紫草Α‑糖苷酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法.pdf

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710590157.8 (22)申请日 2017.07.19 (71)申请人 深圳弘汇生物医药有限公司 地址 518118 广东省深圳市坪山新区金牛 西路16号华瀚科技工业园2号厂房339 房 (72)发明人 孙仁宽 卢立娜 郭亚萍 范乐之 张海燕 (51)Int.Cl. A61K 36/30(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 3/04(2006.01) A61P 3/06(2006.01) G01N 30/90(2006.01) A61K

2、125/00(2006.01) (54)发明名称 紫草-糖苷酶抑制活性提取物及其组合物 的医药用途和制备方法 (57)摘要 本发明属医药技术领域， 具体涉及一种紫草 -糖苷酶抑制活性提取物及其组合物的医药用 途和制备方法以及它在降血糖、 减肥、 降血脂、 治 疗糖尿病等方面的医药用途。 权利要求书2页 说明书8页 附图2页 CN 107412311 A 2017.12.01 CN 107412311 A 1.一种紫草提取物， 其特征为紫草经溶剂超声提取， 提取液浓缩后， 用硅胶 （SiO2） 柱分 离， 上样后的硅胶柱， 先用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:0， 体积比） 洗脱

3、， 继用 石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:8， 体积比） 洗脱， 用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油 醚-丙酮， 100:8， 体积比） 洗脱的洗脱液经回收溶剂， 干燥， 即为该提取物， 该提取物的提取 用溶剂可以为甲醇、 石油醚、 水、 丙酮、 氯仿、 乙酸乙酯、 甲醇水混合溶剂、 乙醇水混合溶剂。 2.一种紫草提取物， 其特征为紫草经溶剂超声提取， 提取液浓缩后， 用硅胶 （SiO2） 柱分 离， 上样后的硅胶柱， 先用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:10， 体积比） 洗脱， 继用 石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:100， 体积比） 洗脱， 用石

4、油醚-丙酮混合溶剂 （石 油醚-丙酮， 100:100， 体积比） 洗脱的洗脱液经回收溶剂， 干燥， 即为该提取物， 该提取物的 提取用溶剂可以为甲醇、 石油醚、 水、 丙酮、 氯仿、 乙酸乙酯、 甲醇水混合溶剂、 乙醇水混合溶 剂。 3.权利要求1所述紫草提取物， 其特征为紫草经溶剂超声提取， 提取液浓缩后， 用硅胶 柱分离， 上样后的硅胶柱， 先用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:0， 体积比） 洗脱， 洗脱2-50倍柱体积， 继用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:8， 体积比） 洗脱， 洗脱2- 50倍柱体积， 用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100

5、:8， 体积比） 洗脱的洗脱液经回收 有机溶剂， 干燥， 即为该提取物。 4.权利要求2所述紫草提取物， 其特征为紫草经溶剂超声提取， 提取液浓缩后， 用硅胶 柱分离， 上样后的硅胶柱， 先用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:10， 体积比） 洗脱， 洗脱2-50倍柱体积， 继用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:100， 体积比） 洗脱， 洗脱 2-50倍柱体积， 用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:100， 体积比） 洗脱的洗脱液经 回收有机溶剂， 干燥， 即为该提取物。 5.权利要求1和权利要求2所述紫草提取物的医药用途， 其特征为紫草提取物具备-

6、葡 萄糖苷酶抑制活性， 可用于降血糖、 减肥、 降血脂、 治疗糖尿病等方面的医药用途。 6.权利要求1所述提取物的制备方法， 其特征为： 紫草经溶剂超声提取， 提取液浓缩后， 用硅胶柱分离， 上样后的硅胶柱， 先用石油醚-丙 酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:0， 体积比） 洗脱2-50倍柱体积， 继用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:8， 体积比） 洗脱2-50倍柱体积， 用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:8， 体积比） 洗脱的洗脱液经回收有机溶剂， 干燥， 即为该提取物。 以上条件最优为先用 石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:0， 体积比）

7、洗脱10倍柱体积， 继用石油醚-丙酮混 合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:8， 体积比） 洗脱20倍柱体积。 7.权利要求2所述提取物的制备方法， 其特征为： 紫草经溶剂超声提取， 提取液浓缩后， 用硅胶柱分离， 上样后的硅胶柱， 先用石油醚-丙 酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:10， 体积比） 洗脱2-50倍柱体积， 继用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:100， 体积比） 洗脱2-50倍柱体积， 用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙 酮， 100:100， 体积比） 洗脱的洗脱液经回收有机溶剂， 干燥， 即为该提取物。 以上条件最优为 先用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚

8、-丙酮， 100:10， 体积比） 洗脱10倍柱体积， 继用石油醚- 丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:100， 体积比） 洗脱20倍柱体积。 其中， 具体试验条件如下： 1) 提取物提取用溶剂可以为甲醇、 石油醚、 水、 丙酮、 氯仿、 乙酸乙酯、 甲醇水混合溶 权 利 要 求 书 1/2 页 2 CN 107412311 A 2 剂、 乙醇水混合溶剂， 最优条件为甲醇和95%乙醇。 提取物提取用溶剂用量为药材重量的2- 50倍 （重量/体积比） 。 2) 提取物干燥方法可以为真空干燥法、 冷冻干燥法、 鼓风干燥、 离心干燥、 旋蒸干燥法 等， 最优为真空干燥法、 冷冻干燥法。 8.权

9、利要求1和权利要求2中所述紫草提取物的组合物， 其特征为将其加入各种药用辅 料制备， 如环糊精包合物， 固体分散体等水难溶性药物的制备方法制备得到。 制备得到的组 合物， 具有分散剂量、 分散度提高， 或者可以增加生物利用度， 提高生物疗效。 9.权利要求8一种紫草提取物组合物的检测方法用TLC法， 其色谱条件为： GF254硅胶板， 展开系统： 石油醚： 乙酸乙酯： 丙酮=6:1:1， 石油醚： 乙酸乙酯： 丙酮=1:1:1， 显色方法： 香草 醛浓硫酸显色。 权 利 要 求 书 2/2 页 3 CN 107412311 A 3 紫草 -糖苷酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备 方法

10、技术领域 0001 本发明属医药技术领域， 具体涉及一种紫草 -糖苷酶抑制活性提取物及其组合物 的医药用途和制备方法以及它在降血糖、 减肥、 降血脂、 治疗糖尿病等方面的医药用途。 背景技术 0002 技术背景 紫草Lithospermum erythrorhizon为紫草科植物的干燥根， 主产于辽宁、 湖南、 河北、 新疆等地。 春、 秋二季采挖， 除去泥沙， 干燥。 生用。 新疆紫草 （软紫草） 呈不规则的长圆柱形， 多扭曲； 内蒙紫草呈圆锥形或圆柱形， 扭曲。 紫草是一种中药材， 性味甘、 咸， 具有清热凉血、 活血、 解毒透疹等功效。 0003 本品煎剂、 紫草素、 二甲基戊烯酰紫草素

11、、 二甲基丙烯酰紫草素对金黄色葡萄球 菌、 大肠杆菌、 枯草杆菌等具有抑制作用； 紫草素对大肠杆菌、 伤寒杆菌、 痢疾杆菌、 绿脓杆 菌及金黄色葡萄球菌均有明显抑制作用； 其乙醚、 水、 乙醇提取物均有一定的抗炎作用； 新 疆产紫草根煎剂对心脏有明显的兴奋作用； 新疆紫草中提取的紫草素及石油醚部分有抗肿 瘤作用； 本品有抗生育、 解热等作用。 0004 本发明通过大规模、 系统地活性筛选， 意外地发现维吾尔药紫草提取物及其部分 化学组分， 具有显著地 -糖苷酶抑制活性， 该活性提取物及其组合物有望应用于降血糖、 减 肥、 降血脂、 糖尿病等方面。 发明内容 0005 维吾尔药紫草经甲醇超声提取

12、， 提取液浓缩后， 用硅胶 （SiO2） 柱分离， 上样后的硅 胶柱， 用石油醚-丙酮混合溶剂梯度洗脱 （石油醚-丙酮， 比例见表1） ， 各石油醚-丙酮比例混 合溶剂洗脱液， 浓缩， 干燥后， 利用体外筛选体系测试其 -糖苷酶抑制活性， 意外地发现先 用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:0， 体积比） 洗脱， 继用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:8， 体积比） 洗脱得到的石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:8， 体 积比） 洗脱液经回收有机溶剂， 干燥， 即为 -糖苷酶抑制活性提取物。 而其他比例的洗脱部 位， 没有 -糖苷酶抑制活性的作用。 即，

13、-糖苷酶抑制活性的提取物， 可以通过以上方法得 到富集， 从而与其他杂质类成分分离开。 该紫草 -糖苷酶抑制活性提取物从未见文献报道， 其薄层谱色谱 （TLC） 分析表征如图1， TLC分析条件： GF254硅胶板， 展开系统： 石油醚： 乙酸乙 酯： 丙酮 （6:1:1） 显色方法： 香草醛-硫酸显色。 0006 维吾尔药紫草经甲醇超声提取， 提取液浓缩后， 用硅胶 （SiO2） 柱分离， 上样后的硅 胶柱， 用石油醚-丙酮混合溶剂梯度洗脱 （石油醚-丙酮， 比例见表1） ， 各石油醚-丙酮比例混 合溶剂洗脱液， 浓缩， 干燥后， 利用体外筛选体系测试其 -糖苷酶抑制活性， 意外地发现先 用

14、石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:10， 体积比） 洗脱， 继用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:100， 体积比） 洗脱得到的石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100: 说 明 书 1/8 页 4 CN 107412311 A 4 100， 体积比） 洗脱液经回收有机溶剂， 干燥， 即为 -糖苷酶抑制活性提取物。 而其他比例的 洗脱部位， 没有 -糖苷酶抑制活性的作用。 即， -糖苷酶抑制活性的提取物， 可以通过以上 方法得到富集， 从而与其他杂质类成分分离开。 该紫草 -糖苷酶抑制活性提取物从未见文 献报道， 其薄层谱色谱 （TLC） 分析表征如图2， T

15、LC分析条件： GF254硅胶板， 展开系统： 石油 醚： 乙酸乙酯： 丙酮 （1:1:1） 显色方法： 香草醛-硫酸显色。 0007 具体， 发现过程如下： 1、 紫草经甲醇超声提取物的制备 取维吾尔药紫草20 g， 经100 mL甲醇超声提取15 min， 提取液浓缩后， 得提取物 SN0128A， 样品： 0.7677g， 留样： 0.0259g， 上样量： 0.6856g， 拌样硅胶0.7g， 空白硅胶5g， 石油 醚-丙酮系统洗脱。 0008 2、 石油醚-丙酮混合溶剂梯度洗脱方法和结果 取维吾尔药紫草20 g， 经100 mL甲醇超声提取15 min， 提取液浓缩后， 得提取物 S

16、N0128A， 0.7677g， 上柱， 甲醇溶解， 共用甲醇15 mL。 上硅胶柱色谱， 拌样硅胶0.7 g， 空白 硅胶5 g， 玻璃柱内径1.5 cm， 石油醚-丙酮系统梯度洗脱 （条件见表1） ， 每个梯度洗脱 100mL， 得到， 各个浓度提取洗脱液的洗脱物， 回收溶剂， 即得， 石油醚： 丙酮梯度洗脱提取 物， TLC分析结果见图3， TLC分析条件： GF254硅胶板， 展开系统： 石油醚： 乙酸乙酯： 丙酮 （6: 1:1） ， 石油醚： 乙酸乙酯： 丙酮 （1:1:1） ， 显色方法： 香草醛-硫酸显色。 表1 3、 抑制 -糖苷酶活性筛选方法和结果 1)实验条件 说 明 书

17、 2/8 页 5 CN 107412311 A 5 a、 材料： DMSO(二甲基亚砜) (科密欧公司)； KH2PO4、 K2HPO43H2O(广东汕头市西陇化 工厂)；-glucosidase酶(美国Sigma公司)； PNPG(美国Sigma公司) b、 实验仪器： 多功能酶标仪Bio-Rad Model 680型(Bio-Rad Laboratories Inc.) 2)实验方法和过程 样品处理： 将1 mg待测样品溶于20 L二甲基亚砜(DMSO)作为母液， 取1 L母液加入99 L缓冲盐配成500 gmL-1的样品溶液。 0009 在96孔板中依次加入-glucosidase酶PB

18、S溶液20 L使其终浓度为0.07 u/mL， 样 品浓度为500 gmL-1的PBS溶液10 L。 冰浴5分钟， 加入底物PBS溶液20 L使其终浓度为 2.5 mmol/l， 用浓度为0.1 M、 pH 6.84的PBS溶液补足体积为100 L。 加过样的96孔板在37 水浴30分钟。 于405 nm处测定反应物的吸光度， 并以阿卡波糖作为阳性对照。 样品抑制- glucosidase酶活性比率用加样品较空白对照的OD值的比值来表示。 样品抑制百分率按以 下公式计算: 酶活性抑制率% = A空 白- (A样 品- A背 景) / A空 白 100 式中A空 白： 不加样品反应后的吸收值；

19、A样 品： 加入样品反应后的吸收值； A背 景： 只加样品的吸收值。 0010 3)实验结果 表2 说 明 书 3/8 页 6 CN 107412311 A 6 结果发现： 维吾尔药紫草经有机溶剂超声提取， 提取液浓缩后， 用硅胶柱分离， 上样后的硅胶柱， 先用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:0， 体积比） 洗脱， 继用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:8， 体积比） 洗脱， 用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:8， 体积 比） 洗脱的洗脱液经回收有机溶剂， 干燥， 即为该提取物， 即为该 -糖苷酶抑制活性提取物。 该 -糖苷酶抑制活性提取物从未见文

20、献报道， 其TLC分析表征如图1。 0011 维吾尔药紫草经有机溶剂超声提取， 提取液浓缩后， 用硅胶柱分离， 上样后的硅胶 柱， 先用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:10， 体积比） 洗脱， 继用石油醚-丙酮混合 溶剂 （石油醚-丙酮， 100:100， 体积比） 洗脱， 用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100: 100， 体积比） 洗脱的洗脱液经回收有机溶剂， 干燥， 即为该提取物， 即为该 -糖苷酶抑制活 性提取物。 该 -糖苷酶抑制活性提取物从未见文献报道， 其TLC分析表征如图2。 0012 具体， 发现过程如下： 4、 -糖苷酶抑制活性有效提取物的提取方法

21、研究 1） 提取溶剂的种类研究 分别用甲醇、 丙酮、 石油醚、 氯仿、 乙酸乙酯、 甲醇水混合溶剂、 乙醇水混合溶剂等有机 溶剂提取， 并测试提取物的 -糖苷酶抑制活性， 实验结果如下： 表3 研究结果表明： 提取用有机溶剂可以为甲醇、 石油醚、 丙酮、 氯仿、 乙酸乙酯、 甲醇水混 合溶剂、 乙醇水混合溶剂。 0013 2） 提取溶剂的用量研究 分别用1、 2、 5、 10、 20、 30、 40、 50倍 （重量/体积比） 有机溶剂提取， 并测试提取物的 -糖 苷酶抑制活性， 结果如下： 表4 说 明 书 4/8 页 7 CN 107412311 A 7 活性提取物的提取所用有机溶剂用量为

22、药材重量的2-50倍 （重量/体积比） 。 0014 3） 干燥方法的研究 分别用真空干燥法、 冷冻干燥法、 鼓风干燥、 离心干燥、 旋蒸干燥法等方法， 对得到的抑 制 -糖苷酶活性提取物进行干燥， 以含水量、 TLC、 活性测试为指标， 发现真空干燥法、 冷冻 干燥法、 鼓风干燥、 离心干燥、 旋蒸干燥法适用于对 -糖苷酶抑制活性提取物进行干燥， 其 中， 最优为真空干燥法、 冷冻干燥法。 0015 表5 干燥方法真空干燥法冷冻干燥法鼓风干燥法离心干燥法旋蒸干燥法 含水量(%)6.66.34.53.25.4 抑制率(%)78.176.672.271.575.2 因此， 紫草 -糖苷酶抑制活性

23、提取物的制备方法为： 维吾尔药紫草经有机溶剂超声提取， 提取液浓缩后， 用硅胶柱分离， 上样后的硅胶柱， 先用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:0， 体积比） 洗脱， 洗脱2-50倍柱体积， 继用石 油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:8， 体积比） 洗脱， 洗脱2-50倍柱体积， 用石油醚-丙 酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:8， 体积比） 洗脱的洗脱液经回收有机溶剂， 干燥， 即为该活 性提取物。 以上条件最优为先用石油醚： 丙酮混合溶剂 （石油醚： 丙酮， 100:0， 体积比） 洗脱 10倍柱体积， 继用石油醚： 丙酮混合溶剂 （石油醚： 丙酮， 100:

24、8， 体积比） 洗脱20倍柱体积。 0016 维吾尔药紫草经有机溶剂超声提取， 提取液浓缩后， 用硅胶柱分离， 上样后的硅胶 柱， 先用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:10， 体积比） 洗脱， 洗脱2-50倍柱体积， 继 用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:100， 体积比） 洗脱， 洗脱2-50倍柱体积， 用石油 说 明 书 5/8 页 8 CN 107412311 A 8 醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:100， 体积比） 洗脱的洗脱液经回收有机溶剂， 干燥， 即 为该活性提取物。 以上条件最优为先用石油醚： 丙酮混合溶剂 （石油醚： 丙酮， 10

25、0:10， 体积 比） 洗脱10倍柱体积， 继用石油醚： 丙酮混合溶剂 （石油醚： 丙酮， 100:100， 体积比） 洗脱20倍 柱体积。 其中， 1)提取物提取用溶剂可以为甲醇、 石油醚、 水、 丙酮、 氯仿、 乙酸乙酯、 甲醇水混合溶剂、 乙醇水混合溶剂， 最优条件为甲醇和95%乙醇。 活性提取物提取用有机溶剂用量为药材重量 的2-50倍 （重量/体积比） 。 0017 2)提取物干燥方法可以为真空干燥法、 冷冻干燥法、 鼓风干燥、 离心干燥、 旋蒸干 燥法等， 最优为真空干燥法、 冷冻干燥法。 0018 5.紫草抑制 -糖苷酶活性提取物的医药用途研究 按优化的紫草 -糖苷酶抑制活性提取

26、物制备方法制备的活性提取物， 经测试， 其 -糖 苷酶抑制活性为IC50=17.4 g/mL。 0019 由于 -糖苷酶抑制剂具有降血糖、 减肥、 降血脂、 糖尿病等方面的医药用途。 因此， 我们发现的紫草 -糖苷酶抑制活性提取物具有广泛的医药用途。 0020 6、 紫草抑制 -糖苷酶活性提取物的组合物及其制备方法研究 1） 固体分散体 处方 紫草提取物 20g Vc 1g 聚乙烯吡咯烷酮 79g 固体分散100g 制备方法： 称取紫草提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮 （PVP） 按比例1:2、 1:4、 1:6的质量比分别放入 烧杯中， 加入适量的无水乙醇和Vc， 用磁力搅拌器搅拌至紫草提取物和载

27、体完全溶解， 充分 混合均匀后转入旋蒸仪中除去有机溶剂， 干燥， 粉碎过80目筛， 即得紫草有效提取物PVP包 合物。 0021 2） 环糊精包合物 处方： 紫草提取物 20g Vc 1g -环糊精 79g 包合物100g 制备方法： 将 -环糊精与 1-5 倍水研匀,加紫草有效提取物( 水难溶性的应先溶于少量有机溶 剂中) 继续充分研磨至成糊状物, 低温干燥即得环糊精包合物。 0022 3） 分散片处方: 紫草提取物 100 十二烷基硫酸钠 1 Vc 1 说 明 书 6/8 页 9 CN 107412311 A 9 预胶化淀粉 10 可溶性淀粉 100 交联聚维酮 10 微晶纤维素 9 微分

28、硅胶 0.3 滑石粉 1 100片 制备方法： 1.紫草有效提取物分散体的制备， 精密称取紫草提取物、 Vc， 加入处方量的十二烷基硫 酸钠， 用适量的浓度为70%乙醇溶解并加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后， 在70的温度 下蒸干， 粉碎， 过100目筛； 2.将第一步中的紫草有效提取物淀粉分散体与处方量的交联聚维酮， 预胶化淀粉， 用 适量的浓度为70%乙醇做湿润剂， 边加入边搅拌， 制成湿颗粒过14目筛， 室温下放置15min 后， 60烘箱烘干45min， 16目筛整粒， 加入处方量的滑石粉和微分硅胶， 混合均匀后， 压片 即得。 0023 7、 紫草抑制 -糖苷酶活性提取物的检测方法研

29、究 我们发现， 可以用薄层色谱的方法， 很好地检测和标示紫草 -糖苷酶抑制活性提取物 的特征。 见图1和图2 具体条件为： GF254硅胶板， 展开系统： 石油醚： 乙酸乙酯： 丙酮 （6:1:1） 与石油醚： 乙酸乙 酯： 丙酮 （1:1:1） 显色方法： 香草醛-硫酸显色。 0024 附图说明： 图1 紫草 -糖苷酶抑制活性提取物的TLC色谱图 图2 紫草 -糖苷酶抑制活性提取物的TLC色谱图 图3 紫草溶剂提取物的TLC色谱图 具体实例: 以下实施例表示本发明的实用性， 本发明不受此限制。 0025 实施例 1： 取维吾尔药紫草20 g， 经100 mL甲醇超声提取15 min， 提取液

30、浓缩后， 用硅胶柱分离， 上样后的硅胶柱 （1.5 cm 内径小柱） ， 先用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:0， 体 积比） 洗脱， 洗脱10倍柱体积， 继用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:8， 体积比） 洗 脱， 洗脱20倍柱体积， 用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:8， 体积比） 洗脱的洗脱液 经回收有机溶剂， 干燥， 即为该活性提取物。 收率3.9%。 0026 实施例 2： 取维吾尔药紫草20 g， 经100 mL甲醇超声提取15 min， 提取液浓缩后， 用硅胶柱分离， 上样后的硅胶柱 （1.5 cm 内径小柱） ， 先用石油醚-丙酮

31、混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:10， 体 积比） 洗脱， 洗脱10倍柱体积， 继用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:100， 体积比） 洗脱， 洗脱20倍柱体积， 用石油醚-丙酮混合溶剂 （石油醚-丙酮， 100:100， 体积比） 洗脱的洗 脱液经回收有机溶剂， 干燥， 即为该活性提取物。 收率6.9%。 0027 实施例 3： 固体分散体 说 明 书 7/8 页 10 CN 107412311 A 10 称取紫草提取物和载体聚乙烯吡咯烷酮 （PVP） 按比例1:2、 1:4、 1:6的质量比分别放入 烧杯中， 加入适量的无水乙醇和Vc， 用磁力搅拌器搅拌至紫草提取物和载

32、体完全溶解， 充分 混合均匀后转入旋蒸仪中除去有机溶剂， 干燥， 粉碎过80目筛， 即得紫草有效提取物PVP包 合物。 0028 实施例 4： 环糊精包合物 将 -环糊精与 1-5 倍水研匀,加紫草有效提取物( 水难溶性的应先溶于少量有机溶 剂中) 继续充分研磨至成糊状物, 低温干燥即得环糊精包合物。 0029 实施例5： 分散片 1.紫草有效提取物分散体的制备， 精密称取紫草提取物、 Vc， 加入处方量的十二烷基硫 酸钠， 用适量的浓度为70%乙醇溶解并加入等比例的可溶性淀粉混合均匀后， 在70的温度 下蒸干， 粉碎， 过100目筛； 2.将第一步中的紫草有效提取物淀粉分散体与处方量的交联聚维酮， 预胶化淀粉， 用 适量的浓度为70%乙醇做湿润剂， 边加入边搅拌， 制成湿颗粒过14目筛， 室温下放置15min 后， 60烘箱烘干45min， 16目筛整粒， 加入处方量的滑石粉和微分硅胶， 混合均匀后， 压片 即得。 说 明 书 8/8 页 11 CN 107412311 A 11 图 1 图 2 说 明 书 附 图 1/2 页 12 CN 107412311 A 12 图 3 说 明 书 附 图 2/2 页 13 CN 107412311 A 13