生物医学组合物.pdf

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201410110723.7 (22)申请日 2014.03.24 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 104548109 A (43)申请公布日 2015.04.29 (30)优先权数据 102138398 2013.10.24 TW (73)专利权人 财团法人工业技术研究院 地址 中国台湾新竹县 (72)发明人 罗雅勤 梁祥发 魏明正 吕瑞梅 林敏英 刘志鹏 刘俊旻 曾湘文 邓泽民 陈瑞祥 周怡满 谢依婷 杜佳穆 (74)专利代理机构 北京市柳沈律师事务所 111

2、05 代理人 贾静环 (51)Int.Cl. A61K 47/36(2006.01) A61K 47/61(2017.01) A61K 9/51(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (56)对比文件 CN 103893813 A,2014.07.02, Hyun-Jong Cho et alPolyethylene glycol-conjugated hyaluronic acid- ceramide self-assembled nanoparticles for targeted delivery of doxorubicin. Biomaterials .2011,

3、第33卷摘要及图1-2. Jing-liang Wu et alPreparation and characterization of nanoparticles based on histidinehyaluronic acid conjugates as doxorubicin carriers. J Mater Sci: Mater Med .2012,第23卷摘要、 图1及2.1和3.1 节. Jing-liang Wu et alPreparation and characterization of nanoparticles based on histidinehyaluronic

4、 acid conjugates as doxorubicin carriers. J Mater Sci: Mater Med .2012,第23卷摘要、 图1及2.1和3.1 节. 审查员 李濯冰 (54)发明名称 生物医学组合物 (57)摘要 本发明提供一种生物医学组合物， 包括： 透 明质酸； 经修饰的组氨酸； 以及聚合物或C4-C20烷 类， 其中该经修饰的组氨酸与该聚合物或C4-C20 烷类， 接枝于该透明质酸的至少一个伯羟基 (primary hydroxyl group)上， 以与该透明质酸 形成透明质酸衍生物， 且其中该经修饰的组氨酸 的接枝率为约1-100%， 而该聚合物或

5、C4-C20烷类 的接枝率为约0-40%。 权利要求书3页 说明书21页 附图15页 CN 104548109 B 2018.09.18 CN 104548109 B 1.一种生物医学组合物， 包括： 透明质酸； 经修饰的组氨 酸； 以及 聚合物或C4-C20烷类， 其中所述经修饰的组氨 酸与所述聚合物或C4-C20烷类， 接枝于所述透明质酸的至少一 个伯羟基上， 以与所述透明质酸形成透明质酸衍生物， 且其中所述经修饰的组氨 酸的接枝率为1100， 而所述聚合物或C4-C20烷类的接枝 率为040， 当所述聚合物或C4-C20烷类的接枝率为0时， 所述透明质酸衍生物的分子式如以下式 (I)所示

6、： 其中R1为经修饰的组氨 酸， a为15-1200的正整数。 2.权利要求1所述的生物医学组合物， 其中所述透明质酸的至少一个伯羟基位于所述 透明质酸中的至少一个双糖单位的N-乙酰葡糖胺部分的第5个碳上。 3.权利要求1所述的生物医学组合物， 其中所述透明质酸分子量为7,000500,000。 4.权利要求1所述的生物医学组合物， 其中所述经修饰的组氨 酸的接枝率为1 100， 而所述聚合物或C4-C20烷类的接枝率为1-40。 5.权利要求4所述的生物医学组合物， 其中所述透明质酸衍生物的分子式如以下式 (II)所示： 其中R1为经修饰的组氨 酸， R2为聚合物或C4-C20烷类， p与q

7、为正整数， 且p与q的比值介 于0.1-100之间。 6.权利要求1所述的生物医学组合物， 其中所述经修饰的组氨 酸选自Boc-组氨 酸、 Cbz-组氨 酸、 Fmoc-组氨 酸或Ac-组氨 酸。 权 利 要 求 书 1/3 页 2 CN 104548109 B 2 7.权利要求1所述的生物医学组合物， 其中所述经修饰的组氨 酸为Boc-组氨 酸。 8.权利要求7所述的生物医学组合物， 其中所述Boc-组氨 酸的接枝率为1100， 而 所述聚合物或C4-C20烷类的接枝率为0。 9.权利要求1所述的生物医学组合物， 其中所述聚合物选自聚乙二醇、 聚己内酯、 聚乳 酸、 聚乙醇酸、 聚乳酸-聚乙

8、醇酸或聚乙烯吡咯烷酮。 10.权利要求1所述的生物医学组合物， 其中所述聚合物为聚乙二醇。 11.权利要求10所述的生物医学组合物， 其中所述聚乙二醇的接枝率为140。 12.权利要求10所述的生物医学组合物， 其中所述经修饰的组氨 酸为Boc-组氨 酸， 且 其中所述Boc-组氨 酸的接枝率为180， 而所述聚乙二醇的接枝率为130。 13.权利要求1所述的生物医学组合物， 其中所述C4-C20烷类选自C5H11、 C7H15、 C9H19或 C11H23。 14.权利要求1所述的生物医学组合物， 其中所述C4-C20烷类为C11H23。 15.权利要求14所述的生物医学组合物， 其中所述C

9、11H23的接枝率为140。 16.权利要求14所述的生物医学组合物， 其中所述经修饰的组氨 酸为Boc-组氨 酸， 且 其中所述Boc-组氨 酸的接枝率为180， 而所述C11H23的接枝率为130。 17.权利要求1所述的生物医学组合物， 其中所述透明质酸衍生物的分子量为7,000-1, 500,000。 18.权利要求1所述的生物医学组合物， 更包括在水中带正电的活性成分， 其中所述在 水中带正电的活性成分与所述透明质酸衍生物的羧基正负电相吸， 以使所述在水中带正电 的活性成分包覆于所述透明质酸衍生物中。 19.权利要求18所述的生物医学组合物， 其中所述透明质酸衍生物与所述在水中带正

10、电的活性成分的重量比为1.25:1-50:1。 20.权利要求18所述的生物医学组合物， 其中所述透明质酸衍生物与所述在水中带正 电的活性成分的重量比为2:125:1。 21.权利要求18所述的生物医学组合物， 其中所述在水中带正电的活性成分选自阿霉 素、 依立替康、 庆大霉素或铂金化合物。 22.权利要求21所述的生物医学组合物， 其中所述铂金化合物选自(1,2-二氨基环己 烷)二氯化铂、 顺铂或奥沙利铂。 23.权利要求18所述的生物医学组合物， 其中所述经修饰的组氨 酸为Boc-组氨 酸， 而 所述聚合物或C4-C20烷类的接枝率为0， 且该在水中带正电的活性成分为阿霉素、 依立替康、

11、庆大霉素或(1,2-二氨基环己烷)二氯化铂。 24.权利要求23所述的生物医学组合物， 其中所述透明质酸的至少一个伯羟基位于所 述透明质酸中的至少一个双糖单位的N-乙酰葡糖胺部分的第5个碳上。 25.权利要求23所述的生物医学组合物， 其中所述Boc-组氨 酸的接枝率为180， 而 所述透明质酸衍生物与所述在水中带正电的活性成分的重量比为1.25:125:1。 26.权利要求18所述的生物医学组合物， 其中所述经修饰的组氨 酸为Boc-组氨 酸， 而 所述聚合物或C4-C20烷类为聚乙二醇， 且所述在水中带正电的活性成分为阿霉素、 依立替 康、 庆大霉素或(1,2-二氨基环己烷)二氯化铂。 2

12、7.权利要求26所述的生物医学组合物， 其中所述透明质酸的至少一个伯羟基位于所 权 利 要 求 书 2/3 页 3 CN 104548109 B 3 述透明质酸中的至少一个双糖单位的N-乙酰葡糖胺部分的第5个碳上。 28.权利要求26所述的生物医学组合物， 其中所述Boc-组氨 酸的接枝率为180， 所 述聚乙二醇的接枝率为130， 而所述透明质酸衍生物与所述在水中带正电的活性成分 的重量比为3:150:1。 29.权利要求18所述的生物医学组合物， 其中所述经修饰的组氨 酸为Boc-组氨 酸， 而 所述C4-C20烷类为C11H23， 且所述在水中带正电的活性成分为阿霉素或(1,2-二氨基环

13、己烷) 二氯化铂。 30.权利要求29所述的生物医学组合物， 其中所述透明质酸的至少一个伯羟基位于所 述透明质酸中的至少一个双糖单位的N-乙酰葡糖胺部分的第5个碳上。 31.权利要求29所述的生物医学组合物， 其中所述Boc-组氨 酸的接枝率为180， 所 述C11H23的接枝率为130， 而所述透明质酸衍生物与所述在水中带正电的活性成分的重 量比为2.5:14:1。 32.权利要求18所述的生物医学组合物， 其为药物释放系统。 33.权利要求32所述的生物医学组合物， 其中所述药物释放系统为微胞形式， 且所述微 胞的粒径为100-1000nm。 34.权利要求1所述的生物医学组合物， 其中以

14、口服或非口服的方式来给药所述生物医 学组合物。 35.权利要求34所述的生物医学组合物， 其中所述非口服的方式选自皮下、 皮内、 静脉 内、 肌肉内、 关节内、 动脉、 滑囊(腔)内、 胸骨内、 蜘蛛膜下腔、 疾病部位内注射、 灌注技术、 经 由吸入喷雾或藉由植入贮存器。 36.权利要求34所述的生物医学组合物， 其中所述口服的方式选自药锭、 胶囊或分散 液。 37.权利要求36所述的生物医学组合物， 其中所述分散液选自乳剂、 水性悬浮液或溶 液。 权 利 要 求 书 3/3 页 4 CN 104548109 B 4 生物医学组合物 技术领域 0001 本发明涉及一种生物医学组合物， 且特别涉

15、及一种生物医学组合物 (biomedical composition)， 其包含透明质酸衍生物， 具有接枝于至少一个伯羟基(primary hydroxyl group)的经修饰组氨 酸。 背景技术 0002 目前已上市的纳米载体抗癌药物皆有药物释放率太慢的问题， 使得其虽然可以降 低抗癌药物的副作用， 但并无法明显提高药物的治疗效果。 0003 而由于肿瘤组织与发炎组织由于其新生血管较不完整， 因此造成经由细胞代谢的 产物无法顺利排至全身血液循环， 所以此类组织的酸碱值较一般正常组织来的低， 约6.8- 7.2左右。 此外， 胞内的核内体(endosome)与溶酶体 (lysosome)环境

16、的酸碱值约为pH4.0- 6.5左右， 若能调控纳米载体在这些环性下能够快速释放， 将可解决现有药物载体药物释放 率太低的问题； 同时针对某些生物技术类药物如胜肽、 蛋白质、 与基因片段等， 将这类生物 技术药物于核内体中释放至细胞质中， 而不被传送至溶酶体中分解， 也将能提升此类药物 的活性。 0004 透明质酸是一种由双糖单位D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺所组成高分子的聚合 物。 于透明质酸中， D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺之间是藉由 -1,3-配糖键来键结， 而双 糖单位之间则藉由 -1,4-配糖键来键结。 一般而言， 透明质酸的分子量从5千到2千万道尔 顿。 商品化的透明质酸一般为其

17、钠盐， 即透明质酸钠(Sodium hyaluronate)。 0005 而天然透明质酸为水溶性高分子， 具有多种适宜作为药物载体的优良特性， 例如， 生物兼容性， 非免疫原性， 在体内可由酶作用而天然降解， 并携带大量的-OH、 -COOH和-CH， OH等多种功能基团， 可进行共价修饰。 因此， 由上述可知， 透明质酸可作为优良的药物载体。 0006 目前亟需， 生物兼容性高， 且可将其设计在适合的环境下才快速释放药物的新颖 药物传送系统。 发明内容 0007 本发明提供一种生物医学组合物， 包括： 透明质酸； 经修饰的组氨 酸； 以及聚合物 或C4-C20烷类， 其中该经修饰的组氨 酸，

18、 与该聚合物或C4-C20烷类， 接枝于该透明质酸的至 少一个伯羟基(primary hydroxyl group)上以与该透明质酸形成透明质酸衍生物， 且其中 该经修饰的组氨 酸的接枝率为约 1-100%， 而该聚合物或C4-C20烷类的接枝率为约0-40%。 附图说明 0008 图1A示出了HA16k-g-40%BocHis材料在pH7.4的临界微胞浓度结果。 0009 图1B示出了HA16k-g-40%BocHis材料在pH5.0的临界微胞浓度结果。 0010 图2A示出了HA16k-g-(45%BocHis-co-12%C11)材料在pH7.4的临界微胞浓度结果。 0011 图2B示出

19、了HA16k-g-(45%BocHis-co-12%C11)材料在pH5.0的临界微胞浓度结果。 说 明 书 1/21 页 5 CN 104548109 B 5 0012 图3示出了以激光散射粒径分析仪测定HA16k-g-40%BocHis材料于pH 8、 pH7.4、 pH6.5、 pH6和pH5下所形成的微胞粒径的结果。 0013 图4示出了透明质酸衍生物的理论解离方程式。 0014 图5示出了透明质酸衍生物/阿霉素纳米复合载体(配方DHC1902)的穿透式电子显 微镜照片。 0015 图6示出了将配方DHC2101与DHC2501所形成的透明质酸衍生物/阿霉素纳米复合 载体在pH7.4与

20、pH5.0进行累计药物释放分析的结果。 0016 图7示出了将配方DHC2101与DHC2501所形成的透明质酸衍生物/阿霉素纳米复合 载体以及阿霉素与微脂体包覆的阿霉素以U87MC细胞进行细胞毒性分析的结果。 0017 图8示出了LC-MS/MS分析配方DHC2101与DHC2501所分别形成的透明质酸衍生物/ 阿霉素纳米复合载体与阿霉素于大鼠中的血液浓度的结果。 0018 图9示出了测定以配方DHC2101所形成的透明质酸衍生物/阿霉素纳米复合载体 (5mg阿霉素/kg)、 配方DHC2501所分别形成的透明质酸衍生物/ 阿霉素纳米复合载体(5mg 阿霉素/kg)或PBS处理经U87-MG

21、人类多型性神经胶母细胞瘤细胞株植入的裸小鼠的肿瘤大 小的结果。 0019 图10示出了透明质酸/DACHPt(PtHC101)与透明质酸衍生物/DACHPt 纳米复合载 体(PtHC305)的穿透式电子显微镜照片。 0020 图11示出了将配方PtHC101所形成的透明质酸/DACHPt纳米复合载体、 配方 PtHC201、 PtHC301与PtHC401所分别形成的透明质酸衍生物 /DACHPt纳米复合载体在pH7.4 进行累计药物释放分析的结果。 0021 图12示出了以感应偶合电浆-原子放射光谱(Inductively coupled plasma with atomic emissio

22、n spectroscopy,ICP-AES)分析奥沙利铂(oxaliplatin)、 配方 PtHC101所 形成的透明质酸/DACHPt纳米复合载体、 配方PtHC305与配方 PtHC603所分别形成的透明质 酸衍生物/DACHPt纳米复合载体于大鼠中的血液浓度的结果。 以及 0022 图13示出了测定以与配方PtHC604所形成的透明质酸衍生物/DACHPt 纳米复合载 体(2mg Pt/kg)、 奥沙利铂(2mg Pt/kg)或10%蔗糖处理经HT-29 人类大肠癌细胞株植入的 裸小鼠的肿瘤大小的结果。 具体实施方式 0023 在本发明一实施例中， 本发明提供一包含透明质酸衍生物的生

23、物医学组合物。 0024 本发明生物医学组合物可包括， 但不限于， 透明质酸、 经修饰的组氨 酸， 以及聚合 物或C4-C20烷类， 其中上述经修饰的组氨 酸， 与上述聚合物或C4-C20烷类， 接枝于透明质酸 的至少一个伯羟基上， 且其中经修饰的组氨 酸与聚合物或C4-C20烷类与该透明质酸形成透 明质酸衍生物。 0025 上述经修饰的组氨 酸对透明质酸的接枝率可为约1-100%， 然需注意的是， 上述聚 合物与C4-C20烷类对透明质酸的接枝率则为约0-40%。 因此， 可以了解的是， 上述透明质酸衍 生物为可具有或不具有聚合物或C4-C20烷类接枝于其上。 换言的， 本发明的生物医学组合

24、物 为， 视需要而定包括聚合物或 C4-C20烷类。 0026 在一实施例中， 经修饰的组氨 酸的接枝率为约1-100%， 而该聚合物或 C4-C20烷类 说 明 书 2/21 页 6 CN 104548109 B 6 的接枝率为0， 即， 上述透明质酸衍生物为不具有聚合物或C4-C20烷类接枝于其上。 于此实施 例中， 上述透明质酸衍生物的示例分子式可如以下方式(I)所示， 但不限于此： 0027 0028 R1可为经修饰的组氨 酸。 而a可为约15-1200的正整数， 但不限于此。 0029 在另一实施例中， 上述透明质酸衍生物为具有聚合物或C4-C20烷类接枝于其上， 而 于此实施例中经

25、修饰的组氨 酸的接枝率可为约1-100%， 而该聚合物或C4-C20烷类的接枝率 可为1-40%。 于此实施例中， 上述透明质酸衍生物的示例分子式可如以下方式(II)所示， 但 不限于此： 0030 0031 R1可为经修饰的组氨 酸， 又R2可为聚合物或C4-C20烷类。 此外， p与q 为正整数， 且p 与q的比值可介于0.1-100之间， 但不限于此。 在一实施例中， p与q的比值可介于0.1-20之 间。 0032 在一实施例中， 于其上接枝上述经修饰的组氨 酸与上述聚合物或C4-C20烷类的上 述透明质酸的至少一个伯羟基， 可包括， 羟基， 其位于上述透明质酸中的至少一个双糖单位 的

26、N-乙酰葡糖胺部分的第5个碳上， 但不限于此。 0033 在一实施例中， 于本发明生物医学组合物中， 上述透明质酸的分子量为约7,000- 500,000。 在另一实施例中， 于本发明生物医学组合物中， 上述透明质酸的分子量为约7, 000-350,000。 0034 于本发明生物医学组合物中， 适合的经修饰的组氨 酸的例子可包括， 例如Boc-组 氨 酸(Boc-histidine)、 Cbz-组氨 酸(Cbz-histidine)、 Fmoc-组氨 酸 (Fmoc-histidine) 与Ac-组氨 酸(Ac-histidine)等， 但不限于此。 0035 另外， 于本发明生物医学组合物

27、中， 聚合物可包括聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)、 聚己内酯(polycaprolactone,PCL)、 聚乳酸(poly lactic acid,PLA)、 聚乙 醇酸(polyglycolic acido,PGA)、 聚乳酸-聚乙醇酸(poly(lactic-co-glycolic acid), PLGA)或聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone,PVP)等， 但不限于此。 0036 再者， 于本发明生物医学组合物中， C4-C20烷类的例子可包括， 但不限于、 C5H11、 说 明 书 3/21 页 7 CN 104548109 B 7 C

28、7H15或C9H19、 C11H23等。 0037 在一实施例中， 于本发明生物医学组合物中， 经修饰的组氨 酸可为Boc- 组氨 酸。 又， 于一特定实施例中， Boc-组氨 酸的接枝率可为约1-100%， 而聚合物或C4-C20烷类的 接枝率则为约0。 0038 又于一实施例中， 于本发明生物医学组合物中， 上述聚合物可为聚乙二醇， 其中聚 乙二醇的分子量可为约300-10000。 而于此实施例中， 聚乙二醇的接枝率可为约1-40%。 于一 特定实施例中， 于本发明生物医学组合物中， 经修饰的组氨 酸为Boc-组氨 酸， 上述聚合物 可为聚乙二醇， 且其中Boc-组胺酸的接枝率为约1-80

29、%， 而聚乙二醇的接枝率为约1-30%。 0039 于一实施例中， 于本发明生物医学组合物中， C4-C20烷类可为C11H23， 而于此实施例 中， C11H23的接枝率可为约1-40%。 于一特定实施例中， 于本发明生物医学组合物中， 经修饰 的组氨 酸为Boc-组氨 酸， C4-C20烷类为 C11H23， 且其中Boc-组氨 酸的接枝率为约1-80%， 而C11H23烷的接枝率为约 1-30%。 0040 此外， 于本发明生物医学组合物中， 由经修饰的组氨 酸与透明质酸所形成或由经 修饰的组氨 酸及聚合物或C4-C20烷类与透明质酸所形成的上述透明质酸衍生物的分子量 可为约7,000-

30、1,500,000。 在一实施例中， 上述透明质酸衍生物的分子量可为约7,000-1, 200,000。 在另一实施例中， 上述透明质酸衍生物的分子量可为约7,000-800,000。 在又另一 实施例中， 上述透明质酸衍生物的分子量可为约7,000-600,000。 0041 在本发明另一实施例中， 上述本发明生物医学组合物还可更包括在水中带正电的 活性成分。 于此实施例中， 上述在水中带正电的活性成分与上述透明质酸衍生物的羧基正 负电相吸， 又， 利用修饰于透明质酸上的组氨 酸衍生物产生的疏水作用力可使活性成分聚 集， 进而使上述在水中带正电的活性成分包覆于上述透明质酸衍生物中。 0042

31、 在一实施例中， 于本发明生物医学组合物中， 上述透明质酸衍生物与上述在水中 带正电的活性成分的重量比为约1.25:1-50:1。 在一实施例中， 上述透明质酸衍生物与上述 在水中带正电的活性成分的重量比为约1.25:1-25:1。 在另一实施例中， 上述透明质酸衍生 物与上述在水中带正电的活性成分的重量比为约2:1-25:1。 在又另一实施例中， 上述透明 质酸衍生物与上述在水中带正电的活性成分的重量比为约2:1-10:1。 0043 上述在水中带正电的活性成分可包括一药物(如抗生素、 铂金类药物等)、 核苷酸 物质、 胜肽或蛋白质等， 但不限于此。 0044 在一实施例中， 在水中带正电的

32、活性成分的例子可包括， 但不限于阿霉素 (doxorubicin)、 依立替康(irinotecan)、 庆大霉素(gentamicin)、 铂金化合物等。 0045 铂金化合物的例子， 可包括， 但不限于， (1,2-二氨基环己烷)二氯化铂 (Dichloro (1 ,2-diaminocyclohexane)platinum ,DACHPt)、 顺铂(cisplatin)或奥沙利铂 (oxaliplatin)等。 0046 于一实施例中， 于本发明生物医学组合物中， 上述经修饰的组氨 酸可为Boc-组氨 酸， 而上述聚合物或C4-C20烷类的接枝率为约0， 即， 上述透明质酸衍生物为仅具有

33、Boc-组氨 酸接枝于其上， 且在水中带正电的活性成分可为阿霉素、 依立替康、 庆大霉素或铂金化合物 (如， (1,2-二氨基环己烷)二氯化铂)。 于此实施例中， 上述经修饰的组氨 酸所接枝于其上 的上述透明质酸的至少一个伯羟基， 可包括， 羟基， 其位于上述透明质酸的至少一双糖单位 的 N-乙酰葡糖胺的第5个碳上的羟基， 但不限于此。 又于此实施例中， Boc- 组氨 酸的接枝 说 明 书 4/21 页 8 CN 104548109 B 8 率可为约1-100%， 而透明质酸衍生物与在水中带正电的活性成分的重量比可为约1.25:1- 25:1。 0047 于另一实施例中， 于本发明生物医学组

34、合物中， 上述经修饰的组氨 酸为Boc-组氨 酸， 而上述聚合物为聚乙二醇， 且在水中带正电的活性成分为阿霉素、 依立替康、 庆大霉素 或铂金化合物(如， (1,2-二氨基环己烷)二氯化铂)。 于此实施例中， 上述经修饰的组氨 酸 所接枝于其上的上述透明质酸的至少一个伯羟基， 可包括， 羟基， 其位于上述透明质酸中的 至少一个双糖单位的 N-乙酰葡糖胺部分的第5个碳上， 但不限于此。 又于此实施例中， Boc- 组胺酸的接枝率可为约1-80%， 聚乙二醇的接枝率为1-30%， 而透明质酸衍生物与在水中带 正电的活性成分的重量比可为约3:1-50:1。 0048 在又另一实施例中， 于本发明生物

35、医学组合物中， 上述经修饰的组氨 酸为Boc-组 氨 酸， 而上述C4-C20烷类为C11H23， 且在水中带正电的活性成分为阿霉素或(1,2-二氨基环 己烷)二氯化铂。 于此实施例中， 上述经修饰的组胺酸所接枝于其上的上述透明质酸的至少 一个伯羟基， 可包括， 羟基， 其位于上述透明质酸的至少一双糖单位的N-乙酰葡糖胺的第5 个碳上的羟基， 但不限于此。 又于此实施例中， Boc-组氨 酸的接枝率可为约1-80%， C11H23的 接枝率为1-30%， 而透明质酸衍生物与在水中带正电的活性成分的重量比可为约2.5:1-4: 1。 0049 此外， 若于本发明生物医学组合物中所包含的在水中带正

36、电的活性成分为药物， 则本发明生物医学组合物可为医药组合物或可为药物释放系统(drug delivery system)。 0050 上述药物释放系统可为微胞形式， 而上述微胞的粒径可为约100-1000 nm。 在一实 施例中上述微胞的粒径可为约100-800nm。 在另一实施例中， 上述微胞的粒径可为约100- 500nm。 在又另一实施例中， 上述微胞的粒径可为约100-300nm。 0051 上述医药组合物给药可以口服、 非口服、 经由吸入喷雾(inhalation spray) 或藉 由植入贮存器(implanted reservoir)的方式。 非口服可包括皮下 (subcutan

37、eous)、 皮内 (intracutaneous)、 静脉内(intravenous)、 肌肉内 (intramuscular)、 关节内 (intraarticular)、 动脉(intraarterial)、 滑囊(腔)内 (intrasynovial)、 胸骨内 (intrasternal)、 蜘蛛膜下腔(intrathecal)、 疾病部位内 (intralesional)注射以及灌注 技术。 对于不同的给药方式， 可利用一般方法将药学组合物配制成剂型(dosage form)。 0052 口服成分的形式可包括， 但不限定于， 药锭、 胶囊、 乳剂(emulsions)、 水性悬浮液

38、 (aqueous suspensions)、 分散液(dispersions)与溶液。 0053 实施例 0054 1.透明质酸衍生物的制备 0055 A.接枝Boc组氨 酸的透明质酸衍生物(HA-g-BocHis)的制备 0056 (a)接枝Boc组氨 酸的透明质酸衍生物的合成机制 0057 接枝Boc组氨 酸的透明质酸衍生物的合成机制如下方式(III)所示： 说 明 书 5/21 页 9 CN 104548109 B 9 0058 0059 0060 0061 0062 0063 (b)接枝Boc组氨 酸的透明质酸衍生物的制备方法 0064 接枝Boc组氨 酸的透明质酸衍生物的制备方法如

39、下所述： 0065 (1)将HA-TBA(1当量， 根据计算于透明质酸上的伯羟基来计算)于真空室温干燥16 小时， 快速秤取所需量并置于夹层式玻璃反应槽中， 且于夹层式玻璃反应槽中架设机械搅 拌装置， 之后将夹层式玻璃反应槽真空除气30 分钟。 0066 (2)回填氮气， 加入无水DMAc(10mL/g HA16k-TBA)以形成一混合物， 于玻璃反应槽 说 明 书 6/21 页 10 CN 104548109 B 10 夹层通入455循环水， 将混合物以转速250rpm搅拌4小时至完全溶解备用。 0067 (3)秤取Boc-His-OH及DMAP于双颈瓶抽真空5分钟后通入氮气， 加入0.5M

40、 Boc- His-OH均匀搅拌30分钟， 取EDCHCl固体快速倒入双颈瓶， 于355反应4小时以活化 Boc-His-OH。 0068 (4)将活化后的Boc-His-L(L=leaving group)溶液用蠕动泵以流速25 mL/分钟转 移至玻璃反应槽中。 加料完成后， 提高机械搅拌转速至300rpm 反应30分钟， 使整体溶液快 速均匀混合， 再将机械搅拌转速降至250rpm 持续反应24小时。 0069(5)反应自然回到室温后， 装于透析袋(Spectra/4Dialysis Membrane, MWCO:12-14,000,Flat Width:75mm)。 0070 (6)以4

41、55的DMAc(20X DMAc体积)连续透析40小时， 并于第16 小时更换透析 液。 0071 (7)转置于255的去离子水(100X DMAc体积)连续透析72小时， 于第2、 5、 8、 24、 26、 29、 32、 48、 50、 53、 56小时更新透析液。 0072 (8)取长60cm、 直径5cm的玻璃层析管柱， 并以玻璃棉塞住下方出口。 取钠离子交换 树脂(ROHM HAAS,食品级， 520g)加去离子水(200mL)搅拌均匀后倒入层析管柱中， 并以每次 200mL去离子水清洗管柱中的树脂， 清洗五次以上， 直至管柱流出液体为透明无色， 完成清 洗钠离子交换树脂。 007

42、3 (9)收集透析袋中水溶液， 以玻璃棉过滤除去微量果冻状固体， 收集滤液， 以流速 150200mL/小时通过钠离子交换树脂(以一支钠离子交换树脂管柱处理15g HA16k-TBA计 算所需管柱数量)， 待HA水溶液完全进入树脂后， 再以去离子水(200mL)冲提管柱3次， 洗出 残留于树脂上的HA材料， 得到HA-g-BocHis水溶液。 0074 (10)真空浓缩(1mmHg， 305)至浓度约为3wt%的水溶液， 确认溶液pH值后置 于-20使其结冰。 0075 (11)利用冷冻干燥法移除水份， 得到完全干燥的HA-g-BocHis材料。 0076 根据上述的制备方法， 调整HA/Bo

43、c-His-OH/EDCHCl/DMAP的当量比， 即可得到不 同BocHis接枝率的HA-g-BocHis材料。 以不同的HA/Boc-His-OH/EDCHCl/DMAP的当量比所 获得的不同BocHis接枝率的 HA-g-BocHis材料的接枝率与产率如表1所示。 0077 表1： 以不同的HA/Boc-His-OH/EDCHCl/DMAP的当量比所获得的 HA-g-BocHis材 料的接枝率与产率 说 明 书 7/21 页 11 CN 104548109 B 11 0078 0079 B.接枝Boc组氨 酸与聚乙二醇的透明质酸衍生物 (HA-g-(BocHis-co-SAmPEG) 的

44、制备 0080 (a)接枝Boc组氨 酸与聚乙二醇的透明质酸衍生物的合成机制 0081 接枝Boc组氨 酸与聚乙二醇的透明质酸衍生物的合成机制如下方式(IV) 所示： 0082 0083 0084 0085 说 明 书 8/21 页 12 CN 104548109 B 12 0086 0087 0088 (b)接枝Boc组氨 酸的透明质酸衍生物的制备方法 0089 接枝Boc组氨 酸的透明质酸衍生物的制备方法如下所述： 0090 (1)将HA-TBA(1当量， 根据计算于透明质酸上的伯羟基来计算)于真空室温干燥16 小时， 快速秤取所需量并置于夹层式玻璃反应槽中， 且于夹层式玻璃反应槽中架设机

45、械搅 拌装置， 之后将夹层式玻璃反应槽真空除气30 分钟。 0091 (2)回填氮气， 加入无水DMAc(10mL/g HA16k-TBA)以形成一混合物， 于玻璃反应槽 夹层通入455循环水， 将混合物以转速250rpm搅拌4小时至完全溶解备用。 0092 (3)秤取Boc-His-OH及DMAP于双颈瓶抽真空5分钟后通入氮气， 加入DMAc(0.5M for Boc-His-OH)均匀搅拌30分钟， 取EDCHCl固体快速倒入双颈瓶， 于355反应4小时 以活化Boc-His-OH。 0093 (4)将活化后的Boc-His-L(L=leaving group)溶液用蠕动泵以流速1mL/

46、分钟转 移至玻璃反应槽中， 加料完成后， 提高机械搅拌转速至300rpm反应 30分钟， 使整体溶液快 速均匀混合， 再将机械搅拌转速降至250rpm持续反应24小时。 0094 (5)秤取mPEG-SA-COOH于双颈瓶， 抽真空5分钟后通入氮气， 加入 DMAc(0.1M for mPEG1900-SA-COOH)于505搅拌10分钟使的均匀溶解， 降温至30， 加入DMAP搅拌10分 钟， 取EDCHCl固体快速倒入双颈瓶， 于355反应4小时以活化mPEG-SA-COOH。 0095 (6)将活化后的mPEG-SA-COL(L=leaving group)溶液用蠕动泵以流速 1mL/m

47、in转 移至玻璃反应槽中， 加料完成后， 提高机械搅拌转速至300rpm 反应30分钟， 使整体溶液快 速均匀混合， 再将机械搅拌转速降至250rpm 持续反应40小时。 0096(7)反应自然回到室温后， 装于透析袋(Spectra/4Dialysis Membrane, 说 明 书 9/21 页 13 CN 104548109 B 13 MWCO:12-14,000,Flat Width:75mm)。 0097 (8)以455的DMAc(20X DMAc体积)连续透析40小时， 并于第16 小时更换透析 液。 0098 (9)转置于255的去离子水(100X DMAc体积)连续透析72小时

48、， 于第2、 5、 8、 24、 26、 29、 32、 48、 50、 53、 56小时更新透析液。 0099 (10)取长60cm、 直径5cm的玻璃层析管柱， 并以玻璃棉塞住下方出口。 取钠离子交 换树脂(ROHM HAAS,食品级,520g)加去离子水(200mL) 搅拌均匀后倒入层析管柱中， 并以 每次200mL去离子水清洗管柱中的树脂， 清洗五次以上， 直至管柱流出液体为透明无色， 完 成清洗钠离子交换树脂。 0100 (11)收集透析袋中水溶液， 以玻璃棉过滤除去微量果冻状固体， 收集滤液， 以流速 150200mL/小时通过钠离子交换树脂(以一支钠离子交换树脂管柱处理15g HA16k-TBA计 算所需管柱数量)， 待HA水溶液完全进入树脂后， 再以去离子水(200mL)冲提管柱3次， 洗出 残留于树脂上的HA材料， 得到HA-g-(BocHis-co-SAmPEG)水溶液。 0101 (12)真空浓缩(1mmHg,305)至完全干燥， 取出固体产物， 置于圆型滤筒，