编码尿皮质素‑2和相关基因的病毒载体的全身递送以治疗糖尿病相关性心脏功能障碍和充血性心力衰竭.pdf

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201580026296.7 (22)申请日 2015.04.03 (30)优先权数据 61/974,662 2014.04.03 US (85)PCT国际申请进入国家阶段日 2016.11.17 (86)PCT国际申请的申请数据 PCT/IB2015/000771 2015.04.03 (87)PCT国际申请的公布数据 WO2015/150914 EN 2015.10.08 (71)申请人 加利福尼亚大学董事会 地址 美国加利福尼亚州 (72)发明人 HK哈蒙德 高美华 (74

2、)专利代理机构 北京安信方达知识产权代理 有限公司 11262 代理人 陈建芳 阎娬斌 (51)Int.Cl. A61K 48/00(2006.01) (54)发明名称 编码尿皮质素-2和相关基因的病毒载体的 全身递送以治疗糖尿病相关性心脏功能障碍和 充血性心力衰竭 (57)摘要 在替代性实施方案中， 提供了用于治疗、 改 善或防止(预防)充血性心力衰竭(CHF)或糖尿病 相关性心脏功能障碍的方法， 其包括： 提供编码 尿皮质素2和/或编码尿皮质素3的核酸、 转录物 或信使或基因， 其操作性地连接到转录调节序 列， 任选地含于表达运载体或载体如腺相关病毒 (AAV)， 例如AAV8血清型中；

3、和例如通过静脉内施 用向有需要的个体或患者如2型糖尿病(T2DM)患 者施用， 从而治疗、 改善或防止(预防)所述个体 或患者的所述T2DM和/或所述糖尿病相关性心脏 功能障碍。 权利要求书6页 说明书39页 序列表8页 附图9页 CN 106456803 A 2017.02.22 CN 106456803 A 1.一种用于在个体或患者中治疗、 改善或防止(预防)、 减缓其进程或逆转： 充血性心力 衰竭(CHF)； 2型糖尿病(T2DM)和充血性心力衰竭(CHF)； 或2型糖尿病(T2DM)中的糖尿病相 关性心脏功能障碍的方法， 所述方法包括： (a)(i)提供操作性地连接到转录调节序列的编码

4、尿皮质素2和/或尿皮质素3多肽的核 酸或基因； 或其中已含有编码尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸或基因、 或表达尿皮质素2 和/或尿皮质素3多肽的核酸、 转录物或信使的表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物， 并且 所述表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物能够在细胞中或体内表达所述编码尿皮质素2 和/或尿皮质素3的核酸、 基因、 转录物或信使； 和 (ii)向所述细胞、 或有需要的个体或患者施用或递送操作性地连接到转录调节序列的 所述编码尿皮质素2和/或尿皮质素3多肽的核酸、 基因、 转录物或信使、 或所述表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物， 从而在所述个体或患者中治疗、 改善或防止(预

5、防)所述充血性心力衰竭(CHF)； 所述2 型糖尿病(T2DM)和充血性心力衰竭(CHF)； 或2型糖尿病(T2DM)中的所述糖尿病相关性心脏 功能障碍， (b)(a)的方法， 其中所述表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物是或包括： 腺相关病毒(AAV)、 慢病毒载体或腺病毒载体， AAV血清型AAV5、 AAV6、 AAV8或AAV9， 来源于恒河猴的AAV或来源于恒河猴的AAV AAVrh.10hCLN2， AAV衣壳突变体或AAV杂合体血清型， 嗜器官性AAV， 任选地嗜肝性AAV或嗜骨骼肌性AAV， 其中任选地所述AAV被工程化以增加靶向对野生型(wt)AAV非受纳的特定细胞类型的

6、效率和/或改进仅感染目标细胞类型的功效， 并且任选地所述杂合体AAV通过一种或多种修饰被重新定向或工程化为杂合体血清 型， 所述一种或多种修饰包括： 1)衣壳转移、 2)双特异性抗体吸附至衣壳表面、 3)将镶嵌型 衣壳工程化、 和/或4)将嵌合衣壳工程化； (c)(a)的方法， 其中所述编码尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸、 基因、 转录物或信使 操作性地连接到受调节的或可诱导的转录调节序列； (d)(c)的方法， 其中所述受调节的或可诱导的转录调节序列是受调节的或可诱导的启 动子， 其中任选地， 转录和/或翻译的正调控物(激活子)和/或负调控物(阻遏子)可操作地连 接到所述编码尿皮质素2/或

7、尿皮质素3多肽的核酸、 基因、 转录物或信使； (e)(a)到(d)中任一项的方法， 其中向有需要的个体或患者施用操作性地连接到转录 调节序列的所述编码尿皮质素2和/或尿皮质素3多肽的核酸、 基因、 转录物或信使、 或所述 表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物导致尿皮质素2和/或尿皮质素3蛋白质被释放到血流 或周身循环中， 或所述尿皮质素2和/或尿皮质素3蛋白质在所述细胞中的增加或持续的表 达， 其中任选地， 所述尿皮质素2和/或尿皮质素3蛋白质的所述释放、 或增加或持续的表达 依赖于可诱导的启动子的激活或阻遏子的去阻遏， 所述可诱导的启动子或阻遏子可操作地 权 利 要 求 书 1/6 页

8、2 CN 106456803 A 2 连接到所述编码尿皮质素2和/或尿皮质素3多肽的核酸、 基因、 转录物或信使； 或 (f)(a)到(e)中任一项的方法， 其中对体内增加的尿皮质素2和/或尿皮质素3多肽水平 有响应的疾病或病况是心脏收缩功能障碍； 充血性心力衰竭(CHF)； 心脏纤维化； 心肌细胞 疾病、 功能障碍或细胞凋亡； 肺动脉高压； 心脏、 皮肤、 肝脏、 肺、 肌肉、 神经、 脑或肾脏的疾 病； 或血友病或血友病B。 2.根据权利要求1所述的方法， 其中： (a)通过口服、 肌内(IM)注射、 通过静脉内(IV)注射、 通过皮下(SC)或皮内注射、 通过鞘 内注射、 通过动脉内(I

9、A)注射、 通过冠状动脉内注射、 通过吸入、 通过气溶胶或通过生物弹 射击粒子递送系统或通过使用 “基因枪” 、 气手枪或HELIOS基因枪(Bio-Rad Laboratories, Hercules,CA)， 向所述有需要的个体或患者施用或递送操作性地连接到所述转录调节序列 的所述编码尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸或基因； 或所述表达运载体、 载体、 重组病毒 或等同物； 或 (b)通过引入到身体内邻接血流或被血流排放的任何组织或流体空间中， 向所述有需 要的个体或患者施用或递送操作性地连接到所述转录调节序列的所述编码尿皮质素2和/ 或尿皮质素3的核酸或基因； 或所述表达运载体、 载体、

10、 重组病毒或等同物， 使得被编码的蛋 白质可以从所述组织中的细胞被分泌并释放到所述血流中。 3.根据权利要求1或2所述的方法， 其中： (a)向所述个体、 患者或受试者施用刺激或信号， 所述刺激或信号诱导所述表达尿皮质 素2和/或尿皮质素3的核酸或基因的表达， 或诱导或激活诱导所述表达尿皮质素2和/或尿 皮质素3的核酸或基因的表达的启动子(例如， 可操作地连接到所述表达尿皮质素2和/或尿 皮质素3的核酸或基因)； (b)向所述个体、 患者或受试者施用刺激或信号， 所述刺激或信号诱导启动子的激活子 的合成， 任选地， 所述启动子为表达尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸或基因特异性启动子 (例如，

11、可操作地连接到所述表达尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸或基因)； (c)向所述个体、 患者或受试者施用刺激或信号， 所述刺激或信号诱导所述表达尿皮质 素2和/或尿皮质素3的核酸或基因的天然激活子或合成激活子的合成或诱导所述表达尿皮 质素2和/或尿皮质素3的核酸或基因特异性启动子的天然激活子或合成激活子的合成， 其中任选地， 所述天然激活子是内源性转录因子； (d)(c)的方法， 其中所述合成激活子是被设计成特异性地且选择性地开启内源性或外 源性靶基因的锌指DNA结合蛋白质， 其中任选地， 所述内源性靶是基因表达尿皮质素2和/或 尿皮质素3的核酸或基因、 或表达尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸或

12、基因的激活子、 或操 作性地连接到表达尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸或基因的启动子的激活子； (e)(a)到(c)中任一项的方法， 其中所述刺激或信号包括生物刺激或信号、 光刺激或信 号、 化学剂刺激或信号或药物刺激或信号； (f)向所述个体、 患者或受试者施用刺激或信号， 所述刺激或信号刺激或诱导表达尿皮 质素2和/或尿皮质素3的核酸或基因的转录后激活子的表达、 或操作性地连接到表达尿皮 质素2和/或尿皮质素3的核酸或基因的启动子的激活子的表达， 或 (g)向所述个体、 患者或受试者施用刺激或信号， 所述刺激或信号抑制表达尿皮质素2 和/或尿皮质素3的核酸或基因的转录阻遏物或转录后阻遏物、

13、 或诱导对表达尿皮质素2和/ 权 利 要 求 书 2/6 页 3 CN 106456803 A 3 或尿皮质素3的核酸或基因的转录阻遏物或转录后阻遏物的抑制。 4.根据权利要求5所述的方法， 其中诱导所述表达尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸或 基因的表达或诱导操作性地连接到所述表达尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸或基因的所 述受调节的或可诱导的启动子的表达的所述化学剂或药物是口服抗生素、 强力霉素或雷帕 霉素； 或使用利用强力霉素的tet-调节系统来诱导所述表达尿皮质素2和/或尿皮质素3的 核酸或基因或其等同物的表达。 5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法， 其中所述表达尿皮质素2和/或尿

14、皮质素3的 核酸或基因或所述表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物被配制在液体中、 凝胶中、 水凝胶 中、 粉末中或水性或盐水制剂中。 6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法， 其中所述表达尿皮质素2和/或尿皮质素3的 核酸或基因或所述表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物被配制在囊泡中、 脂质体中、 纳米 粒子中或纳米脂质粒子(NLP)中。 7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法， 其中所述表达尿皮质素2和/或尿皮质素3的 核酸或基因或所述表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物被配制在分离的或培养的细胞中， 并且任选地所述细胞是哺乳动物细胞、 心细胞、 或人细胞、 非人灵长类动物细胞、

15、猴细胞、 小 鼠细胞、 大鼠细胞、 豚鼠细胞、 兔细胞、 仓鼠细胞、 山羊细胞、 牛科动物细胞、 马科动物细胞、 绵羊细胞、 犬科动物细胞或猫科动物细胞。 8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法， 其中所述表达尿皮质素2和/或尿皮质素3的 核酸或基因或所述表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物被配制为药物或无菌的。 9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法， 其中所述表达尿皮质素2和/或尿皮质素3的 核酸或基因或所述表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物与制品、 人工器官或植入物被配制 或递送， 在制品、 人工器官或植入物上被配制或递送， 或结合制品、 人工器官或植入物被配 制或递送。 10

16、.根据权利要求1-9中任一项所述的方法， 其中所述表达尿皮质素2和/或尿皮质素3 的核酸或基因或所述表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物在体外或离体表达尿皮质素2 和/或尿皮质素3。 11.一种用于针对尿皮质素2和/或尿皮质素3响应性病理、 疾病、 病痛或病况治疗、 改善 或防止(预防)个体或患者的方法， 其包括实施根据权利要求1-10中任一项所述的方法。 12.一种用于治疗、 改善或防止(预防)糖尿病相关性心脏收缩功能障碍； 糖尿病相关性 充血性心力衰竭(CHF)； 糖尿病相关性心脏纤维化； 糖尿病相关性心肌细胞疾病、 功能障碍 或细胞凋亡； 糖尿病相关性肺动脉高压的的方法， 其包括实施根

17、据权利要求1-11中任一项 所述的方法。 13.一种治疗、 改善或防止(预防)患者或个体的糖尿病或糖尿病前期的方法， 其包括： (a)实施根据权利要求1-11中任一项所述的方法； 或 (b)向有需要的个体或患者施用尿皮质素2和/或尿皮质素3肽或多肽， 或编码尿皮质素 2和/或尿皮质素3的核酸、 基因、 信使或转录物， 其中任选地， 所述尿皮质素2和/或尿皮质素3肽或多肽是分离的、 重组的、 合成的和/或 拟肽的肽或多肽或其变体， 从而治疗、 改善或防止(预防)所述患者或个体的所述糖尿病或糖尿病前期。 权 利 要 求 书 3/6 页 4 CN 106456803 A 4 14.一种治疗、 改善或

18、防止(预防)患者或个体的肥胖症的方法， 其包括： (a)实施根据权利要求1-11中任一项所述的方法， 或 (b)向有需要的个体或患者施用尿皮质素-2(UCn-2)肽或多肽， 或编码尿皮质素2和/或 尿皮质素3的核酸、 基因、 信使或转录物， 其中任选地， 所述尿皮质素2和/或尿皮质素3的肽或多肽是分离的、 重组的、 合成的和/ 或拟肽的肽或多肽或其变体， 从而治疗、 改善或防止(预防)所述患者或个体的所述肥胖症。 15.根据权利要求15-14中任一项所述的方法， 其中所述尿皮质素2和/或尿皮质素3尿 皮质素-2(UCn-2)的肽或多肽被配制在囊泡、 脂质体、 纳米粒子或纳米脂质粒子(NLP)中

19、或 被配制为囊泡、 脂质体、 纳米粒子或纳米脂质粒子(NLP)， 或被配制用于： 口服施用、 肌内 (IM)注射、 静脉内(IV)注射、 皮下(SC)或皮内注射、 鞘内注射、 动脉内(IA)注射、 冠状动脉内 注射、 吸入或通过气溶胶施用。 16.-操作性地连接到转录调节序列的编码尿皮质素2和/或尿皮质素3多肽的核酸或基 因； -其中已含有编码尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸或基因的表达运载体、 载体、 重组 病毒或等同物； 或 -表达尿皮质素2和/或尿皮质素3多肽的核酸、 转录物或信使， 以及能够在细胞中或体 内表达所述编码尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸、 基因、 转录物或信使的表达运载体

20、、 载 体、 重组病毒或等同物， 在制造药物中的用途， 或 所述用途是或包括： 在个体或患者中治疗、 改善或防止(预防)、 减缓其进程或逆转2型糖尿病(T2DM)和充血 性心力衰竭(CHF)， 治疗、 改善或防止(预防)、 减缓其进程或逆转心脏收缩功能障碍； 充血性心力衰竭 (CHF)； 心脏纤维化； 心肌细胞疾病、 功能障碍或细胞凋亡； 肺动脉高压； 心脏、 皮肤、 肝脏、 肺、 肌肉、 神经、 脑或肾脏的疾病； 或血友病或血友病B， 治疗、 改善或防止或预防患者或个体的糖尿病或糖尿病前期， 或 治疗、 改善或防止或预防患者或个体的肥胖症， 其中任选地， 所述表达运载体、 载体、 重组病毒或

21、等同物是或包括： 腺相关病毒(AAV)、 慢病毒载体或腺病毒载体， AAV血清型AAV5、 AAV6、 AAV8或AAV9， 来源于恒河猴的AAV或来源于恒河猴的AAV AAVrh.10hCLN2， AAV衣壳突变体或AAV杂合体血清型， 嗜器官性AAV， 任选地嗜肝性AAV或嗜骨骼肌性AAV， 其中任选地所述AAV被工程化以增加靶向对野生型(wt)AAV非受纳的特定细胞类型的 效率和/或改进仅感染目标细胞类型的功效， 并且任选地所述杂合体AAV通过一种或多种修饰被重新定向或工程化为杂合体血清 型， 所述一种或多种修饰包括： 1)衣壳转移、 2)双特异性抗体吸附至衣壳表面、 3)将镶嵌型 衣壳

22、工程化、 和/或4)将嵌合衣壳工程化； 权 利 要 求 书 4/6 页 5 CN 106456803 A 5 其中任选地， 所述编码尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸、 基因、 转录物或信使操作性 地连接到受调节的或可诱导的转录调节序列； 其中任选地， 所述受调节的或可诱导的转录调节序列是受调节的或可诱导的启动子， 其中任选地， 转录和/或翻译的正调控物(激活子)和/或负调控物(阻遏子)可操作地连 接到所述编码尿皮质素2/或尿皮质素3多肽的核酸、 基因、 转录物或信使。 17.操作性地连接到转录调节序列的编码尿皮质素2和/或尿皮质素3多肽的核酸或基 因； 或 其中已含有编码尿皮质素2和/或尿皮质

23、素3的核酸或基因的表达运载体、 载体、 重组病 毒或等同物； 或 表达尿皮质素2和/或尿皮质素3多肽的核酸、 转录物或信使， 以及能够在细胞中或体内 表达所述编码尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸、 基因、 转录物或信使的表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物， 用于制造药物， 或 用于： 在个体或患者中治疗、 改善或防止(预防)、 减缓其进程或逆转2型糖尿病(T2DM)和充血 性心力衰竭(CHF)， 治疗、 改善或防止(预防)、 减缓其进程或逆转心脏收缩功能障碍； 充血性心力衰竭 (CHF)； 心脏纤维化； 心肌细胞疾病、 功能障碍或细胞凋亡； 肺动脉高压； 心脏、 皮肤、 肝脏、 肺、 肌肉

24、、 神经、 脑或肾脏的疾病； 或血友病或血友病B， 治疗、 改善或防止或预防患者或个体的糖尿病或糖尿病前期， 或 治疗、 改善或防止或预防患者或个体的肥胖症， 包括向所述受试者的细胞或有需要的受试者提供和施用或递送： 操作性地连接到转录调节序列的编码尿皮质素2和/或尿皮质素3多肽的核酸或基因； 其中已含有编码尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸或基因的表达运载体、 载体、 重组病 毒或等同物； 或 表达尿皮质素2和/或尿皮质素3多肽的核酸、 转录物或信使， 以及能够在细胞中或体内 表达所述编码尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸、 基因、 转录物或信使的表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物； 其中任

25、选地， 所述表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物是或包括： 腺相关病毒(AAV)、 慢病毒载体或腺病毒载体， AAV血清型AAV5、 AAV6、 AAV8或AAV9， 来源于恒河猴的AAV或来源于恒河猴的AAV AAVrh.10hCLN2， AAV衣壳突变体或AAV杂合体血清型， 嗜器官性AAV， 任选地嗜肝性AAV或嗜骨骼肌性AAV， 其中任选地所述AAV被工程化以增加靶向对野生型(wt)AAV非受纳的特定细胞类型的 效率和/或改进仅感染目标细胞类型的功效， 并且任选地所述杂合体AAV通过一种或多种修饰被重新定向或工程化为杂合体血清 型， 所述一种或多种修饰包括： 1)衣壳转移、 2)双特

26、异性抗体吸附至衣壳表面、 3)将镶嵌型 衣壳工程化、 和/或4)将嵌合衣壳工程化； 权 利 要 求 书 5/6 页 6 CN 106456803 A 6 其中任选地， 所述编码尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸、 基因、 转录物或信使操作性 地连接到受调节的或可诱导的转录调节序列； 其中任选地， 所述受调节的或可诱导的转录调节序列是受调节的或可诱导的启动子， 其中任选地， 转录和/或翻译的正调控物(激活子)和/或负调控物(阻遏子)可操作地连 接到所述编码尿皮质素2/或尿皮质素3多肽的核酸、 基因、 转录物或信使。 18.一种用于在有需要的受试者或个体中治疗、 改善或防止(预防)充血性心力衰竭 (

27、CHF)、 或充血性心力衰竭(CHF)的症状的方法， 其包括： (a)向有需要的受试者或个体递送编码尿皮质素2多肽的核酸序列， 从而治疗或改善所述有需要的受试者或个体的充血性心力衰竭(CHF)； (b)(a)的方法， 其中所述核酸序列在载体中(例如， 包含于载体内)； (c)(b)的方法， 其中所述载体是病毒载体； (d)(c)的方法， 其中所述载体是腺相关病毒(AAV)； (e)(d)的方法， 其中所述AAV是血清型AAV8； (f)(a)到(e)中任一项的方法， 其中所述有需要的受试者或个体患有2型糖尿病 (T2DM)； 或 (g)(a)到(f)中任一项的方法， 其中所述核酸序列通过静脉内

28、注射(IV)或经肌内被施 用。 19.根据权利要求18所述的方法， 其中所述核酸序列在载体中(例如， 包含于载体内)。 20.根据权利要求19所述的方法， 其中所述载体是病毒载体。 21.根据权利要求20所述的方法， 其中所述载体是腺相关病毒(AAV)。 22.根据权利要求22所述的方法， 其中所述AAV是血清型AAV8。 23.根据权利要求18所述的方法， 其中所述有需要的受试者或个体患有2型糖尿病 (T2DM)。 24.根据权利要求18所述的方法， 其中所述核酸序列通过静脉内注射(IV)或经肌内被 施用。 权 利 要 求 书 6/6 页 7 CN 106456803 A 7 编码尿皮质素-

29、2和相关基因的病毒载体的全身递送以治疗糖 尿病相关性心脏功能障碍和充血性心力衰竭 0001 相关申请 0002 本申请要求2014年4月3日提交的美国临时专利申请序列号(USSN)61/974,662的 优先权的权益。 上述申请的全文出于所有目的以引用方式明确并入本文中。 0003 关于对根据联邦政府资助的研究作出的发明的权利的声明 0004 本发明是在由美国国立卫生研究院(National Institutes of Health， NIH)健康 和人类服务部(DHHS)拨款的基金号306402(HK066941)、 P01HL66941、 HL088426、 HL081741和 HL107

30、200； 以及P01HL066941-11A1； 以及退伍军人管理局功绩基金(Veteran s Administration(VA)Merit Grants)I01 BX001515和1101bBX000783的政府支持下完成的。 政府拥有本发明中的某些权利。 技术领域 0005 本发明大体上涉及细胞和分子生物学、 基因疗法和医学， 更具体地涉及用于治疗、 改善或防止(预防)患有2型糖尿病(T2DM)的、 还患有糖尿病相关性心脏功能障碍的个体或 患者的组合物和方法。 背景技术 0006 尽管有许多药物和其它疗法， 但2型糖尿病(T2DM)仍然影响数百万患者， 包括那些 患有充血性心力衰竭(C

31、HF)的患者中的35。 它是发生冠状动脉和外周动脉疾病以及因此 患上心肌梗塞、 CHF和中风的主要风险。 持续的高血糖症也独立地与异常的心脏功能有关。 最终， 胰岛素是用于治疗的中心疗法， 但增加胰岛素敏感性和保持 细胞功能的药物在早期 管理中起着关键作用。 然而， 许多口服T2DM药物在患有CHF的受试者中具有不良作用， 并且 与体重增加有关。 发明内容 0007 在替代性实施方案中， 提供了用于治疗、 改善或防止(预防)患有充血性心力衰竭 (CHF)的个体或患者、 或患有2型糖尿病(T2DM)的、 还患有糖尿病相关心脏功能障碍的个体 的方法， 其包括： 提供操作性地连接到转录调节序列的编码

32、尿皮质素2(UCn-2)、 编码尿皮质 素1(UCn-1)和/或编码尿皮质素3(UCn-3)的核酸、 转录物或信使或基因； 或其中已含有操作 性地连接到转录调节序列的编码尿皮质素2和/或编码尿皮质素3的核酸、 转录物或信使或 基因的表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物， 并且所述表达运载体、 载体、 重组病毒或等同 物可以在细胞中或体内表达所述编码尿皮质素2和/或编码尿皮质素3的核酸、 基因、 转录物 或信使； 以及向有需要的个体或患者施用或递送操作性地连接到转录调节序列的所述编码 尿皮质素2和/或编码尿皮质素3的核酸、 基因、 转录物或信使、 或所述表达运载体、 载体、 重 组病毒或等同物

33、， 从而治疗、 改善或防止(预防)所述个体或患者的所述2型糖尿病和糖尿病 相关性心脏功能障碍。 提供了组合物以及体外和离体方法。 说 明 书 1/39 页 8 CN 106456803 A 8 0008 在替代性实施方案中， 提供了用于治疗、 改善或防止(预防)、 减缓其进程、 或逆转 患有 0009 充血性心力衰竭(CHF)； 0010 2型糖尿病(T2DM)和充血性心力衰竭(CHF)的个体或患者； 和/或 0011 患有2型糖尿病和糖尿病相关性心脏功能障碍的个体或患者的方法。 0012 在替代性实施方案中， 提供了用于在个体或患者中治疗、 改善或防止(预防)、 减缓 其进程或逆转充血性心力

34、衰竭(CHF)； 2型糖尿病(T2DM)和充血性心力衰竭(CHF)； 或2型糖 尿病和糖尿病相关性心脏功能障碍的方法； 其包括： 0013 (a)(i)提供操作性地连接到转录调节序列的编码尿皮质素2和/或尿皮质素3多肽 的核酸或基因； 或其中已含有编码尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸或基因、 或表达尿皮质 素2和/或尿皮质素3多肽的核酸、 转录物或信使的表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物， 并 且所述表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物可以在细胞中或体内表达所述编码尿皮质素2 和/或尿皮质素3的核酸、 基因、 转录物或信使； 和 0014 (ii)向所述细胞、 或有需要的个体或患者施用或

35、递送操作性地连接到转录调节序 列的所述编码尿皮质素2和/或尿皮质素3多肽的核酸、 基因、 转录物或信使、 或所述表达运 载体、 载体、 重组病毒或等同物， 0015 从而在所述个体或患者中治疗、 改善或防止(预防)、 减缓其进程或逆转： 所述充血 性心力衰竭(CHF)； 所述2型糖尿病(T2DM)和充血性心力衰竭(CHF)； 或所述2型糖尿病和糖 尿病相关性心脏功能障碍， 或从而针对所述2型糖尿病和/或相关的心脏疾病(糖尿病相关 性心脏功能障碍)治疗、 改善(包括减缓其进程)、 逆转或防止(预防)所述个体或患者； 0016 (b)(a)的方法， 其中所述表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物是

36、或包括： 0017 腺相关病毒(AAV)、 慢病毒载体或腺病毒载体， 0018 AAV血清型AAV5、 AAV6、 AAV8或AAV9， 0019 来源于恒河猴的AAV或来源于恒河猴的AAV AAVrh.10hCLN2， 0020 AAV衣壳突变体或AAV杂合体血清型， 0021 嗜器官性AAV突变体， 任选地嗜肝性AAV或嗜骨骼肌性AAV突变体， 0022 其中任选地所述AAV被工程化以增加靶向对野生型(wt)AAV非受纳的特定细胞类 型的效率和/或改进仅感染目标细胞类型的功效， 0023 并且任选地所述杂合体AAV通过一种或多种修饰被重新定向或工程化为杂合体血 清型， 所述一种或多种修饰包

37、括： 1)衣壳转移、 2)双特异性抗体吸附至衣壳表面、 3)将镶嵌 型衣壳工程化、 和/或4)将嵌合衣壳工程化； 0024 (c)(a)的方法， 其中所述编码尿皮质素2和/或编码尿皮质素3的核酸、 基因、 转录 物或信使操作性地连接到受调节的或可诱导的转录调节序列； 0025 (d)(c)的方法， 其中所述受调节的或可诱导的转录调节序列是受调节的或可诱导 的启动子， 0026 其中任选地， 转录和/或翻译的正调控物(激活子)和/或负调控物(阻遏子)可操作 地连接到所述编码尿皮质素2、 尿皮质素1和/或尿皮质素3多肽的核酸、 基因、 转录物或信 使； 0027 (e)(a)到(d)中任一项的方法

38、， 其中向有需要的个体或患者施用操作性地连接到 说 明 书 2/39 页 9 CN 106456803 A 9 转录调节序列的所述编码尿皮质素2、 尿皮质素1和/或尿皮质素3多肽的核酸、 基因、 转录物 或信使、 或所述表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物导致尿皮质素2和/或尿皮质素3蛋白 质被释放到血流或周身循环中， 或所述尿皮质素2和/或尿皮质素3蛋白质在所述细胞中的 增加或持续的表达， 0028 其中任选地， 所述尿皮质素2和/或尿皮质素3蛋白质的释放、 或增加或持续的表达 依赖于可诱导的启动子的激活或阻遏子的去阻遏， 所述可诱导的启动子或阻遏子可操作地 连接到所述编码尿皮质素2和/或

39、尿皮质素3多肽的核酸、 基因、 转录物或信使； 或 0029 (f)(a)到(e)中任一项的方法， 其中所述3型糖尿病和糖尿病相关性心脏功能障碍 在临床上对体内增加的尿皮质素2和/或尿皮质素3多肽水平有响应， 并且任选地治疗、 改 善、 改进或预防心脏收缩功能障碍或充血性心力衰竭(CHF)。 0030 在本发明的示例性方法的替代性实施方案中： 0031 (a)通过口服、 肌内(IM)注射、 通过静脉内(IV)注射、 通过皮下(SC)或皮内注射、 通 过鞘内注射、 通过动脉内(IA)注射、 通过冠状动脉内注射、 通过吸入或通过生物弹射击 (biolistic)粒子递送系统或通过使用 “基因枪”

40、、 气手枪或HELIOS基因枪(Bio-Rad Laboratories,Hercules,CA)， 向有需要的所述个体或患者施用或递送操作性地连接到所 述转录调节序列的所述尿皮质素2和/或尿皮质素3核酸、 转录物或基因； 或所述表达运载 体、 载体、 重组病毒或等同物； 或 0032 (b)通过引入到身体内邻接血流或被血流排放的任何组织或流体空间中， 向有需 要的所述个体或患者施用或递送操作性地连接到所述转录调节序列的所述编码尿皮质素2 和/或尿皮质素3的核酸、 转录物或基因； 或所述表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物， 使得 被编码的蛋白质可以从所述组织中的细胞被分泌并释放到所述血流中

41、。 0033 在替代性实施方案中， 所述方法进一步包括施用或共同施用编码以下的核酸、 转 录物或基因： 哺乳动物强心肽、 生长因子、 重组人松弛素-2(Serelaxin)、 松弛素-2、 脑利钠 肽、 前列环素合酶、 生长激素、 胰岛素样生长因子-1或其任何组合； 或人强心肽、 人生长因 子、 重组人松弛素-2、 松弛素-2、 脑利钠肽、 前列环素合酶、 生长激素、 胰岛素样生长因子-11 或其任何组合。 0034 在本发明的方法的替代性实施方案中： 0035 (a)向所述个体、 患者或受试者施用刺激或信号， 所述刺激或信号诱导所述表达尿 皮质素2和/或尿皮质素3的核酸、 转录物或基因的表达

42、， 或诱导或激活诱导所述表达尿皮质 素2和/或尿皮质素3的核酸、 转录物或基因的表达的启动子(例如， 可操作地连接到所述表 达尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸、 转录物或基因)； 0036 (b)向所述个体、 患者或受试者施用刺激或信号， 所述刺激或信号诱导启动子的激 活子的合成， 任选地， 所述启动子为表达尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸或基因特异性启 动子(例如， 可操作地连接到所述表达尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸或基因)； 0037 (c)向所述个体、 患者或受试者施用刺激或信号， 所述刺激或信号诱导所述表达尿 皮质素2和/或尿皮质素3的核酸或基因或所述表达尿皮质素2和/或尿皮质素3

43、的核酸或基 因特异性启动子的天然激活子或合成激活子的合成， 0038 其中任选地， 所述天然激活子是内源性转录因子； 0039 (d)(c)的方法， 其中所述合成激活子是被设计成特异性地且选择性地开启内源性 说 明 书 3/39 页 10 CN 106456803 A 10 或外源性尿皮质素2和/或尿皮质素3靶基因的锌指DNA结合蛋白质， 其中任选地， 所述内源 性靶标是尿皮质素2和/或尿皮质素3核酸或基因、 或尿皮质素2和/或尿皮质素3核酸或基因 的激活子、 或操作性地连接到表达尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸或基因的启动子的激 活子； 0040 (e)(a)到(c)中任一项的方法， 其中所

44、述刺激或信号包括生物刺激或信号、 光刺激 或信号、 化学剂刺激或信号或药物刺激或信号； 0041 (f)向所述个体、 患者或受试者施用刺激或信号， 所述刺激或信号刺激或诱导表达 尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸或基因的转录后激活子的表达、 或操作性地连接到表达 尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸或基因的启动子的激活子的表达， 或 0042 (g)向所述个体、 患者或受试者施用刺激或信号， 所述刺激或信号抑制表达尿皮质 素2和/或尿皮质素3的核酸或基因的转录阻遏物或转录后阻遏物、 或诱导对表达尿皮质素2 和/或尿皮质素3的核酸或基因的转录阻遏物或转录后阻遏物的抑制。 0043 在本发明的方法的替代

45、性实施方案中： 诱导所述表达尿皮质素2和/或尿皮质素3 的核酸或基因的表达或诱导操作性地连接到所述表达尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸或 基因的所述受调节的或可诱导的启动子的表达的所述化学剂或药物是口服抗生素、 强力霉 素(doxycycline)或雷帕霉素(rapamycin)； 或使用利用强力霉素的tet-调节系统来诱导所 述编码尿皮质素2和/或表达尿皮质素3的核酸或基因或其等同物的表达。 0044 在本发明的方法的替代性实施方案中： 所述编码尿皮质素2和/或表达尿皮质素3 的核酸或基因或所述表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物被配制在液体、 凝胶、 水凝胶、 粉 末或水性制剂中。 00

46、45 在本发明的方法的替代性实施方案中： 所述表达尿皮质素2和/或尿皮质素3的核 酸或基因或所述表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物、 或所述尿皮质素2和/或尿皮质素3 肽或多肽被配制在囊泡、 脂质体、 纳米粒子或纳米脂质粒子(NLP)或等同物中， 或被配制用 于使用囊泡、 脂质体、 纳米粒子或纳米脂质粒子(NLP)或等同物递送。 0046 在本发明的方法的替代性实施方案中： 所述表达尿皮质素2和/或尿皮质素3的核 酸或基因或所述表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物被配制在、 或插入或转染到分离的或 培养的细胞中， 并且任选地所述细胞是哺乳动物细胞、 心细胞、 或人细胞、 非人灵长类动物

47、细胞、 猴细胞、 小鼠细胞、 大鼠细胞、 豚鼠细胞、 兔细胞、 仓鼠细胞、 山羊细胞、 牛科动物细胞、 马科动物细胞、 绵羊细胞、 犬科动物细胞或猫科动物细胞。 0047 在本发明的方法的替代性实施方案中： 所述表达尿皮质素2和/或尿皮质素3的核 酸、 转录物或基因或所述表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物、 或所述尿皮质素2和/或尿 皮质素3肽或多肽被配制为药物或无菌制剂。 0048 在本发明的方法的替代性实施方案中： 所述表达尿皮质素2和/或尿皮质素3的核 酸或基因或所述表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物、 或所述尿皮质素2和/或尿皮质素3 肽或多肽与制品、 人工器官或植入物被配制或

48、递送， 在制品、 人工器官或植入物上被配制或 递送， 或结合制品、 人工器官或植入物被配制或递送。 0049 在本发明的方法的替代性实施方案中： 所述表达尿皮质素2和/或尿皮质素3的核 酸或基因或所述表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物在体外或离体表达尿皮质素2和/或 尿皮质素3。 说 明 书 4/39 页 11 CN 106456803 A 11 0050 在替代性实施方案中， 提供了用于治疗、 改善或防止(预防)与以下相关的2型糖尿 病的方法： 心脏收缩功能障碍； 充血性心力衰竭(CHF)； 心脏纤维化； 心肌细胞疾病、 功能障 碍或细胞凋亡； 和/或肺动脉高压， 所述方法包括实施本发明

49、方法。 0051 在替代性实施方案中， 提供了治疗、 改善或防止(预防)患者或个体的2型糖尿病或 糖尿病前期的方法， 其包括： 0052 (a)实施本发明的方法； 和 0053 (b)向有需要的个体或患者施用尿皮质素-2(UCn-2)和/或尿皮质素-3(UCn-3)肽 或多肽， 或编码尿皮质素-2(UCn-2)和/或尿皮质素-3(UCn-3)的核酸、 基因、 信使或转录物， 0054 其中任选地， 所述尿皮质素-2(UCn-2)和/或尿皮质素-3(UCn-3)肽或多肽是分离 的、 重组的、 合成的和/或拟肽的肽或多肽或其变体， 0055 从而治疗、 改善或防止(预防)所述患者或个体的糖尿病或糖尿病前期。 0056 在替代性实施方案中， 提供了： 0057 -操作性地连接到转录调节序列的编码尿皮质素2和/或尿皮质素3多肽的核酸或 基因； 0058 -其中已含有编码尿皮质素2和/或尿皮质素3的核酸或基因的表达运载体、 载体、 重组病毒或等同物； 或 0059 -表达尿皮质素2和/或尿皮质素3多肽的核酸、 转录物或信使，