耐除草剂转基因大豆通用的标准分子检测试剂盒.pdf

1、(10)授权公告号 CN 203021569 U (45)授权公告日 2013.06.26 CN 203021569 U *CN203021569U* (21)申请号 201320039049.9 (22)申请日 2013.01.24 C12M 1/34(2006.01) C12Q 1/68(2006.01) (73)专利权人 东北农业大学 地址 150030 黑龙江省哈尔滨市香坊区木材 街 59 号 (72)发明人 仇有文 张明辉 曲波 袁肖寒 甄贞 于艳波 刘营 敖金霞 高学军 (74)专利代理机构 哈尔滨市松花江专利商标事 务所 23109 代理人 王艳萍 (54) 实用新型名称 耐除草

2、剂转基因大豆通用的标准分子检测试 剂盒 (57) 摘要 耐除草剂转基因大豆通用的标准分子检测试 剂盒， 本实用新型涉及一种检测试剂盒。 本实用新 型为了解决现有检测转基因大豆成分需要阳性物 质多的技术问题， 提供了一种耐除草剂转基因大 豆通用的标准分子检测试剂盒。耐除草剂转基因 大豆通用的标准分子检测试剂盒包括密封盒、 载 样板、 标准分子EP管、 无菌水试剂瓶、 10个引物EP 管和PCR预混液试剂管， 本实用新型只需用1个标 准分子即只有1个标准分子EP管便满足转基因大 豆检测需要。本实用新型轻巧、 简便快捷， 不仅可 以解决实验室普遍缺乏阳性标准物质的难题， 还 可以提高检测效率、 缩短

3、检测周期。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)实用新型专利 权利要求书1页 说明书3页 附图2页 (10)授权公告号 CN 203021569 U CN 203021569 U *CN203021569U* 1/1 页 2 1. 耐除草剂转基因大豆通用的标准分子检测试剂盒， 耐除草剂转基因大豆通用的标准 分子检测试剂盒包括密封盒 (1)、 载样板 (2)、 标准分子 EP 管 (3)、 无菌水试剂瓶 (4)、 1F 引 物 EP 管 (5)、 1R 引物 EP 管 (6)、 2F 引物 EP 管 (7)、 2

4、R 引物 EP 管 (8)、 3F 引物 EP 管 (9)、 3R 引物 EP 管 (10)、 4F 引物 EP 管 (11)、 4R 引物 EP 管 (12)、 5F 引物 EP 管 (13)、 5R 引物 EP 管 (14) 和 PCR 预混液试剂管 (15)， 所述载样板 (2) 设置在密封盒 (1) 内， 载样板 (2) 上设有 第一载样孔 (3-1)、 第二载样孔 (4-1)、 第三载样孔 (5-1)、 第四载样孔 (6-1)、 第五载样孔 (7-1)、 第六载样孔(8-1)、 第七载样孔(9-1)、 第八载样孔(10-1)、 第九载样孔(11-1)、 第十 载样孔 (12-1)、

5、第十一载样孔 (13-1)、 第十二载样孔 (14-1) 和第十三载样孔 (15-1)， 标准 分子EP管(3)设置在第一载样孔(3-1)中， 无菌水试剂瓶(4)设置在第二载样孔(4-1)中， 1F 引物 EP 管 (5) 设置在第三载样孔 (5-1) 中， 1R 引物 EP 管 (6) 设置在第四载样孔 (6-1) 中， 2F 引物 EP 管 (7) 设置在第五载样孔 (7-1) 中， 2R 引物 EP 管 (8) 设置在第六载样孔 (8-1) 中， 3F 引物 EP 管 (9) 设置在第七载样孔 (9-1) 中， 3R 引物 EP 管 (10) 设置在第八载 样孔 (10-1) 中， 4F

6、 引物 EP 管 (11) 设置在第九载样孔 (11-1) 中， 4R 引物 EP 管 (12) 设置 在第十载样孔 (12-1) 中， 5F 引物 EP 管 (13) 设置在第十一载样孔 (13-1) 中， 5R 引物 EP 管 (14) 设置在第十二载样孔 (14-1) 中， PCR 预混液试剂管 (15) 设置在第十三载样孔 (15-1) 中， 其特征在于所述标准分子 EP 管 (3) 包括标准分子 EP 管内壁 (3-3)、 标准分子 EP 管外 壁 (3-2)、 标准分子 EP 管内腔 (3-4) 和筋板 (3-5)， 所述标准分子 EP 管内壁 (3-3) 位于标 准分子 EP 管

7、外壁 (3-2) 的内部， 标准分子 EP 管内壁 (3-3) 与标准分子 EP 管外壁 (3-2) 所 形成的空腔为标准分子 EP 管内腔 (3-4)， 标准分子 EP 管内壁 (3-3) 与标准分子 EP 管外壁 (3-2) 由筋板 (3-5) 连接。 2. 根据权利要求 1 所述耐除草剂转基因大豆通用的标准分子检测试剂盒， 其特征在于 所述的无菌水试剂瓶 (4) 为白色无菌水试剂瓶。 3. 根据权利要求 1 所述耐除草剂转基因大豆通用的标准分子检测试剂盒， 其特征在于 所述的标准分子 EP 管内腔 (3-4) 内装有水或者冰。 权 利 要 求 书 CN 203021569 U 2 1/3

8、 页 3 耐除草剂转基因大豆通用的标准分子检测试剂盒 技术领域 0001 本实用新型涉及一种检测试剂盒， 具体涉及已经商品化的四种耐除草剂转基因大 豆的转基因成分检测用的试剂盒。 背景技术 0002 标准分子是一种重组质粒分子， 其一般包含转基因作物检测的外源基因或品系特 异性片段以及物种特异性片段。由于操作简便、 生产成本低、 容易获得高纯度和高浓度 DNA 样品， 且在一个标准分子中可容纳多个目标序列等突出优点， 近年来， 标准分子被认为是解 决转基因作物检测标准物质缺乏的有效途径之一， 已作为新型 DNA 标准物质用于转基因作 物检测和定量分析。鉴于标准分子质粒具有方便、 易获得、 检测

9、结果准确等优点， 构建阳性 标准分子已经成为国际上转基因检测领域的研究热点， 但是现有技术中所用的 EP 管都需 要在冰盒中保存， 在常温操作下， 药品极易失效。 实用新型内容 0003 本实用新型为了解决现有 EP 管都需要在冰盒中保存以免药品长期在常温下失效 的技术问题， 提供了一种耐除草剂转基因大豆通用的标准分子检测试剂盒。 0004 耐除草剂转基因大豆通用的标准分子检测试剂盒包括密封盒、 载样板、 标准分子 EP 管、 无菌水试剂瓶、 1F 引物 EP 管、 1R 引物 EP 管、 2F 引物 EP 管、 2R 引物 EP 管、 3F 引物 EP 管、 3R 引物 EP 管、 4F 引

10、物 EP 管、 4R 引物 EP 管、 5F 引物 EP 管、 5R 引物 EP 管和 PCR 预混液试 剂管， 所述载样板设置在密封盒内， 载样板上设有第一载样孔、 第二载样孔、 第三载样孔、 第 四载样孔、 第五载样孔、 第六载样孔、 第七载样孔、 第八载样孔、 第九载样孔、 第十载样孔、 第 十一载样孔、 第十二载样孔和第十三载样孔， 标准分子 EP 管设置在第一载样孔中， 无菌水 试剂瓶设置在第二载样孔中， 1F 引物 EP 管设置在第三载样孔中， 1R 引物 EP 管设置在第四 载样孔中， 2F 引物 EP 管设置在第五载样孔中， 2R 引物 EP 管设置在第六载样孔中， 3F 引物

11、 EP 管设置在第七载样孔中， 3R 引物 EP 管设置在第八载样孔中， 4F 引物 EP 管设置在第九载 样孔中， 4R 引物 EP 管设置在第十载样孔中， 5F 引物 EP 管设置在第十一载样孔中， 5R 引物 EP 管设置在第十二载样孔中， PCR 预混液试剂管设置在第十三载样孔中， 所述标准分子 EP 管包括标准分子 EP 管内壁、 标准分子 EP 管外壁、 标准分子 EP 管内腔和筋板， 所述标准分子 EP管内壁位于标准分子EP管外壁的内部， 标准分子EP管内壁与标准分子EP管外壁所形成 的空腔为标准分子 EP 管内腔， 标准分子 EP 管内壁与标准分子 EP 管外壁由筋板连接。 0

12、005 本实用新型只需用 1 个标准分子即只有 1 个标准分子 EP 管便满足转基因大豆检 测需要。采用本实用新型可以检测耐除草剂转基因大豆 A2704-12、 耐除草剂转基因大豆 A5547-127、 抗草甘膦转基因大豆 MON89788、 抗草甘膦转基因大豆 GTS40-3-2 的外源基因和 大豆的内参基因。 本实用新型轻巧、 简便快捷， 不仅可以解决实验室普遍缺乏阳性标准物质 的难题， 还可以提高检测效率、 缩短检测周期， 本实用新型由于采用了双层结构， EP 管内腔 3-4 内装有水或者冰， 保证了实验操作时的低温环境， 不需要将 EP 管放在冰盒中保存， 解决 说 明 书 CN 20

13、3021569 U 3 2/3 页 4 了现有 EP 管都需要在冰盒中保存以免药品长期在常温下失效的技术问题。 附图说明 0006 图 1 是本实用新型的整体结构示意图 ； 0007 图 2 是载样板的示意图 ； 0008 图 3 是标准分子 EP 管的整体结构示意图 ； 0009 图 4 是图 3 的 A-A 剖视图。 具体实施方式 0010 本实用新型技术方案不局限于以下所列举具体实施方式， 还包括各具体实施方式 间的任意组合。 0011 具体实施方式一 ： 本实施方式耐除草剂转基因大豆通用的标准分子检测试剂盒包 括密封盒 1、 载样板 2、 标准分子 EP 管 3、 无菌水试剂瓶 4、

14、1F 引物 EP 管 5、 1R 引物 EP 管 6、 2F 引物 EP 管 7、 2R 引物 EP 管 8、 3F 引物 EP 管 9、 3R 引物 EP 管 10、 4F 引物 EP 管 11、 4R 引 物 EP 管 12、 5F 引物 EP 管 13 和 5R 引物 EP 管 14 和 PCR 预混液试剂管 15， 所述载样板 2 设 置在密封盒1内， 载样板2上设有第一载样孔3-1、 第二载样孔4-1、 第三载样孔5-1、 第四载 样孔 6-1、 第五载样孔 7-1、 第六载样孔 8-1、 第七载样孔 9-1、 第八载样孔 10-1、 第九载样孔 11-1、 第十载样孔 12-1、

15、第十一载样孔 13-1 和第十二载样孔 14-1 和第十三载样孔 15-1， 标 准分子 EP 管 3 设置在第一载样孔 3-1 中， 无菌水试剂瓶 4 设置在第二载样孔 4-1 中， 1F 引 物 EP 管 5 设置在第三载样孔 5-1 中， 1R 引物 EP 管 6 设置在第四载样孔 6-1 中， 2F 引物 EP 管 7 设置在第五载样孔 7-1 中， 2R 引物 EP 管 8 设置在第六载样孔 8-1 中， 3F 引物 EP 管 9 设置在第七载样孔 9-1 中， 3R 引物 EP 管 10 设置在第八载样孔 10-1 中， 4F 引物 EP 管 11 设 置在第九载样孔 11-1 中

16、， 4R 引物 EP 管 12 设置在第十载样孔 12-1 中， 5F 引物 EP 管 13 设 置在第十一载样孔 13-1 中， 5R 引物 EP 管 14 设置在第十二载样孔 14-1 中， PCR 预混液试剂 管 15 设置在第十三载样孔 15-1 中， 所述标准分子 EP 管 3 包括标准分子 EP 管内壁 3-3、 标 准分子 EP 管外壁 3-2、 标准分子 EP 管内腔 3-4 和筋板 3-5， 所述标准分子 EP 管内壁 3-3 位 于标准分子 EP 管外壁 3-2 的内部， 标准分子 EP 管内壁 3-3 与标准分子 EP 管外壁 3-2 所形 成的空腔为标准分子 EP 管内

17、腔 3-4， 标准分子 EP 管内壁 3-3 与标准分子 EP 管外壁 3-2 由 筋板 3-5 连接。 0012 利用本实用新型进行检测耐除草剂转基因大豆 A2704-12 基因、 耐除草剂转基因 大豆A5547-127基因、 抗草甘膦转基因大豆MON89788基因、 抗草甘膦转基因大豆GTS40-3-2 的外源基因和大豆的内参基因的方法如下 ： 0013 一、 取 10 个反应管， 然后向第一个反应管中加入 0.5L1F 引物 EP 管 5 中的溶液、 0.5L1R 引物 EP 管 6 中的溶液、 5LPCR 预混液试剂管 15 中的 PCR 预混液、 18.2.L 无菌 水试剂瓶 4 中

18、的无菌水和 0.8L 待测样品 ； 0014 向第二个反应管中加入 0.5L1F 引物 EP 管 5 中的溶液、 0.5L1R 引物 EP 管 6 中 的溶液、 5LPCR 预混液试剂管 15 中的 PCR 预混液、 18.2.L 无菌水试剂瓶 4 中的无菌水 和 0.8L 标准分子 EP 管 3 中的标准分子 ； 0015 向第三个反应管中加入 0.5L2F 引物 EP 管 7 中的溶液、 0.5L2R 引物 EP 管 8 中 说 明 书 CN 203021569 U 4 3/3 页 5 的溶液、 5LPCR 预混液试剂管 15 中的 PCR 预混液、 18.2.L 无菌水试剂瓶 4 中的无

19、菌水 和 0.8L 待测样品 ； 0016 向第四个反应管中加入 0.5L2F 引物 EP 管 7 中的溶液、 0.5L2R 引物 EP 管 8 中 的溶液、 5LPCR 预混液试剂管 15 中的 PCR 预混液、 18.2.L 无菌水试剂瓶 4 中的无菌水 和 0.8L 标准分子 EP 管 3 中的标准分子 ； 0017 向第五个反应管中加入 0.5L3F 引物 EP 管 9 中的溶液、 0.5L3R 引物 EP 管 10 中的溶液、 5LPCR 预混液试剂管 15 中的 PCR 预混液、 18.2.L 无菌水试剂瓶 4 中的无菌 水和 0.8L 待测样品 ； 0018 向第六个反应管中加入

20、 0.5L3F 引物 EP 管 9 中的溶液、 0.5L3R 引物 EP 管 10 中的溶液、 5LPCR 预混液试剂管 15 中的 PCR 预混液、 18.2.L 无菌水试剂瓶 4 中的无菌 水和 0.8L 标准分子 EP 管 3 中的标准分子 ； 0019 向第七个反应管中加入 0.5L4F 引物 EP 管 11 中的溶液、 0.5L4R 引物 EP 管 12 中的溶液、 5LPCR 预混液试剂管 15 中的 PCR 预混液、 18.2.L 无菌水试剂瓶 4 中的无菌 水和 0.8L 待测样品 ； 0020 向第八个反应管中加入 0.5L4F 引物 EP 管 11 中的溶液、 0.5L4R

21、 引物 EP 管 12 中的溶液、 5LPCR 预混液试剂管 15 中的 PCR 预混液、 18.2.L 无菌水试剂瓶 4 中的无菌 水和 0.8L 标准分子 EP 管 3 中的标准分子 ； 0021 向第九个反应管中加入 0.5L5F 引物 EP 管 13 中的溶液、 0.5L5R 引物 EP 管 14 中的溶液、 5LPCR 预混液试剂管 15 中的 PCR 预混液、 18.2.L 无菌水试剂瓶 4 中的无菌 水和 0.8L 待测样品 ； 0022 向第十个反应管中加入 0.5L5F 引物 EP 管 13 中的溶液、 0.5L5R 引物 EP 管 14 中的溶液、 5LPCR 预混液试剂管

22、 15 中的 PCR 预混液、 18.2.L 无菌水试剂瓶 4 中的无菌 水和 0.8L 标准分子 EP 管 3 中的标准分子 ； 0023 二、 将经过步骤一处理的 10 个反应管放入 PCR 仪中进行反应， 反应条件为 ： 预 变性 95 3min ； 35 个循环 ： 变性 95 30sec， 退火 58 30sec， 延伸 72 30sec ； 后延伸 72 3min， 获得 PCR 产物 ； 0024 三、 将 PCR 产物通过 1.5琼脂糖凝胶电泳， 然后利用凝胶成像仪进行检测。 0025 具体实施方式二 ： 本实施方式与具体实施方式一不同的是所述的无菌水试剂瓶 4 为白色无菌水试剂瓶。其它与具体实施方式一相同。 0026 具体实施方式三 ： 本实施方式与具体实施方式一不同的是所述的标准分子 EP 管 内腔 3-4 内装有水或者冰。其它与具体实施方式一相同。 说 明 书 CN 203021569 U 5 1/2 页 6 图 1 图 2 图 3 说 明 书 附 图 CN 203021569 U 6 2/2 页 7 图 4 说 明 书 附 图 CN 203021569 U 7