涉及外排体的方法和组合物.pdf

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201580025682.4 (22)申请日 2015.05.15 (30)优先权数据 61/994,974 2014.05.18 US (85)PCT国际申请进入国家阶段日 2016.11.18 (86)PCT国际申请的申请数据 PCT/US2015/031008 2015.05.15 (87)PCT国际申请的公布数据 WO2015/179227 EN 2015.11.26 (71)申请人 儿童医学中心公司 地址 美国马萨诸塞州 (72)发明人 S亚历山大米特西利斯 斯特兰库雷

2、姆巴纳斯 康斯坦丁诺斯斯德里马斯 (74)专利代理机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 代理人 彭鲲鹏 郑斌 (51)Int.Cl. A61K 9/133(2006.01) (54)发明名称 涉及外排体的方法和组合物 (57)摘要 本公开内容提供了包含外排体亚群的组合 物及其在患有某些病症的对象中的使用方法， 所 述病症包括肺病、 心血管病、 肾病和缺血性神经 病。 本公开内容提供了包含外排体的组合物及其 在治疗和/预防多种疾病或病症中的使用方法。 因此， 本公开内容的一个方面提供了分离的外排 体。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体包含 选自ALIX、 TSG101、 TGFB

3、R2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105的一种或更多种标志物， 和/或所 述分离的外排体不包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的一种或更多种标志物。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体包含选自 ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105的2、 3、 4、 5、 6、 7或8种标志物。 权利要求书6页 说明书23页 附图8页 CN 106714781 A 2017.05.24 CN 106714781 A 1.分离的外排体， 其中 (i)所述分离的

4、外排体包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和 CD105的一种或更多种标志物； 和/或 (ii)其中所述分离的外排体不包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的一 种或更多种标志物。 2.权利要求1所述的分离的外排体， 其中所述外排体包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105的2、 3、 4、 5、 6、 7或8种标志物。 3.权利要求2所述的分离的外排体， 其中所述外排体包含所述标志物ALIX、 TSG10

5、1、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105。 4.权利要求1至3中任一项所述的分离的外排体， 其中所述外排体不包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的2、 3、 4、 5、 6或7种标志物。 5.权利要求4所述的分离的外排体， 其中所述外排体不包含所述标志物FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2。 6.权利要求1至5中任一项所述的分离的外排体， 其中所述外排体在透射电子显微术中 负染色后具有球形形态并且显现射线可透。 7.权利要求6所述的分离的外排体， 其中所述外

6、排体在负染色透射电子显微术中不具 有杯形形态。 8.权利要求1至7中任一项所述的分离的外排体， 其中所述外排体的直径为约10至 150nm。 9.权利要求8所述的分离的外排体， 其中所述外排体的直径为约30至100nm。 10.权利要求1至9中任一项所述的分离的外排体， 其中所述外排体从间充质干细胞 (MSC)、 成纤维细胞或巨噬细胞分离。 11.权利要求10所述的分离的外排体， 其中所述MSC、 成纤维细胞或巨噬细胞是人MSC、 人成纤维细胞或人巨噬细胞。 12.权利要求10或11所述的分离的外排体， 其中所述MSC从脐带胶质、 脐带血、 胎盘、 外 周血、 骨髓或脂肪组织分离。 13.组合

7、物， 其包含权利要求1至12中任一项所述的分离的外排体。 14.药物组合物， 其包含治疗有效量的权利要求1至12中任一项所述的分离的外排体。 15.分离的外排体， 其中 (i)所述分离的外排体包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的一种或更 多种标志物； 和/或 (ii)其中所述分离的外排体不包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105的一种或更多种标志物。 16.权利要求15所述的分离的外排体， 其中所述外排体包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR

8、、 AKT1和AKT2的2、 3、 4、 5、 6或7种标志物。 17.权利要求16所述的分离的外排体， 其中所述外排体包含所述标志物FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2。 18.权利要求15至17中任一项所述的分离的外排体， 其中所述外排体不包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105的2、 3、 4、 5、 6、 7或8种标志物。 权 利 要 求 书 1/6 页 2 CN 106714781 A 2 19.权利要求18所述的分离的外排体， 其中所述外排体不包含所述标志物ALIX

9、、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105。 20.权利要求15至19中任一项所述的分离的外排体， 其中所述外排体在负染色透射电 子显微术中具有杯形形态。 21.权利要求20所述的分离的外排体， 其中所述外排体在负染色透射电子显微术中不 具有球形形态。 22.权利要求15至21中任一项所述的外排体， 其中所述外排体的直径为约10至250nm。 23.权利要求22所述的外排体， 其中所述外排体的直径为约30至200nm。 24.用于治疗肺病、 心血管病、 肾病或缺血性神经病的方法， 其包括向患有或有风险患 有肺病、 心血管病、 肾病或缺血

10、性神经病的对象施用治疗有效量的分离的外排体， 其中 (i)所述分离的外排体包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和 CD105的一种或更多种标志物； 和/或 (ii)其中所述分离的外排体不包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的一 种或更多种标志物。 25.权利要求24所述的方法， 其中所述外排体包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105的2、 3、 4、 5、 6、 7或8种标志物。 26.权利要求25所述

11、的方法， 其中所述外排体包含所述标志物ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMADl、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105。 27.权利要求24至26中任一项所述的方法， 其中所述外排体不包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的2、 3、 4、 5、 6或7种标志物。 28.权利要求27所述的方法， 其中所述外排体不包含所述标志物FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKTI和AKT2。 29.权利要求24至28中任一项所述的方法， 其中所述外排体在透射电子显微术中负染 色后具有球形形态并且显现射线可

12、透。 30.权利要求29所述的方法， 其中所述外排体在负染色透射电子显微术中不具有杯形 形态。 31.权利要求24至30中任一项所述的方法， 其中所述外排体的直径为约10至150nm。 32.权利要求31所述的方法， 其中所述外排体的直径为约30至100nm。 33.权利要求24至32中任一项所述的方法， 其中所述外排体从间充质干细胞(MSC)、 成 纤维细胞或巨噬细胞分离。 34.权利要求33所述的方法， 其中所述MSC是人MSC、 人成纤维细胞或人巨噬细胞。 35.权利要求33或34所述的方法， 其中所述MSC从脐带胶质、 脐带血、 胎盘、 外周血、 骨髓 或脂肪组织分离。 36.权利要求

13、24至35中任一项所述的方法， 其中所述肺病是炎性肺病、 肺血管病或急性 肺损伤。 37.权利要求36所述的方法， 其中所述炎性肺病是缺氧诱导的肺炎症、 肺动脉高压、 哮 喘、 支气管肺发育异常(BPD)、 变态反应或特发性肺纤维化。 38.权利要求36所述的方法， 其中所述急性肺损伤与脓毒症相关或者是呼吸机诱导的 急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。 权 利 要 求 书 2/6 页 3 CN 106714781 A 3 39.权利要求24至35中任一项所述的方法， 其中所述心血管病是心肌梗死、 心血管疾 病、 高血压、 动脉粥样硬化或心力衰竭。 40.权利要求24至35中任一项所述的方法， 其中

14、所述肾病是缺血性肾损伤、 急性肾衰竭 或肾纤维化。 41.权利要求24至35中任一项所述的方法， 其中所述缺血性神经病是缺氧缺血性脑病 或缺血性卒中。 42.分离的外排体用于治疗肺病、 心血管病、 肾病或缺血性神经病的用途， 其中 (i)所述分离的外排体包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和 CD105的一种或更多种标志物； 和/或 (ii)其中所述分离的外排体不包含选自FLOTI、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的一 种或更多种标志物。 43.权利要求42所述的用途， 其中所述外排体包含选自

15、ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105的2、 3、 4、 5、 6、 7或8种标志物。 44.权利要求43所述的用途， 其中所述外排体包含所述标志物ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105。 45.权利要求42至44中任一项所述的用途， 其中所述外排体不包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的2、 3、 4、 5、 6或7种标志物。 46.权利要求45所述的用途， 其中所述外排体不包含所述标志物FLOT1、 C

16、D9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2。 47.权利要求42至46中任一项所述的用途， 其中所述外排体在透射电子显微术中负染 色后具有球形形态并且显现射线可透。 48.权利要求47所述的用途， 其中所述外排体在负染色透射电子显微术中不具有杯形 形态。 49.权利要求42至48中任一项所述的用途， 其中所述外排体的直径为约10至150nm。 50.权利要求49所述的用途， 其中所述外排体的直径为约30至100nm。 51.权利要求42至50中任一项所述的用途， 其中所述外排体从间充质干细胞(MSC)、 成 纤维细胞或巨噬细胞分离。 52.权利要求51所述的用途， 其中所述

17、MSC是人MSC、 人成纤维细胞或人巨噬细胞。 53.权利要求51或52所述的用途， 其中所述MSC从脐带胶质、 脐带血、 胎盘、 外周血、 骨髓 或脂肪组织分离。 54.权利要求42至53中任一项所述的用途， 其中所述肺病是炎性肺病、 肺血管病或急性 肺损伤。 55.权利要求54所述的用途， 其中所述炎性肺病是缺氧诱导的肺炎症、 肺动脉高压、 哮 喘、 支气管肺发育异常(BPD)、 变态反应或特发性肺纤维化。 56.权利要求54所述的用途， 其中所述急性肺损伤与脓毒症相关或者是呼吸机诱导的 急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。 57.权利要求42至53中任一项所述的用途， 其中所述心血管病是心肌

18、梗死、 心血管疾 病、 高血压、 动脉粥样硬化或心力衰竭。 58.权利要求42至53中任一项所述的用途， 其中所述肾病是缺血性肾损伤、 急性肾衰竭 权 利 要 求 书 3/6 页 4 CN 106714781 A 4 或肾纤维化。 59.权利要求42至53中任一项所述的用途， 其中所述缺血性神经病是缺氧缺血性脑病 或缺血性卒中。 60.分离的外排体在制备用于治疗肺病、 心血管病、 肾病或缺血性神经病的药物中的用 途， 其中 (i)所述分离的外排体包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和 CD105的一种或更多种标志物； 和/或

19、(ii)其中所述分离的外排体不包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的一 种或更多种标志物。 61.权利要求60所述的用途， 其中所述外排体包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105的2、 3、 4、 5、 6、 7或8种标志物。 62.权利要求61所述的用途， 其中所述外排体包含所述标志物ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105。 63.权利要求60至62中任一项所述的用途， 其中所述外排体不包含选自FL

20、OT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的2、 3、 4、 5、 6或7种标志物。 64.权利要求63所述的用途， 其中所述外排体不包含所述标志物FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2。 65.权利要求60至64中任一项所述的用途， 其中所述外排体在透射电子显微术中负染 色后具有球形形态并且显现射线可透。 66.权利要求65所述的用途， 其中所述外排体在负染色透射电子显微术中不具有杯形 形态。 67.权利要求60至66中任一项所述的用途， 其中所述外排体的直径为约10至150nm。 68.权利要求67所述的用途， 其中所

21、述外排体的直径为约30至100nm。 69.权利要求60至68中任一项所述的用途， 其中所述外排体从间充质干细胞(MSC)、 成 纤维细胞或巨噬细胞分离。 70.权利要求69所述的用途， 其中所述MSC是人MSC、 人成纤维细胞或人巨噬细胞。 71.权利要求69或70所述的用途， 其中所述MSC从脐带胶质、 脐带血、 胎盘、 外周血、 骨髓 或脂肪组织分离。 72.权利要求60至71中任一项所述的用途， 其中所述肺病是炎性肺病、 肺血管病或急性 肺损伤。 73.权利要求72所述的用途， 其中所述炎性肺病是缺氧诱导的肺炎症、 肺动脉高压、 哮 喘、 支气管肺发育异常(BPD)、 变态反应或特发性

22、肺纤维化。 74.权利要求72所述的用途， 其中所述急性肺损伤与脓毒症相关或者是呼吸机诱导的 急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。 75.权利要求60至71中任一项所述的用途， 其中所述心血管病是心肌梗死、 心血管疾 病、 高血压、 动脉粥样硬化或心力衰竭。 76.权利要求60至71中任一项所述的用途， 其中所述肾病是缺血性肾损伤、 急性肾衰竭 或肾纤维化。 77.权利要求60至71中任一项所述的用途， 其中所述缺血性神经病是缺氧缺血性脑病 权 利 要 求 书 4/6 页 5 CN 106714781 A 5 或缺血性卒中。 78.用于产生外排体的方法， 其包括： 培养细胞以产生条件培养基； 以及

23、 从所述条件培养基分离所述外排体； 其中 (i)所述分离的外排体包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和 CD105的一种或更多种标志物； 和/或 (ii)其中所述分离的外排体不包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的一 种或更多种标志物。 79.权利要求78所述的方法， 其中所述外排体包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105的2、 3、 4、 5、 6、 7或8种标志物。 80.权利要求79所述的方法，

24、其中所述外排体包含所述标志物ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105。 81.权利要求78至80中任一项所述的方法， 其中所述外排体不包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的2、 3、 4、 5、 6或7种标志物。 82.权利要求81所述的方法， 其中所述外排体不包含所述标志物FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2。 83.权利要求78至82中任一项所述的方法， 其中所述外排体在透射电子显微术中负染 色后具有球形形态并且显现射线可透。 84

25、.权利要求83所述的方法， 其中所述外排体在负染色透射电子显微术中不具有杯形 形态。 85.权利要求78至84中任一项所述的方法， 其中所述外排体的直径为约10至150nm。 86.权利要求85所述的方法， 其中所述外排体的直径为约30至100nm。 87.权利要求78至86中任一项所述的方法， 其中所述细胞是间充质干细胞(MSC)、 成纤 维细胞或巨噬细胞。 88.权利要求87所述的方法， 其中所述MSC、 成纤维细胞或巨噬细胞是人MSC、 人成纤维 细胞或人巨噬细胞。 89.权利要求87或88所述的方法， 其中所述MSC从脐带胶质、 脐带血、 胎盘、 外周血、 骨髓 或脂肪组织分离。 90

26、.权利要求78至89中任一项所述的方法， 其中所述培养是二维(2D)或三维(3D)培养。 91.权利要求90所述的方法， 其中所述3D培养包括悬滴培养、 基质上培养、 微载体上培 养、 合成细胞外支架上培养、 壳聚糖膜上培养、 磁悬浮下培养、 旋转生物反应器中悬浮培养 或非接触抑制条件下培养。 92.权利要求78至91中任一项所述的方法， 其中所述培养包括使用选自TGF 超家族 (TGF 1、 激活素、 BMP、 GDF、 GDNF、 抑制素、 Nodal、 Lefty、 MIS)EGF、 PDGF和FGF的一种或更多种 生长因子。 93.权利要求78至92中任一项所述的方法， 其中相对于包含

27、选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2中一种或更多种标志物的外排体， 所述方法增强包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105中一种或更多种标志物的外排体的产 生。 权 利 要 求 书 5/6 页 6 CN 106714781 A 6 94.权利要求93所述的方法， 其中所述增强包括， 相对于包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2中一种或更多种标志物的外排体， 包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMA

28、D2、 SMAD3、 SMAD5和CD105中一种或更多种标志物的外排体的产生提高1.5倍、 2.0 倍、 2.5倍、 3.0倍、 3.5倍、 4.0倍、 4.5倍或5.0倍、 6.0倍、 7.0倍、 8.0倍、 9.0倍或10.0倍或者更 多。 权 利 要 求 书 6/6 页 7 CN 106714781 A 7 涉及外排体的方法和组合物 0001 相关申请 0002 本申请依据35U.S.C. 119(e)要求于2014年5月18日提交、 标题为 “METHODS AND COMPOSITIONS RELATING TO EXOSOMES” 、 序列号为61/994,974的美国临时申请的

29、权益， 其 内容通过引用整体并入本文。 背景技术 0003 外排体(exosome)是存在于很多并且可能所有生物流体(包括血液、 尿和来自于细 胞培养物的条件培养基)中的来自于细胞的囊泡。 报道的外排体直径通常为30至100nm， 相 比之下这大于LDL但是显著小于红细胞。 已知当多囊泡体(multivesicular body)与质膜融 合时或者当它们从质膜直接释放时， 从细胞释放外排体。 越来越清楚的是， 外排体具有特化 功能并且在例如凝固、 细胞间信号传导和废物处理(waste management)中发挥关键作用。 因此， 对外排体的临床应用的兴趣日益增长， 所述外排体包括汇总有来自于

30、细胞的外排体 的多个方面的合成外排体。 外排体可潜在地用于预后、 治疗以及健康和疾病的生物标志物。 0004 发明概述 0005 本公开内容提供了包含外排体的组合物及其在治疗和/或预防多种疾病或病症中 的使用方法。 0006 因此， 本公开内容的一个方面提供了分离的外排体。 在一些实施方案中， 所述分离 的外排体包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105的一种或更多 种标志物； 和/或所述分离的外排体不包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的 一种或更多种标志物。 在一些实

31、施方案中， 所述分离的外排体包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105的2、 3、 4、 5、 6、 7或8种标志物。 在一些实施方案 中， 所述分离的外排体包含标志物ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和 CD105。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体不包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的2、 3、 4、 5、 6或7种标志物。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体不包含标志 物FLOT1、 CD9、 C

32、D81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体在透射 电子显微术中负染色后具有球形形态并且显现射线可透(radiolucent)， 和/或所述分离的 外排体在负染色透射电子显微术中不具有杯形(cup shape)形态。 所述分离的外排体的直 径为约10至150nm。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体的直径为约30至100nm。 在一些实 施方案中， 所述分离的外排体从间充质干细胞(mesenchymal stem cell， MSC)、 成纤维细胞 或巨噬细胞分离。 在一些实施方案中， 所述MSC、 成纤维细胞或巨噬细胞是人MSC、 人成纤维

33、细胞或人巨噬细胞。 在一些实施方案中， 所述MSC从脐带胶质(Wharton s jelly)、 脐带血、 胎盘、 外周血、 骨髓或脂肪组织分离。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体包含在组合物 中。 在一些实施方案中， 所述组合物是药物组合物。 0007 根据本公开内容的另一个方面， 提供了分离的外排体。 在一些实施方案中， 所述分 离的外排体包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的一种或更多种标志物； 和/ 或所述分离的外排体不包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD10

34、5 说 明 书 1/23 页 8 CN 106714781 A 8 的一种或更多种标志物。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的2、 3、 4、 5、 6或7种标志物。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体 包含标志物FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2。 在一些实施方案中， 所述分离的外排 体不包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105的2、 3、 4、 5、 6、 7或8 种标志物。 在一

35、些实施方案中， 所述分离的外排体不包含标志物ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体在负染色透射 电子显微术(negativestaining transmission electron microscopy)中具有杯形形态， 和/或在负染色透射电子显微术中不具有球形形态。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体 的直径为约10至250nm。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体的直径为约30至200nm。 0008 根据另一个方面， 提供了用于治疗肺病、 心血管病、 肾病或缺血性神经病

36、(ischemic neural disorder)的方法。 在一些实施方案中， 所述方法包括向患有或有风险 患有肺病、 心血管病、 肾病或缺血性神经病的对象施用治疗有效量的分离的外排体。 在一些 实施方案中， 所述分离的外排体包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5 和CD105的一种或更多种标志物； 和/或所述分离的外排体不包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的一种或更多种标志物。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体包 含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMA

37、D1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105的2、 3、 4、 5、 6、 7或8种标志 物。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体包含标志物ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体不包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的2、 3、 4、 5、 6或7种标志物。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体 不包含标志物FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2。 在一些实施方案中， 所述分离的外

38、 排体在透射电子显微术中负染色后具有球形形态并且显现射线可透， 和/或所述分离的外 排体在负染色透射电子显微术中不具有杯形形态。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体 的直径为约10至150nm。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体的直径为约30至100nm。 在一 些实施方案中， 所述分离的外排体从间充质干细胞(MSC)、 成纤维细胞或巨噬细胞分离。 在 一些实施方案中， 所述MSC、 成纤维细胞或巨噬细胞是人MSC、 人成纤维细胞或人巨噬细胞。 在一些实施方案中， 所述MSC从脐带胶质、 脐带血、 胎盘、 外周血、 骨髓或脂肪组织分离。 在一 些实施方案中， 所治疗的肺病是炎性肺病、 肺

39、血管病或急性肺损伤。 在一些实施方案中， 所 述炎性肺病是缺氧诱导的肺炎症、 肺动脉高压(pulmonary hypertension)、 哮喘、 支气管肺 发育异常(bronchopulmonary dysplasia， BPD)、 变态反应或特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis)。 在一些实施方案中， 所述急性肺损伤与脓毒症(sepsis)相关， 或者 是呼吸机(ventilator)诱导的急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome， ARDS)。 在一些实施方案中， 根据所述方法治疗的心血管病是心肌梗死

40、、 心血管疾 病、 高血压、 动脉粥样硬化或心力衰竭。 在涉及治疗肾病的一些实施方案中， 所述肾病是缺 血性肾损伤、 急性肾衰竭或肾纤维化。 在涉及治疗缺血性神经病的方法的一些实施方案中， 所述病症是缺氧缺血性脑病(hypoxic ischemic encephalopathy)或缺血性卒中 (ischemic stroke)。 0009 根据本公开内容的又一个方面， 提供了分离的外排体用于治疗肺病、 心血管病、 肾 病或缺血性神经病的用途。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105

41、的一种或更多种标志物； 和/或所述分离的外排 说 明 书 2/23 页 9 CN 106714781 A 9 体不包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的一种或更多种标志物。 在一些实 施方案中， 所述分离的外排体包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和 CD105的2、 3、 4、 5、 6、 7或8种标志物。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体包含标志物 ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105。 在一些实施

42、方案中， 所述分离的 外排体不包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的2、 3、 4、 5、 6或7种标志物。 在 一些实施方案中， 所述分离的外排体不包含标志物FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和 AKT2。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体在透射电子显微术中负染色后具有球形形态 并且显现射线可透， 和/或所述分离的外排体在负染色透射电子显微术中不具有杯形形态。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体的直径为约10至150nm。 在一些实施方案中， 所述分 离的外排体的直径为约30至100nm。 在一些实施方

43、案中， 所述分离的外排体从间充质干细胞 (MSC)、 成纤维细胞或巨噬细胞分离。 在一些实施方案中， 所述MSC、 成纤维细胞或巨噬细胞 是人MSC、 人成纤维细胞或人巨噬细胞。 在一些实施方案中， 所述MSC从脐带胶质、 脐带血、 胎 盘、 外周血、 骨髓或脂肪组织分离。 在一些实施方案中， 所述肺病是炎性肺病、 肺血管病或急 性肺损伤。 在一些实施方案中， 所述炎性肺病是缺氧诱导的肺炎症、 肺动脉高压、 哮喘、 支气 管肺发育异常(BPD)、 变态反应或特发性肺纤维化。 在一些实施方案中， 所述急性肺损伤与 脓毒症相关， 或者是呼吸机诱导的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。 在一些实施方案中

44、， 所述心 血管病是心肌梗死、 心血管疾病、 高血压、 动脉粥样硬化或心力衰竭。 在一些实施方案中， 所 述肾病是缺血性肾损伤、 急性肾衰竭或肾纤维化。 在一些实施方案中， 所述缺血性神经病是 缺氧缺血性脑病或缺血性卒中。 0010 根据另一个方面， 提供了分离的外排体在制备用于治疗肺病、 心血管病、 肾病或缺 血性神经病的药物中的用途。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105的一种或更多种标志物； 和/或所述分 离的外排体不包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、

45、EGFR、 AKT1和AKT2的一种或更多种标志物。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105的2、 3、 4、 5、 6、 7或8种标志物。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体 包含标志物ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体不包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的2、 3、 4、 5、 6或7种 标志物。 在一些实施方案

46、中， 所述分离的外排体不包含标志物FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体在透射电子显微术中负染色后具有球 形形态并且显现射线可透， 和/或所述分离的外排体在负染色透射电子显微术中不具有杯 形形态。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体的直径为约10至150nm。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体的直径为约30至100nm。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体从间充质 干细胞(MSC)、 成纤维细胞或巨噬细胞分离。 在一些实施方案中， 所述MSC、 成纤维细胞或巨 噬细胞是人MSC、 人成纤维细胞或人巨噬细胞。

47、 在一些实施方案中， 所述MSC从脐带胶质、 脐 带血、 胎盘、 外周血、 骨髓或脂肪组织分离。 在涉及外排体用于制备用于治疗肺病之药物的 用途的一些实施方案中， 所述病症是炎性肺病、 肺血管病或急性肺损伤。 在一些实施方案 中， 所述炎性肺病是缺氧诱导的肺炎症、 肺动脉高压、 哮喘、 支气管肺发育异常(BPD)、 变态 反应或特发性肺纤维化。 在一些实施方案中， 所述急性肺损伤与脓毒症相关， 或者是呼吸机 诱导的急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。 在一些实施方案中， 提供了外排体用于制备用于治疗 说 明 书 3/23 页 10 CN 106714781 A 10 心血管病的药物的用途， 所述病

48、症是心肌梗死、 心血管疾病、 高血压、 动脉粥样硬化或心力 衰竭。 在涉及外排体用于制备用于治疗肾病之药物的用途的一些实施方案中， 所述肾病是 缺血性肾损伤、 急性肾衰竭或肾纤维化。 在涉及外排体用于制备用于治疗缺血性神经病之 药物的用途的一些实施方案中， 所述病症是缺氧缺血性脑病或缺血性卒中。 0011 根据本公开内容的又一个方面， 提供了用于产生外排体的方法。 在一些实施方案 中， 所述方法包括培养细胞以产生条件培养基并从所述条件培养基分离外排体。 在一些实 施方案中， 所述分离的外排体包含选自ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5

49、和 CD105的一种或更多种标志物； 和/或所述分离的外排体不包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的一种或更多种标志物。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体包含选自 ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105的2、 3、 4、 5、 6、 7或8种标志物。 在 一些实施方案中， 所述分离的外排体包含标志物ALIX、 TSG101、 TGFBR2、 SMAD1、 SMAD2、 SMAD3、 SMAD5和CD105。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体不包含选自FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2的2、 3、 4、 5、 6或7种标志物。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体 不包含标志物FLOT1、 CD9、 CD81、 CAV1、 EGFR、 AKT1和AKT2。 在一些实施方案中， 所述分离的外 排体在透射电子显微术中负染色后具有球形形态并且显现射线可透， 和/或所述分离的外 排体在负染色透射电子显微术中不具有杯形形态。 在一些实施方案中， 所述分离的外排体 的直径为约10至150nm。 在一些实施方案中， 所述分