， 造成经济损失之大位于传染性疾病之首。神经氨酸酶 (NA) 是作为流感病毒表面的一种重要抗原， 在病毒感染宿主细胞时， 主要起着识别细胞表面的 流感病毒受体， 促进病毒进入靶细胞内的作用。 0003 由于所有 A 型和 B 型流感病毒神经氨酸酶活性中心的氨基酸序列均高度保守， 所 以筛选神经氨酸酶抑制
4、剂是抗流感病毒的有效方法。目前， 一些人工合成的神经氨酸酶抑 制剂用于流感的治疗， 但其价格昂贵， 并会对神经系统产生不良反应等副作用。因此， 越来 越多的研究致力于探寻出具有神经氨酸酶抑制活性的天然产物。 Jones J C等发现， 来源于 纤维原细胞生长因子的一段20个氨基酸的多肽(EB)具有针对流感病毒各亚型的广谱抗病 毒活性， 也有研究表示从茶叶中提取的多酚类物质有抗流感的功效。 0004 目前， 尚未见到从鳕鱼皮中提取能抑制神经氨酸酶活性肽的报道。 发明内容 0005 本发明的目的是提供一种能抑制神经氨酸酶活性肽的制备方法， 以克服现有技术 的不足。 0006 本发明的技术方案 ：
5、0007 将鳕鱼皮去鳞去肉洗净， 用 HCl 浸泡 20-30min， 将浸泡后的鳕鱼皮和蒸馏水按 1 5-7g/ml 的比例匀浆， 用 NaOH 将浆液的 pH 值调为 2.0-2.5 后加入胃蛋白酶， 加入量为 鳕鱼皮质量的 1， 在 37的温度下酶解 6-8 小时制得一种能抑制神经氨酸酶的活性肽。 0008 本发明以低值鳕鱼皮为原料， 利用胃蛋白酶定向水解制备一种能抑制神经氨酸酶 的活性肽， 所得活性肽具有很强的抗 H1N1 流感病毒活性， 并且安全、 无毒， 在食品和药品领 域具有广阔的应用前景。 具体实施方式 0009 将鳕鱼皮去鳞去肉洗净， 用质量浓度 0.3的 HCl 浸泡 20-30min( 最好是 25min)， 将鳕鱼皮和蒸馏水按 1 5-7g/ml( 最好是 1 6g/ml) 的比例匀浆， 用 6mol/L 的 NaOH 将 浆液的 pH 值调为 2.0-2.5( 最好是 2.0) 后加入胃蛋白酶， 加入量为鳕鱼皮质量的 1， 在 37的温度下酶解 6-8 小时 ( 最好是 7 小时 ) 制得一种能抑制神经氨酸酶的活性肽。 0010 体外神经氨酸酶抑制实验结果显示， 10mg/ml的活性肽抑制率可达65.1； 细胞实 验证明， 本发明所制得的活性肽具有显著的抗 H1N1 流感病毒的活性。 说 明 书 CN 102676625 A 3