青橄榄提取物在制备防治龋齿的药品、食品或日用品中的应用.pdf

1、(10)授权公告号 CN 103110683 B (45)授权公告日 2015.01.07 CN 103110683 B (21)申请号 201310050652.1 (22)申请日 2013.02.08 A61K 36/32(2006.01) A61K 8/97(2006.01) A61K 9/12(2006.01) A61P 1/02(2006.01) A23L 1/29(2006.01) A61Q 11/00(2006.01) A61K 131/00(2006.01) (73)专利权人 中国人民武装警察部队后勤学院 地址 300162 天津市河东区成林道 222 号 (72)发明人 刘岱

2、琳 延慧君 陈虹 董晓青 马卫俊 赵艳敏 高颖 (74)专利代理机构 天津市北洋有限责任专利代 理事务所 12201 代理人 陆艺 CN 101617800 A,2010.01.06, 说明书全文 . 范敏等 . 青果的研究进展 .安徽农业科 学 .2010, 第 38 卷 ( 第 34 期 ),19358-19360. 陈碧琼等 . 中药青果的化学成分及药理作用 研究进展 .广州化工 .2012, 第 40 卷 ( 第 21 期 ),16-18. 臧红新等 . 青橄榄叶提取物体外以菌活性研 究 .武警医学院学报 .2011, 第 20 卷 ( 第 12 期 ),935-937. 李德懿等 .

3、 龋齿、 牙周炎患牙和健康牙的菌 斑生物膜特征 .口腔医学 .2005, 第 25 卷 ( 第 3 期 ),129-131. (54) 发明名称 青橄榄提取物在制备防治龋齿的药品、 食品 或日用品中的应用 (57) 摘要 本发明公开了青橄榄提取物在制备防治龋齿 的药品、 食品或日用品中的应用。 实验证明青橄榄 提取物对诱发龋齿的变异链球菌、 远缘链球菌和 乳酸杆菌具有明显的抑菌作用， 能抑制上述菌的 粘附性， 对上述菌的产酸性有抑制作用， 非常适用 于防治龋齿。特别是制备成各种药物剂型或各种 食品及日用品， 可以方便对龋齿进行防治。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 尹瑶菲 权

4、利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书5页 附图1页 (10)授权公告号 CN 103110683 B CN 103110683 B 1/1 页 2 1. 青橄榄提取物在制备防治龋齿的药品、 食品或日用品中的应用， 所述的青橄榄提取 物是用下述方法制成 ： 以1质量份数的青橄榄的枝、 叶或果实为原料， 用3-12质量份数的水 或 3-12 质量份数的体积浓度为 10 -99.9的乙醇水溶液进行回流提取 , 提取 1-4 次， 每 次提取 1-5 小时， 过滤 , 滤液减压浓缩， 得糖度为 20-40 的浓缩

5、物， 干燥得到青橄榄提取物。 2. 根据权利要求 1 所述的应用， 其特征是所述青橄榄提取物为青橄榄的枝、 叶或果实 的提取物。 3. 根据权利要求 1 所述的应用， 其特征是所述药物的剂型为硬胶囊剂、 软胶囊剂、 散 剂、 颗粒剂、 片剂、 丸剂、 蜜膏剂、 口服液、 酒剂、 喷雾剂、 注射剂或茶剂。 4. 根据权利要求 1 所述的应用， 其特征是所述食品的类别为口香糖、 含片、 口胶或胶姆 糖。 5. 根据权利要求 1 所述的应用， 其特征是所述日用品的类别为牙膏、 牙粉、 嗽口水或口 腔清新喷雾剂。 权 利 要 求 书 CN 103110683 B 2 1/5 页 3 青橄榄提取物在制备

6、防治龋齿的药品、 食品或日用品中的 应用 技术领域 0001 本发明涉及一种青橄榄提取物在制备防治龋齿的药品、 食品或日用品中的应用。 背景技术 0002 本发明涉及的植物提取物来自我国盛产的青橄榄的植物提取物。青橄榄树 Canarium album(Lour.)Raeusch. 是我国南方部分地区种植的一种经济果树， 其成熟干燥 的果实为卵圆形， 呈青色， 又名青果、 青子、 白榄、 青橄等， 其有效活性成分为橄榄多酚类物 质， 有清热、 利咽、 生津、 解毒、 免疫调节、 降血压、 降血脂、 清除自由基等功能， 用于治疗咽喉 肿痛、 咳嗽、 烦渴、 鱼蟹中毒等 1,2， 其产量巨大， 营养

7、价值丰富。青橄榄有很强的抑菌作用 3,4， 袁剑刚3 等采用 MTT 法和培养板连续稀释法研究了橄榄对几种常见细菌、 霉菌和酵母 菌的抑制效应， 结果表明， 橄榄对食品生产、 加工和贮藏中常见的腐败菌大肠杆菌、 金 黄色葡萄球菌、 枯草杆菌、 酿酒酵母、 土星汉逊酵母、 黑曲霉、 娄地青霉、 枯青霉、 黑跟霉、 黄 曲霉等均有较为明显的抑制作用， 可作为天然食品防腐剂， 并初步鉴定黄酮类物质及没食 子酸可能是其抑菌防腐的主要药效成分。青橄榄叶是青橄榄树的干燥叶子。其化学成分主 要为三萜和酚酸类， 目前对青橄榄叶抑菌活性研究较少， 有论文利用白色念珠菌、 铜绿假单 胞杆菌、 耐甲氧西林金黄色葡萄

8、球菌、 耐药白色念珠菌、 酿酒酵母及金黄色葡萄球菌测定青 橄榄叶总提取物及大孔树脂不同极性洗脱产物的体外抑菌活性 5。 但至今未见青橄榄提取 物抑制口腔厌氧菌的报道。 0003 研究表明龋病的发生与以下四方面因素密切相关 6-7 ： 0004 1. 引起龋病的特异性细菌 ： 研究发现变异链球菌与龋病的发生存在正相关， 是公 认的主要致龋菌， 此外远缘链球菌和乳酸杆菌也是重要的致龋菌。 0005 2. 细菌的粘附性 ： 细菌必须能黏附在牙齿表面， 进而形成牙菌斑生物斑， 并在特 定的微生态环境中才能致龋。 0006 3. 细菌的产酸性和耐酸性 ： 细菌发酵碳水化合物产酸是使牙齿脱矿的直接原因。

9、细菌致龋不仅能够产酸还与耐酸性有关。 细菌只有具有耐酸性才能在酸性环境中生长和代 谢碳水化合物产酸的性能。 0007 4. 细菌的糖合成 ： 细菌的细胞外多糖的合成在龋病的发生过程中具有重要作用。 既可以促进牙菌斑生物膜的形成， 又提供能量参与牙菌斑的产酸活动， 继而引发龋病。 0008 目前主要从致龋细菌的抑菌、 粘附性、 产酸和胞外水不溶性多糖的合成等作用， 从 而评价其防治龋病的作用。 0009 参考文献 ： 0010 1 国家药典委员会 , 中华人民共和国药典 ( 二部 )M. 北京 : 化学工业出版 社 ,2005:250. 0011 2 南京中医药大学 , 中药大辞典 ( 第二版

10、)M. 上海 : 上海科学技术出版社， 2006,3667. 说 明 书 CN 103110683 B 3 2/5 页 4 0012 3 杜玉虹 , 崔承彬 , 李文欣 , 等 . 方橄抗癌活性成分的研究 - 酚酸类细胞周期 抑制剂 J. 中国药物化学杂志 ,2003,13(6):320-323. 0013 4袁剑刚,刘昕,汤展球.橄榄的抑菌效应及其药效成分的初步研究J.食品 科学 ,2001,22(3) ： 82-84. 0014 5 臧红新， 延慧君， 段姚尧等 . 青橄榄叶提取物体外抑菌活性研究 . 武警医学院 学报， 2011:20（12） ： 935-937. 0015 6R.Yat

11、suda,P.L.Rosalen,J.A.Cury,et al.Journal of Ethnopharmacology.2 005,97:183-189. 0016 7R.Karthikeyan,B.T.Amaechi,H.R.Rawls,et al.Archives of Oral Biology,2010,dio:10.1016/j.archioralbio2010.10.022. 发明内容 0017 本发明的目的是克服现有技术的不足， 提供一种青橄榄提取物在制备防治龋齿的 药品、 食品或日用品中的应用。 0018 本发明的技术方案概述如下 ： 0019 青橄榄提取物在制备防治龋齿的药品

12、、 食品或日用品中的应用。 0020 所述青橄榄提取物为青橄榄的枝、 叶或果实的提取物。 0021 所述的青橄榄提取物是用下述方法制成 ： 以 1 质量份数的青橄榄的枝、 叶或果实 为原料， 用 3-12 质量份数的水或 3-12 质量份数的体积浓度为 10%-99.9% 的乙醇水溶液进 行回流提取 , 提取 1-4 次， 每次提取 1-5 小时， 过滤 , 滤液减压浓缩， 得糖度为 20-40 的浓 缩物， 干燥得到青橄榄提取物。 0022 所述药物的剂型为硬胶囊剂、 软胶囊剂、 散剂、 颗粒剂、 片剂、 丸剂、 蜜膏剂、 口服 液、 酒剂、 喷雾剂、 注射剂或茶剂。 0023 所述食品的类

13、别为口香糖、 含片、 口胶或胶姆糖。 0024 所述日用品的类别为牙膏、 牙粉、 嗽口水或口腔清新喷雾剂。 0025 本发明的优点 ： 0026 实验证明青橄榄提取物对诱发龋齿的变异链球菌、 远缘链球菌和乳酸杆菌具有明 显的抑菌作用， 能抑制上述菌的粘附性， 对上述菌的产酸性有抑制作用， 非常适用于防治龋 齿。特别是制备成各种药物剂型或各种食品及日用品， 可以方便对龋齿进行防治。 附图说明 0027 图 1 青橄榄提取物体外抑制变异链球菌粘附性的结果。 0028 图 2 青橄榄提取物体外抑制变异链球菌产酸能力的作用。 具体实施方式 0029 下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。 0030

14、 青橄榄提取物的制备步骤是 ： 以青橄榄的枝、 叶或果实为原料， 用水或乙醇水溶液 进行回流提取 , 过滤 , 滤液减压浓缩， 得浓缩物， 干燥得到青橄榄提取物。 0031 实施例 1-14 青橄榄提取物的制备参数见表 1。 说 明 书 CN 103110683 B 4 3/5 页 5 0032 表 1 0033 说 明 书 CN 103110683 B 5 4/5 页 6 0034 实施例 15 青橄榄提取物体外抑制诱发龋齿的变异链球菌、 远缘链球菌和乳酸杆 菌试验 0035 变异链球菌 Streptococcus mutans CGMCC12500， 购于中国普通微生物菌种保藏 管理中心。

15、 0036 远缘链球菌 Streptococcus sobrinus ATCC27351 购于北京北纳创联生物技术研 究院。 0037 乳酸杆菌 Lactobacillus sp.ACCC11026 购于北京北纳创联生物技术研究院。 0038 试验方法 ： 将植物提取物以倍比稀释法溶于 TPY 液体培养基中， 配制不同浓度的 药液， 并设置空白对照管 ( 仅加药液和培养基 ) 和未加药对照管 ( 仅加菌液和培养基 ) 各 一个。 吸取50L菌悬液分别加入实验管和未加药对照管中， 置于厌氧培养箱中， 在80%N2、 10%CO2、 10%H2、 37条件下培养 48h， 比较不同浓度组药液 (

16、包括空白对照组和未加药对照 组 ) 培养前后的 OD 值之差值。OD 值重复测定 3 次取平均值， 实验重复做 3 次。以与未加药 对照组相比有统计学差异的最小浓度为最小抑菌浓度 (MIC)， 用统计学方法通过 OD 值来确 定最小抑菌浓度 (MIC) 值。 0039 实验结果 ： 实施例 1-14 制备的青橄榄提取物对口腔致龋菌具有抑制作用， 具有很 好的应用开发前景。结果见表 2。 0040 表 2 不同橄榄提取物体外抑菌活性结果 0041 0042 实施例 16 测定青橄榄提取物对变异链球菌的粘附性影响。 0043 试验方法 ： 将复苏 48h 的变异链球菌菌种接种于 TPY 液体培养基

17、中， 80%N2、 10%CO2、 10%H2、 37条件下厌氧培养 18h， 涂片检查为纯培养后， 调整菌悬液最终浓度达到 5107CFU/mL， 将 1 份菌悬液与 10 份含有青橄榄提取物的 TPY 液体培养基混合后接种于培 说 明 书 CN 103110683 B 6 5/5 页 7 养皿中， 每个样品实验组设3个平行培养皿。 80%N2、 10%CO2、 10%H2、 37下厌氧培养48h， 培 养后将上清液弃去， 再定量 TPY 液体培养基， 吹打使其粘附在培养皿玻璃表面的细菌重新 悬浮， TPY 培养基作为空白， 利用比浊法测定细菌的粘附性和药物作用结果。实验结果如图 1 所示。

18、 0044 实验结果显示实施例 4（图 1 中的青橄榄 -4） 、 实施例 6（图 1 中的青橄榄 -6） 制 备的青橄榄提取物具有抑制变异链球菌粘附性的作用， 从而预防龋齿发生的作用。 0045 经实验证明， 实施例 1- 实施例 3， 实施例 5， 实施例 7- 实施例 14 所制备的青橄榄 提取物也具有抑制变异链球菌粘附性的作用。 0046 经实验证明， 实施例 1- 实施例 14 制备的青橄榄提取物也具有抑制远缘链球菌和 乳酸杆菌粘附的作用。 0047 实施例 17 测定青橄榄提取物对变异链球菌产酸能力的影响。 0048 试验方法 ： 在 MIC 测定的基础上， 低于 MIC 的浓度下

19、， 选取四个浓度进行药物和细 菌的共同培养， 80%N2、 10%CO2、 10%H2、 37下厌氧培养 24h 后。离心取上清液， 测定 pH 值。 从而计算培养前后 pH 值的差异， 确定药物对细菌产酸性的抑制作用。结果如图 2 所示。 0049 实验结果 ： 以实施例 4（图 2 中的青橄榄 -4） 、 实施例 6（图 2 中的青橄榄 -6） 制备 的青橄榄提取物为例确定了青橄榄提取物具有很好抑制变异链球菌产酸的作用。 0050 经实验证明， 实施例 1- 实施例 3， 实施例 5， 实施例 7- 实施例 14 所制备的青橄榄 提取物， 具有抑制变异链球菌产酸的作用。 0051 经实验证明， 实施例 1- 实施例 14 制备的青橄榄提取物具有抑制远缘链球菌和乳 酸杆菌产酸的作用。 0052 按常规方法将青橄榄提取物制备成硬胶囊剂、 软胶囊剂、 散剂、 颗粒剂、 片剂、 丸 剂、 蜜膏剂、 口服液、 酒剂、 喷雾剂、 注射剂或茶剂等药物剂型 ； 或制备成适于使用的口香糖、 含片、 口胶和胶姆糖 ； 或适于使用的牙膏、 牙粉、 嗽口水、 口腔清新喷雾剂对龋齿进行预防治 疗。 说 明 书 CN 103110683 B 7 1/1 页 8 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 103110683 B 8