调节T细胞依赖性免疫应答的方法.pdf

1、(10)申请公布号 CN 101998864 A (43)申请公布日 2011.03.30 CN 101998864 A *CN101998864A* (21)申请号 200980111707.7 (22)申请日 2009.03.03 61/068,034 2008.03.03 US 61/200,944 2008.12.05 US A61K 45/00(2006.01) A61K 38/08(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61K 35/12(2006.01) A61K 35/14(2006.01) A61K 35/28(2006.01) A61K 35/32(

2、2006.01) A61K 31/56(2006.01) A61P 1/00(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 11/06(2006.01) A61P 17/00(2006.01) A61P 17/06(2006.01) A61P 17/14(2006.01) A61P 19/02(2006.01) A61P 19/04(2006.01) A61P 29/00(2006.01) A61P 37/02(2006.01) A61P 37/06(2006.01) A61P 37/08(2006.01) A61P 43/00(2006.01) (71)申请人 聚合生物技

3、术公司 地址 美国佛罗里达 申请人 法比奥 格拉西 乌尔苏拉 申克 (72)发明人 法比奥 格拉西 乌尔苏拉 申克 卡米洛 理克迪 (74)专利代理机构 中国国际贸易促进委员会专 利商标事务所 11038 代理人 罗菊华 (54) 发明名称 调节 T 细胞依赖性免疫应答的方法 (57) 摘要 本发明提供使用ATP介导的T细胞活化的抑 制剂 ( 比如氧化的 ATP) 来调节至少一种 T 细胞 依赖性免疫应答，以用于治疗和研究目的的方法 和组合物。 (30)优先权数据 (85)PCT申请进入国家阶段日 2010.09.29 (86)PCT申请的申请数据 PCT/US2009/001380 2009

4、.03.03 (87)PCT申请的公布数据 WO2009/114097 EN 2009.09.17 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 4 页 说明书 33 页 附图 25 页 CN 101998870 A1/4 页 2 1. 抑制 ATP 介导的 T 细胞活化的制剂用于制备抑制至少一种 T 细胞活性的药物的用 途。 2. 权利要求 1 的用途， 其中所述 T 细胞活性选自 ： 活化、 增殖、 分化、 存活、 细胞裂解活 性及细胞因子产生。 3.权利要求1的用途， 其中所述抑制ATP介导的T细胞活化的制剂是P2X受体拮抗剂。 4. 权

5、利要求 3 的用途， 其中所述制剂是 oATP。 5. 权利要求 1 的用途， 其中所述抑制 ATP 介导的 T 细胞活化的制剂是抑制 pannexin hemichannels 功能的制剂。 6. 权利要求 5 的用途， 其中所述制剂是含 SEQ ID NO ： 1 的氨基酸序列的肽。 7. 抑制 ATP 介导的 T 细胞活化的制剂用于制备诱导 T 细胞无反应性的药物的用途。 8. 权利要求 7 的用途， 其中所述制剂是 oATP。 9.抑制pannexin hemichannels功能的制剂用于制备诱导T细胞无反应性的药物的用 途。 10. 权利要求 9 的用途， 其中所述制剂是含 SEQ

6、 ID NO ： 1 的氨基酸序列的肽。 11. 权利要求 1 10 中任一项的用途， 其中所述 T 细胞是分泌 IL-17 的 T 细胞。 12. 抑制 ATP 介导的 T 细胞活化的制剂用于制备治疗细胞死亡或组织损伤的药物的用 途。 13. 抑制 ATP 介导的 T 细胞活化的制剂用于制备治疗免疫或炎性疾病的药物的用途。 14. 权利要求 13 的用途， 其中所述免疫或炎性疾病是 T 淋巴细胞依赖性炎性疾病。 15. 权利要求 14 的用途， 其中所述 T 淋巴细胞依赖性炎性疾病选自 ： I 型糖尿病、 炎性 肠病、 多发性硬化、 类风湿性关节炎及银屑病。 16. 权利要求 14 的用途，

7、 其中所述 T 淋巴细胞依赖性炎性疾病是移植排斥或移植物抗 宿主病。 17. 权利要求 14 的用途， 其中所述 T 淋巴细胞依赖性炎性疾病是皮肤病。 18. 权利要求 17 的用途， 其中所述皮肤病选自 ： 银屑病、 皮肤 T 细胞淋巴瘤、 皮肤移植 物抗宿主病、 特应性皮炎、 变应性接触性皮炎、 斑秃、 白癜风、 药物相关的疹、 接触性超敏反 应、 红斑狼疮、 苔藓痘疹样糠疹、 慢性苔藓性糠疹、 湿疹及扁平苔藓。 19. 权利要求 12 18 中任一项的用途， 其中所述药物配制成用于体内施用。 20. 权利要求 19 的用途， 其中所述制剂经纳米胶囊化。 21. 权利要求 19 的用途，

8、其中所述药物配制成用于结内施用。 22. 权利要求 19 的用途， 其中所述药物配制成用于局部施用。 23. 含 oATP 的组合物用于制备促进哺乳动物祖细胞分化成 Treg 细胞的药物的用途。 24. 权利要求 23 的用途， 其中所述含 oATP 的组合物还含至少一种下列物质 ： (a)T 细胞初次刺激物 ； (b) 细胞成分 ； 及 (c) 可溶性介质。 25. 权利要求 24 的用途， 其中所述 T 细胞初次刺激物含一种或多种选自下列的制剂 ： 结合 T 细胞受体的配体及蛋白激酶 C 激活物。 26. 权利要求 25 的用途， 其中所述 T 细胞初次刺激物是抗 CD3 抗体。 权 利

9、要 求 书 CN 101998864 A CN 101998870 A2/4 页 3 27. 权利要求 24 的用途， 其中所述细胞成分选自 ： 受照射的脾细胞、 移动的细胞产物、 白细胞去除术细胞产物、 髂嵴细胞产物和 / 或椎体。 28. 权利要求 27 的用途， 其中所述细胞成分是同基因受照射的脾细胞。 29.权利要求24的用途， 其中所述可溶性介质选自 ： 视黄酸、 雷帕霉素、 5-氮胞苷、 制滴 菌素 A、 1- 抗胰蛋白酶、 TGF-、 白介素 (IL)-2)、 CD80、 4-1BB、 CD52 激动剂、 CD28 抗体、 淋巴细胞功能相关抗原 -3(LFA-3)、 CD2、 C

10、D40、 CD80/B7-1、 CD86/B7-2、 OX-2、 CD70 及 CD82。 30. 权利要求 24 的用途， 其中所述组合物含 ： oATP、 T 细胞初次刺激物及细胞成分。 31. 权利要求 30 的用途， 其中所述组合物含 ： oATP、 抗 CD3 抗体及同基因受照射的脾细 胞。 32. 促进调节性 T(Treg) 细胞体外扩展的方法， 包括以下步骤 ： 使 Treg 细胞与含 oATP 的组合物接触。 33. 权利要求 32 的方法， 其中所述含 oATP 的组合物还含至少一种下列物质 ： (a)T 细胞初次刺激物 ； (b) 细胞成分 ； 及 (c) 可溶性介质。 3

11、4. 权利要求 33 的方法， 其中所述 T 细胞初次刺激物含一种或多种选自下列的制剂 ： 结合 T 细胞受体的配体及蛋白激酶 C 激活物。 35. 权利要求 34 的方法， 其中所述 T 细胞初次刺激物是抗 CD3 抗体。 36. 权利要求 33 的方法， 其中所述细胞成分选自 ： 受照射的脾细胞、 移动的细胞产物、 白细胞去除术细胞产物、 髂嵴细胞产物和 / 或椎体。 37. 权利要求 36 的方法， 其中所述细胞成分是同基因受照射的脾细胞。 38.权利要求33的方法， 其中所述可溶性介质选自 ： 视黄酸、 雷帕霉素、 5-氮胞苷、 制滴 菌素 A、 1- 抗胰蛋白酶、 TGF-、 白介素

12、 (IL)-2)、 CD80、 4-1BB、 CD52 激动剂、 CD28 抗体、 淋巴细胞功能相关抗原 -3(LFA-3)、 CD2、 CD40、 CD80/B7-1、 CD86/B7-2、 OX-2、 CD70 及 CD82。 39. 权利要求 33 的方法， 其中所述组合物含 ： oATP、 T 细胞初次刺激物及细胞成分。 40. 权利要求 39 的方法， 其中所述组合物含 ： oATP、 抗 CD3 抗体及同基因受照射的脾细 胞。 41. 含 oATP 的组合物用于制备促进调节性 T(Treg) 细胞体内扩展的药物的用途。 42.权利要求3241中任一项的扩展的Treg细胞用于制备治疗

13、细胞死亡或组织损伤 的药物的用途。 43.权利要求3241中任一项的扩展的Treg细胞用于制备治疗免疫或炎性疾病的药 物的用途。 44. 权利要求 43 的用途， 其中所述免疫或炎性疾病是 T 淋巴细胞依赖性炎性疾病。 45. 权利要求 44 的用途， 其中所述 T 淋巴细胞依赖性炎性疾病是与肥大细胞脱颗粒相 关的疾病。 46. 权利要求 45 的用途， 其中所述与肥大细胞脱颗粒相关的疾病选自 ： 哮喘、 过敏及过 敏性休克。 47. 权利要求 43 的用途， 其中所述免疫或炎性疾病是自身免疫疾病、 移植排斥或移植 物抗宿主病。 权 利 要 求 书 CN 101998864 A CN 1019

14、98870 A3/4 页 4 48. 权利要求 32 41 中任一项的扩展的 Treg 细胞用于制备治疗需要 Treg 细胞的受 试者的药物的用途。 49. 抑制 Treg 细胞体外转变为非 Treg 细胞的方法， 包括以下步骤 ： 使 Treg 细胞与含 oATP 的组合物接触。 50. 权利要求 49 的方法， 其中所述非 Treg 细胞是病原性 T 细胞。 51. 权利要求 50 的方法， 其中所述病原性 T 细胞是 Th17 细胞。 52. 将非 Treg 细胞体外转变为 Treg 细胞的方法， 包括以下步骤 ： 使非 Treg 细胞与含 oATP 的组合物接触。 53. 权利要求 5

15、2 的方法， 其中所述非 Treg 细胞是病原性 T 细胞。 54. 权利要求 53 的方法， 其中所述病原性 T 细胞是 Th17 细胞。 55. 体外增强 Treg 细胞活性的方法， 包括以下步骤 ： 使 Treg 细胞与含 oATP 的组合物 接触。 56. 权利要求 55 的方法， 其中所述活性是免疫抑制活性。 57. 含 oATP 的组合物用于制备抑制 Treg 细胞体内转变为非 Treg 细胞的药物的用途。 58. 含 oATP 的组合物用于制备将非 Treg 细胞体内转变为 Treg 细胞的药物的用途。 59. 含 oATP 的组合物用于制备体内增强 Treg 细胞活性的药物的用

16、途。 60. 权利要求 57 59 中任一项的用途， 其中所述 oATP 经纳米胶囊化。 61. 权利要求 57 59 中任一项的用途， 其中所述受试者具有细胞死亡或组织损伤。 62. 权利要求 57 59 中任一项的用途， 其中所述受试者患有免疫或炎性疾病。 63. 权利要求 62 的用途， 其中所述免疫或炎性疾病是自身免疫疾病、 移植排斥或移植 物抗宿主病。 64. 权利要求 62 的用途， 其中所述免疫或炎性疾病是炎性肠病。 65. 权利要求 62 的用途， 其中所述免疫或炎性疾病是 T 淋巴细胞依赖性炎性疾病。 66. 权利要求 65 的用途， 其中所述 T 淋巴细胞依赖性炎性疾病是与

17、肥大细胞脱颗粒相 关的疾病。 67. 权利要求 66 的用途， 其中所述与肥大细胞脱颗粒相关的疾病选自 ： 哮喘、 过敏及过 敏性休克。 68.权利要求1、 7、 9、 12、 13、 23、 41及5759中任一项的用途， 其中所述药物配制成用 于经口、 静脉内、 肌内、 腹膜内、 鞘内、 经消化道、 脊柱内、 关节内 (intra-articularly)、 关节 内 (intra-joint)、 皮下、 颊部、 经阴道、 经直肠、 皮肤、 透皮、 眼部、 经耳、 粘膜、 经鼻、 经气管、 经支气管、 舌下、 结内、 通过任何肠胃外途径或通过吸入施用。 69. 权利要求 48 的用途， 其

18、中所述药物配制成用于经口、 静脉内、 肌内、 腹膜内、 鞘内、 经消化道、 脊柱内、 关节内 (intra-articularly)、 关节内 (intra-joint)、 皮下、 颊部、 经阴 道、 经直肠、 皮肤、 透皮、 眼部、 经耳、 粘膜、 经鼻、 经气管、 经支气管、 舌下、 结内、 通过任何肠 胃外途径或通过吸入施用。 70. 抑制至少一种 T 细胞活性的方法， 包括以下步骤 ： 使 T 细胞与抑制 ATP 介导的 T 细 胞活化的制剂的接触。 71. 诱 导 T 细 胞 无 反 应 性 的 方 法， 包 括 以 下 步 骤 ： 使 T 细 胞 与 抑 制 pannexin he

19、michannels 功能的制剂接触。 权 利 要 求 书 CN 101998864 A CN 101998870 A4/4 页 5 72. 治疗细胞死亡或组织损伤的方法， 包括以下步骤 ： 使 T 细胞与抑制 ATP 介导的 T 细 胞活化的制剂的接触。 73. 治疗免疫或炎性疾病的方法， 包括以下步骤 ： 使 T 细胞与抑制 ATP 介导的 T 细胞活 化的制剂的接触。 74. 促进哺乳动物祖细胞分化成 Treg 细胞的方法， 包括以下步骤 ： 使能分化成 Treg 细 胞的细胞与含 oATP 的组合物接触。 75. 促进调节性 T(Treg) 细胞扩展的方法， 包括以下步骤 ： 使 Tr

20、eg 细胞与含 oATP 的组 合物接触。 76. 抑制 Treg 细胞转变为非 Treg 细胞的方法， 包括以下步骤 ： 使 Treg 细胞与含 oATP 的组合物接触。 77. 将非 Treg 细胞转变为 Treg 细胞的方法， 包括以下步骤 ： 使非 Treg 细胞与含 oATP 的组合物接触。 78. 增强 Treg 细胞活性的方法， 包括以下步骤 ： 使 Treg 细胞与含 oATP 的组合物接触。 权 利 要 求 书 CN 101998864 A CN 101998870 A1/33 页 6 调节 T 细胞依赖性免疫应答的方法 背景技术 0001 T 淋巴细胞群包括数百万个细胞，

21、其中每个细胞都在表面表达独特的受体 (TCR ： T 细胞受体 )。该异质性允许不同的 T 细胞特异性识别源于不同病原体的抗原。通过自 身耐受的诱导避免自身抗原的识别。然而， 在病理状态下自身抗原的识别引起自身免疫和 自毁的炎性疾病。T 淋巴细胞依赖性炎性疾病包括， 例如哮喘、 过敏症、 类风湿关节炎、 银 屑病关节炎、 关节炎、 内毒素血症、 I 型糖尿病、 炎性肠道疾病 (IBD)、 结肠炎、 多发性硬化 症、 移植排斥反应、 移植物抗宿主病、 肌萎缩性侧索硬化症、 脱髓鞘病、 硬皮病、 干燥综合征、 Erdheim-Chester 综合征、 克罗恩病综合征、 高安动脉炎、 结节病、 自身

22、免疫性溶血性贫血、 Werlhof 特发性血小板减少综合征和皮肤病， 比如银屑病、 皮肤 T 细胞淋巴瘤、 皮肤移植物 抗宿主病、 特应性皮炎、 变应性接触性皮炎、 斑秃、 白癜风、 药物相关的疹、 接触性超敏反应、 红斑狼疮、 苔藓痘疹样糠疹、 慢性苔藓性糠疹、 湿疹及扁平苔藓。 0002 T 细胞活化依赖于钙信号转导。细胞溶质钙升高代表适应性免疫应答调控中 的必要线索。B 细胞或 T 细胞受体的引发导致从 ER 中释放钙 (Ca2+)， 并进而激活质膜上 Ca2+释放相关通道 (CRAC) 的开放， 引起库容性钙进入 (CCE)(Putney and Bird， Cell 75 ： 199

23、-201(1993)。磷酸酶钙神经素的活化是对 T 细胞成功活化关键的 Ca2+依赖性事件的一 个例证， 其能使转录因子NFAT去磷酸并因而决定其核易位(Goldsmith and Weiss， Science 240 ： 1029-1031(1988)。 0003 细胞溶质Ca2+的增加并行于活跃的线粒体Ca2+摄入。 线粒体作为高容量的Ca2+库， 帮助避免细胞Ca2+过载， 并另外有助于在空间限制区域迅速清除Ca2+。 线粒体的后一个功能 精密地调节Ca2+敏感蛋白的活性。 例如， 在ER上IP3受体附近的线粒体Ca2+缓冲被证明能增 加足于 CRAC 活化的 IP3 的动态范围 (Gi

24、labert et al.， EMBO J 20 ： 2672-2679(2001)， 而 CRAC通道附近的Ca2+缓冲降低它们的Ca2+依赖性失活速率(Hoth et al.， Proc Natl Acad Sci U S A 97 ： 10607-10612 ； Hoth et al.， J CeU Biol 137 ： 633-648(1997)。最终， 线粒 体 Ca2+摄入通过激活丙酮酸、 - 酮戊二酸和异柠檬酸脱氢酶， 刺激三磷酸腺苷 (ATP) 的有 氧合成(Jouaville et al.， Proc Natl Acad Sci USA 96 ： 13807-13812(19

25、99) ； Hajnoczky et al.， Cell 82 ： 415-424(1995)。Ca2+依赖的 ATP 的生产不仅满足受激细胞的较高的能 量需求， 也可能调节其它 ATP 调节的进程。 0004 事实上， ATP 也是一个广泛存在的细胞外信使 (Burnstock， Trends Pharmacol Sci 27 ： 166-176(2006) ； Burnstock， Novartis Found Symp 276 ： 26-48 ； discussion 48-57， 275-281(2006)， 或者通过分泌囊泡的胞吐作用或者通过间隙连接半通道释放 到细胞外空间 (Coc

26、o et al.， JBC 278 ： 1354-1362(2003) ； Cotrina et al.， PNAS 95 ： 15735-15740(1998) ； Bao et al.， FEBS Letters 572 ： 65-68(2004)。ATP 激 活 细 胞 外核苷酸的质膜受体 ( 称为 P2 受体 )， 其中该受体几乎由所有细胞以不同的组合表达 (Burnstock， Novartis Found Symp 276 ： 26-48 ； discussion 48-57， 275-281(2006)。P2 受体被分为两亚类， 称为 P2X 和 P2Y 受体。P2X 1 7 受

27、体都结合 ATP 并无选择性开放， 常 常使离子通道迅速脱敏。P2Y1、 2、 4、 6、 11 14 受体优选结合 ADP、 UDP、 UTP 或 UDP- 葡萄糖， 说 明 书 CN 101998864 A CN 101998870 A2/33 页 7 它们属于 G- 蛋白偶联的受体家族， 并且它们的活化和 CCE 相关。 0005 越来越多的证据表明， 淋巴细胞上 ( 具体在 T 细胞上 )P2 受体的活化， 对 TCR 刺 激的结果最为关键 (Scrivens and Dickenson， Br J Pharmacol 146 ： 435-444(2005) ； Baricordi e

28、t al.， Blood 87 ： 682-690(1996) ； Loomis et al， .J Biol Chem 278 ： 4590-4596(2003)。细胞外环境中 ATP 的半衰期相当短， 由于其被外切腺苷三磷酸双磷酸 酶 (CD39) 和外切 -5 - 核苷酸酶 (CD73) 的联合作用轻易地降解为腺苷酸 (Yegutkin et al.， Biochem J 367 ： 121-128(2002)。 有趣的是， 已经表明Treg细胞能通过这些表面酶活 性作用调节T细胞的抑制(Deaglio et al.， J Exp Med 204 ： 1257-1265(2007) ；

29、Borsellino et al.， Blood 110(4) ： 1225-1232(2007)。尽管存在这些关于免疫应答过程中 ATP 调控 作用的证据， 但其来源还未被明确鉴定。已有人提出 ATP 释放于死亡中的细胞或受损的血 小板以及机械性刺激 (Cotrina et al.， PNAS 95 ： 15735-15740(1998) ； Bao et al.， FEBS Letters 572 ： 65-68(2004)。 0006 最近我们已经报道了一个实验模型， 其中用源于钙网蛋白 (CRT) 缺陷胚胎的胎儿 肝脏的造血祖细胞重建免疫缺陷小鼠。CRT 是一种分子伴侣蛋白， 并是 E

30、R 中最重要的 Ca2+ 缓冲物 (Ellgaard and Helenius， Nat Rev Mol Cell Biol 4 ： 181-191(2003) ； 在基因 敲除小鼠中它的缺失在妊娠的 12 13 天是致死的 (Mesaeli et al.， J Cell Biol 144 ： 857-868(1999)。ER 中 Ca2+结合 CRT 的量可能显著影响细胞命运， 例如， CRT 的过表达导致 对凋亡刺激的易感性增强 (Pinton et al.， EMBO J 20 ： 2690-2701(2001)， 而 CRT 缺陷的 细胞对凋亡更加耐受 (Nakamura et al.

31、， J Cell Biol 150 ： 731-740(2000)。Crt-/-T 细胞 对抗原刺激有高反应， 并且其紊乱的 T 细胞反应性决定 Crt-/-胎儿肝脏嵌合体 (FLC) 严重 的免疫病理学状况， 这类似于移植物抗宿主病表型的某些方面。该严重的免疫病理学状况 受对 TCR 的振荡的 Ca2+反应的促进， TCR 引发 MAPK 通路的延长活化并拖延 NFAT1 的核定位 (Porcellini et al.， J Exp Med 203 ： 461-471(2006)。 0007 本文我们表明 Crt-/-T 细胞特征描述为在 CCE 过程中有增加的线粒体 Ca2+缓冲， 导 致

32、 ATP 高速率合成。该活化过程中 T 细胞释放的 ATP 引起具有 MAPK 活化作用的 P2X 受体 的自分泌激活。这代表为必要的用于产生 T 细胞活化和扩展的共刺激因子。我们表明诱导 ATP合成和释放的活性在T细胞依赖性炎症的结果中起关键作用， 并且表示为可能的T细胞 免疫抑制的药理学靶点。 0008 P2X 受体的活化受到 ATP 拮抗剂的抑制， 比如氧化的 ATP(oATP)。因此， oATP 能通 过在涉及炎症和组织损伤的免疫系统的各种细胞 ( 如 T 细胞 ) 中拮抗 ATP 的促炎症作用来 发挥其抗炎症效用。 0009 本文中我们也表明 oATP 结合抗 CD3 抗体和同基因的

33、受照射的脾细胞偏向诱导具 有 Foxp3 高水平表达的调节性 T 细胞 (Treg 细胞 )。Treg 细胞活跃抑制效应子 T 细胞增殖 和细胞因子的产生， 并且提供使效应子 T 细胞脱离发育为无反应状态的 T 细胞耐受机制 (T 细胞无反应性 )。Treg 细胞的抑制作用可以是抗原特异的也可以是抗原非特异的。在具有 低量 Treg 的 CD4+幼稚细胞诱导的炎性肠道疾病中 (IBD)， 用 oATP 治疗能显著增加 Treg 中 Foxp3 的表达， 并完全阻止肠中的免疫病理。已经表明 Treg 能抑制肥大细胞脱颗粒 (Gri et al.， Immunity 29 ： 771-781(20

34、08)， 并因而能在涉及肥大细胞脱颗粒相关情况 ( 例如， 哮喘、 过敏和过敏性休克 ) 的免疫抑制反应中起作用。在建立和维持 T 细胞耐受中 Treg 说 明 书 CN 101998864 A CN 101998870 A3/33 页 8 细胞的重要性已经产生重要的兴趣， 该兴趣在于旨在治疗的体外扩展 Treg 细胞的方法， 例 如， 继承性 Treg 细胞治疗。扩展的 Treg 细胞灌输可被用于， 例如， 调节免疫应答、 诱导细胞 耐受、 组织和器官移植和治疗自身免疫疾病。然而， 这些临床应用已经被延迟， 由于成功扩 展没有效应子细胞 ( 例如， Th17， 其出现于 Foxp3+选择 )

35、 显著污染的 Treg 亚群的挑战。这 些污染细胞可能比 Treg 细胞生长更快。此外， Treg 细胞可能在体外反复刺激后丧失抑制 活性。因此， 关键在于起初 Treg 细胞分化和 / 或扩展具有合适细胞产物， 并且在体外选择 性地支持 Treg 细胞而不是污染细胞的生成和扩展。本文中我们表明用 oATP 治疗抑制体外 Treg 细胞向 Th17 细胞系的转化， 如通过 RORT 表达评分。 0010 如上所述， 我们已经发现 ATP 由活化的 T 细胞激活释放， 并且分泌的 ATP 和 T 细胞 表面的受体相互作用， 用作延长 T 细胞活化的自分泌及旁分泌刺激。用 oATP 阻断该相互作

36、用导致接触抗原时T细胞不能激活， 并且生成T细胞 “无应答性” 的状态， 这最终引起减少的 组织损伤。此外， 如上所述， 我们也发现包含 oATP 的组合物也能用于诱导免疫抑制性 Treg 细胞的分化和显著扩展， 维持 Treg 细胞表型， 并增强 Treg 细胞免疫抑制活性， 也能引起减 少的组织损伤。因此用 oATP 治疗可以在器官移植前、 期间或后有利于避免 T 细胞介导的排 斥， 并且有利于患有在骨髓移植前、 期间或后 T 细胞介导的移植物抗宿主病的患者。 0011 因此， 所述本发明旨在治疗免疫或炎性疾病， 通过用至少一种调节 T 细胞依赖性 免疫应答的制剂接触 T 细胞， 比如抑制

37、 ATP- 介导的 T 细胞活化和 / 或诱导 Treg 细胞分化 和扩展的制剂， 例如， oATP、 PX10 肽或生胃酮。这些效用可以有多种治疗性应用， 例如， 免疫 耐受、 自身免疫、 免疫抑制和免疫治疗相关的治疗。 0012 发明概述 0013 本发明可体现为一种用于调节一种或多种 T 细胞依赖性的免疫应答的方法。 0014 在一实施方式中， 本发明提供一种用于抑制至少一种 T 细胞活性的方法， 包含步 骤为用抑制 ATP- 介导的 T 细胞活化的制剂接触 T 细胞。在一些实施方式中， 所述 T 细胞活 性选自 ： 活化、 增殖、 分化、 存活、 细胞裂解活性及细胞因子产生。 在一优选

38、的实施方式中， 用 于抑制至少一种 T 细胞活性的方法在体内进行。 0015 在一实施方式中， 所述抑制 ATP- 介导的 T 细胞活化的制剂是 P2X 受体拮抗剂， 例 如， P2X7 受体拮抗剂。在一优选的实施方式中， 所述制剂是 oATP。在另一实施方式中， 所述 制剂是抑制 pannexin hemichannels 渗透性的制剂。在一优选的实施方式中， 所述制剂是 PX10 肽 (SEQ ID NO ： 1) 或生胃酮。 0016 本发明也提供一种诱导 T 细胞无反应性的方法， 包含步骤为用 ATP- 介导的 T 细胞 活化的抑制剂接触T细胞。 在一优选的实施方式中， 所述用于诱导T

39、细胞无反应性的方法在 体内进行。在一实施方式中， 所述抑制 ATP- 介导的 T 细胞活化的制剂是 P2X 受体拮抗剂， 例如， T 细胞 P2X7 受体拮抗剂。在一优选的实施方式中， 所述制剂是 oATP。在另一实施方 式中， 所述制剂是抑制 pannexin hemichannels 渗透性的制剂。在一优选的实施方式中， 所 述制剂是 PX10 肽 (SEQ ID NO ： 1) 或生胃酮。 0017 在一实施方式中， 所述接触的 T 细胞是分泌 IL-17 的 T 细胞 ( 即 TH17 细胞 )。 0018 在另一实施方式中， 本发明提供一种用于诱导 Treg 细胞分化和 / 或扩展的

40、方法， 包含步骤为用诱导 Treg 细胞分化和 / 或扩展的制剂接触 Treg 细胞。在一优选的实施方式 中， 该方法在体内进行。在一例示实施方式中， 所述制剂是含有 oATP 的组合物。所述组合 说 明 书 CN 101998864 A CN 101998870 A4/33 页 9 物也优选包含 ： (1)T 细胞初次刺激物 ； 和 (2) 细胞成分或可溶性介质。 0019 在另一实施方式中， 本发明提供一种用于抑制 Treg 细胞向非 Treg 细胞转变的方 法， 包含步骤为用抑制 Treg 细胞向非 Treg 细胞转变的制剂接触 Treg 细胞。所述非 Treg 细胞可是病原性T细胞，

41、例如， Th17细胞。 在一优选的实施方式中， 所述制剂是含有oATP的 组合物。所述方法可 ( 例如 ) 在体内或体外进行。 0020 在另一实施方式中， 本发明提供一种用于将非Treg细胞向Treg细胞转变的方法， 包含步骤为用增强非 Treg 细胞向 Treg 细胞转变的制剂接触非 Treg 细胞。所述非 Treg 细 胞可是幼稚的或病原性 T 细胞， 例如， Th17 细胞。在一优选的实施方式中， 所述制剂是含有 oATP 的组合物。所述方法可 ( 例如 ) 在体内或体外进行。 0021 在另一实施方式中， 本发明提供一种用于增强 Treg 细胞活性 ( 例如， 免疫抑制活 性 ) 的

42、方法， 通过用增强 Treg 细胞活性的制剂接触 Treg 细胞。在一优选的实施方式中， 所 述制剂是含有 oATP 的组合物。所述方法可 ( 例如 ) 在体内或体外进行。 0022 本发明也可体现为一种用于治疗细胞死亡或组织损伤的方法， 包含用调节一种或 多种 T 细胞 - 依赖性免疫应答的制剂接触 T 细胞。在一实施方式中， 所述方法可包含一个 或多个步骤 ： (1) 用抑制 ATP- 介导的 T 细胞活化的制剂接触 T 细胞 ； (2) 用抑制 Treg 细胞 转变为非 Treg 细胞和 / 或增强其免疫抑制活性的制剂接触 Treg 细胞 ； (3) 用诱导 Treg 细 胞分化和 /

43、或扩展的制剂接触 Treg 细胞。在一优选的实施方式中， 步骤 (1) 在体内进行。 在一优选的实施方式中， 步骤(3)优选在体外进行， 并且随后在体内施用分化和/或扩展的 Treg 细胞。在一优选的实施方式中， 所述制剂或组合物包含 oATP。 0023 本发明也可体现为一种用于治疗自身免疫或炎性疾病的方法， 包含步骤为用调节 一种或多种 T 细胞 - 依赖性免疫应答的制剂接触 T 细胞。在一实施方式中， 所述方法可包 含下列步骤中的一个或多个步骤 ： (1) 用抑制 ATP- 介导的 T 细胞活化的制剂接触 T 细胞 ； (2) 用抑制 Treg 细胞转变为非 Treg 细胞和 / 或增强

44、其免疫抑制活性的制剂接触 Treg 细 胞 ； (3) 用诱导 Treg 细胞分化和 / 或扩展的制剂接触 Treg 细胞。在一优选的实施方式中， 步骤 (1) 在体内进行。在一优选的实施方式中， 步骤 (3) 优选在体外进行， 并且随后在体内 施用分化和 / 或扩展的 Treg 细胞。在一优选的实施方式中， 所述制剂包含 oATP。在一实 施方式中， 所述自身免疫或炎性疾病是适应性免疫系统的自身免疫或炎性疾病， 例如， T 淋 巴细胞依赖性炎性疾病。在一优选的实施方式中， 所述 T 淋巴细胞依赖性炎性疾病关于， 例 如， 哮喘、 过敏症、 类风湿关节炎、 银屑病关节炎、 关节炎、 内毒素血症

45、、 I 型糖尿病、 炎性肠道 疾病 (IBD)、 结肠炎、 多发性硬化症、 移植排斥反应、 移植物抗宿主病、 肌萎缩性侧索硬化症、 脱髓鞘病、 硬皮病、 干燥综合征、 Erdheim-Chester 综合征、 克罗恩病综合征、 高安动脉炎、 结 节病、 自身免疫性溶血性贫血及 Werlhof 特发性血小板减少综合征。在另一个优选的实施 方式中， 所述 T 淋巴细胞依赖性炎性疾病关于皮肤病， 比如， 例如银屑病、 皮肤 T 细胞淋巴 瘤、 皮肤移植物抗宿主病、 特应性皮炎、 变应性接触性皮炎、 斑秃、 白癜风、 药物相关的疹、 接 触性超敏反应、 红斑狼疮、 苔藓痘疹样糠疹、 慢性苔藓性糠疹、

46、湿疹及扁平苔藓。 0024 在一优选的实施方式中， 本发明体现为一种体内治疗受试者自身免疫或炎性疾病 的方法。所述方法可包含 ( 例如 ) 给受试者体内施用下列中的至少一种 ： (1) 抑制 ATP- 介 导的 T 细胞活化的制剂 ； (2) 调节至少一种 Treg 细胞活性的制剂， 例如 Treg 细胞分化和 / 或扩展以及Treg细胞免疫抑制活性 ； 和(3)通过体外接触本发明的制剂而分化和/或扩展 说 明 书 CN 101998864 A CN 101998870 A5/33 页 10 的 Treg 细胞。在一优选的实施方式中， 所述步骤 (1) 和 / 或步骤 (2) 的制剂包含 oA

47、TP。 0025 在一实施方式中， 所述调节至少一种 T 细胞依赖性免疫应答的制剂 ( 例如， 抑制 ATP- 介导的 T 细胞活化的制剂和 / 或调节至少一种 Treg 细胞活性的制剂 ) 是纳米胶囊化 的， 例如， 形成纳米颗粒。在另一实施方式中， 已经通过接触本发明的制剂而分化和 / 或扩 展的 Treg 细胞是纳米胶囊化的， 例如， 形成纳米颗粒。在一实施方式中， 所述纳米颗粒靶向 特异的细胞或组织。 在一优选的实施方式中， 所述纳米颗粒在体内靶向特异的细胞或组织。 0026 本发明也提供一种方法， 其给有需要的受试者施用调节 T 细胞 - 依赖性免疫应答 的制剂。在一实施方式中， 所

48、述制剂结内施用。在另一实施方式中， 所述制剂局部施用。在 另一实施方式中， 所述制剂通过静脉内或注射施用。 0027 本发明也提供一种方法， 其调节受试者的 T 细胞依赖性免疫应答， 比如自身免疫 疾病或过敏， 通过施用用本发明的制剂诱导分化和/或扩展产生的Treg细胞。 本方法包含 ： (a) 从受试者获取幼稚的 T 细胞群 ( 例如， 幼稚的 CD4+T 细胞 ) ； (b) 通过分化和扩展从幼稚 的 T 细胞中生成 Treg 细胞 ； 和 (c) 将生成的 Treg 细胞导入受试者来调节， 例如， 抑制受试 者的 T 细胞依赖性免疫应答。 0028 通过查看下列更详细的本发明的描述以及附

49、图， 将更完整地理解和认识这些以及 本发明的其它目标和优势。 附图说明 0029 图 1 ： crt-/-T 细胞中增加的线粒体 Ca2+缓冲 0030 (a)用毒胡萝卜内酯耗尽ER Ca2+后， 在crt-/-和crt+/+T细胞克隆中通过添加0.5mM Ca2+到细胞外培养基中诱导 CCE( 参见实施例 1)。在完全冲洗掉细胞外 Ca2+后， 所述线粒体 Ca2+缓冲通过添加离子霉素被可视化。 0031 (b)柱状图表示crt-/-和crt+/+T细胞克隆中， 在伴随0.5、 1和2mM的细胞外Ca2+CCE 后， 线粒体的 Ca2+含量。 0032 (c)crt-/-T细胞中增加的线粒体的Ca2+缓冲减缓CRAC失活。 用毒胡萝卜内酯治疗 细胞， 随后两次单独地添加 Ca2+到细胞外培养基 ( 参见实施例 1)( 也见图 2C)。在第一次 和第二次添加 Ca2+时计算细胞溶质 Ca2+浓度升高的速度。在 crt+/+而不是 crt-/-T 细胞中 观测到明显降低。 0033 (d) 在线粒体解偶联剂存在 (CCCP) 下重复相同的实验，