一种软枣猕猴桃发酵乳及其制备方法.pdf

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610883160.4 (22)申请日 2016.09.28 (83)生物保藏信息 CGMCC No.12852 2016.08.29 (71)申请人 沈阳农业大学 地址 110088 辽宁省沈阳市沈河区东陵路 120号 (72)发明人 乌日娜 武俊瑞 张鹏飞 张平 郭晶晶 岳喜庆 陶冬冰 (51)Int.Cl. A23C 9/13(2006.01) (54)发明名称 一种软枣猕猴桃发酵乳及其制备方法 (57)摘要 本发明提供了一种软枣猕猴桃发酵乳， 克服 了成熟的软枣猕猴

2、桃不利于储存和运输， 果实利 用率很低的缺点； 制备出的软枣猕猴桃发酵乳制 品主要成分为软枣猕猴桃汁 、 植物乳杆菌 (Lactobacillus plantarum WW)和脱脂乳粉培 养基， 其富含多种活性成分而具有抗氧化， 防衰 老， 调节免疫， 抗癌等重要的生理功能， 可以提高 益生菌的抗胃肠环境能力。 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 CN 106472669 A 2017.03.08 CN 106472669 A 1.一种软枣猕猴桃发酵乳， 其特征在于， 包括以下体积百分比含量的成分： 植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum WW) 1.5-3 软枣猕猴桃汁

3、 10-40 脱脂乳培养基 余量。 2.如权利要求1所述的软枣猕猴桃发酵乳， 其特征在于， 所述的软枣猕猴桃发酵乳， 包 括以下体积百分比含量的成分： 植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum WW) 2 软枣猕猴桃汁 30 脱脂乳培养基 余量。 3.一种软枣猕猴桃发酵乳的制备方法， 其特征在于， 包括以下步骤： A、 将软枣猕猴桃果用清水冲洗， 加水将果子榨汁， 再用纱布将得到的汁液过三遍， 滤液 在2000-3500rpm离心8-15min， 移取果汁的上清液， 用真空抽滤泵抽滤三遍， 将滤液再2000- 3500rpm离心8-15min， 取上清液即软枣猕猴桃汁； 然后

4、用无菌滤膜在超净工作台内过滤除 菌， 放入冰箱内速冻备用； B、 将脱脂乳粉按150g/L的比例加水放入培养基中， 混匀， 115高压灭菌8-12min， 得到 脱脂乳粉培养基备用； C、 将软枣猕猴桃汁调至pH值7.0， 过滤除菌后， 加入灭菌的脱脂乳培养基中， 混匀， 备 用； D、 将活化好的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum WW)菌体悬液， 调节浓度107cfu/ mL， 然后在超净工作台下， 接种于软枣猕猴桃汁脱脂乳培养基中， 于培养箱中37-40培养 5-8h， 包装， 灭菌。 4.如权利要求4所述的软枣猕猴桃发酵乳的制备方法， 其特征在于， 所述的步骤A

5、中， 软 枣猕猴桃果和水的加入量的质量比为(3-5) 1。 5.如权利要求4所述的软枣猕猴桃发酵乳的制备方法， 其特征在于， 所述的无菌滤膜的 孔径为0.22 m。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 106472669 A 2 一种软枣猕猴桃发酵乳及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及食品加工技术领域， 特别地， 涉及一种软枣猕猴桃发酵乳及其制备方 法。 背景技术 0002 发酵乳制品营养全面、 风味独特， 比牛乳更容易被人体吸收利用， 具体有以下功 效： 发酵过程中乳酸菌产生抗诱变化合物活性物质， 具有抑制肿瘤发生的可能， 可提高人体 的免疫力； 酸乳可降低血清胆固醇， 预防心

6、血管疾病； 抑制肠道病菌的生长繁殖， 对便秘和 细菌性腹泻具有预防治疗作用； 酸乳中产生的有机酸可促进胃肠蠕动和胃液的分泌； 饮用 酸乳可克服乳糖不耐症； 对预防和治疗糖尿病、 肝病也有一定疗效。 但目前市场上销售的发 酵乳制品维生素C含量很低， 况且， 随着生活节奏的快和生活压力的增大， 营养不良和亚健 康状态越来越多。 迫切的需要多种原料复合而成的新型产品。 0003 软枣猕猴桃味道独特鲜美， 保健功效多， 被誉为是野生果之王。 富含多种活性成 分， 如维生素C， 人体必需的8种氨基酸， 黄酮类合物等。 其中软枣猕猴桃中的维生素C含量非 常高， 每20g的软枣猕猴桃中的维生素C， 相当一个

7、成人一天的维生素需求量。 但成熟的软枣 猕猴桃不利于储存和运输， 果实利用率很低。 因此， 制备出软枣猕猴桃发酵乳制品可以合理 地解决上述问题。 发明内容 0004 本发明目的在于提供一种维生素C含量较高， 并可以提高菌体体内抗胃肠环境能 力， 有益于人体健康的软枣猕猴桃发酵乳制品， 以解决技术问题。 0005 为实现上述目的， 本发明提供了一种软枣猕猴桃发酵乳及其制备方法。 0006 一种软枣猕猴桃发酵乳， 包括以下体积百分比含量的成分： 0007 植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum WW) 1.5-3 0008 软枣猕猴桃汁 10-40 0009 脱脂乳培养基 余量

8、。 0010 所述的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum WW)的保藏单位为中国微生物菌 种保藏管理委员会普通微生物中心； 保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号； 保藏日 期为2016年8月29日； 保藏编号为： CGMCC No.12852。 0011 优选的， 所述的软枣猕猴桃发酵乳， 包括以下体积百分比含量的成分： 0012 植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum WW) 2 0013 软枣猕猴桃汁 30 0014 脱脂乳培养基 余量。 0015 一种软枣猕猴桃发酵乳的制备方法， 包括以下步骤： 0016 A、 将软枣猕猴桃果用清水冲洗， 加

9、水将果子榨汁， 再用纱布将得到的汁液过三遍， 滤液在2000-3500rpm离心8-15min， 移取果汁的上清液， 用真空抽滤泵抽滤三遍， 将滤液再 说 明 书 1/5 页 3 CN 106472669 A 3 2000-3500rpm离心8-15min， 取上清液即软枣猕猴桃汁； 然后用无菌滤膜在超净工作台内过 滤除菌， 放入冰箱内速冻备用； 0017 B、 将脱脂乳粉按150g/L的比例加水放入培养基中， 混匀， 115高压灭菌8-12min， 得到脱脂乳粉培养基备用； 0018 C、 将软枣猕猴桃汁调至pH值7.0， 过滤除菌后， 加入灭菌的脱脂乳培养基中， 混匀， 备用； 0019

10、D、 将活化好的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum WW)菌体悬液， 调节浓度 107cfu/mL， 然后在超净工作台下， 接种于软枣猕猴桃汁脱脂乳培养基中， 于培养箱中37-40 培养5-8h， 包装， 灭菌。 0020 优选的， 所述的步骤A中， 软枣猕猴桃果和水的加入量的质量比为(3-5) 1。 0021 优选的， 所述的无菌滤膜的孔径为0.22 m。 0022 本发明具有以下有益效果： 本发明的软枣猕猴桃发酵乳， 克服了成熟的软枣猕猴 桃不利于储存和运输， 果实利用率很低的缺点； 制备出的软枣猕猴桃发酵乳制品主要成分 为软枣猕猴桃发酵乳、 植物乳杆菌(Lacto

11、bacillus plantarum WW)和脱脂乳粉， 富含多种 活性成分而具有抗氧化， 防衰老， 调节免疫， 抗癌等重要的生理功能， 可以提高益生菌的抗 胃肠环境能力。 0023 除了上面所描述的目的、 特征和优点之外， 本发明还有其它的目的、 特征和优点。 下面将对本发明作进一步详细的说明。 附图说明 0024 图1： 添加10-30软枣猕猴桃汁对菌株的生长影响图。 0025 图2： 添加30-60软枣猕猴桃汁对菌株的生长影响图。 0026 图3： 30软枣猕猴桃汁对菌株耐受人工胃液能力的影响图。 0027 图4： 30软枣猕猴桃汁对菌株耐受人工肠液能力的影响图。 具体实施方式 0028

12、 以下对本发明的实施例进行详细说明， 但是本发明可以根据权利要求限定和覆盖 的多种不同方式实施。 0029 实施例1 0030 一种软枣猕猴桃发酵乳， 包括以下体积百分比含量的成分： 0031 植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum WW) 2 0032 软枣猕猴桃汁 30 0033 脱脂乳培养基 余量。 0034 一种软枣猕猴桃发酵乳的制备方法， 包括以下步骤： 0035 A、 将软枣猕猴桃果用清水冲洗， 加水将果子榨汁， 再用纱布将得到的汁液过三遍， 滤液在3000rpm离心10min， 移取果汁的上清液， 用真空抽滤泵抽滤三遍， 将滤液再3000rpm 离心10min

13、， 取上清液即软枣猕猴桃汁； 然后用无菌滤膜在超净工作台内过滤除菌， 放入冰 箱内速冻备用； 0036 B、 将脱脂乳粉按150g/L的比例加水放入培养基中， 混匀， 115高压灭菌10min， 得 说 明 书 2/5 页 4 CN 106472669 A 4 到脱脂乳粉培养基备用； 0037 C、 将软枣猕猴桃汁调至pH值7.0， 过滤除菌后， 加入灭菌的脱脂乳培养基中， 混匀， 备用； 0038 D、 将活化好的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum WW)菌体悬液， 调节浓度 107cfu/mL， 然后在超净工作台下， 接种于软枣猕猴桃汁脱脂乳培养基中， 于培养箱中3

14、7 培养8h， 包装， 灭菌。 0039 所述的步骤A中， 软枣猕猴桃果和水的加入量的质量比为4 1。 0040 所述的无菌滤膜的孔径为0.22 m。 0041 实施例2 0042 一种软枣猕猴桃发酵乳， 包括以下体积百分比含量的成分： 0043 植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum WW) 1.5 0044 软枣猕猴桃汁 10 0045 脱脂乳培养基 余量。 0046 一种软枣猕猴桃发酵乳的制备方法， 包括以下步骤： 0047 A、 将软枣猕猴桃果用清水冲洗， 加水将果子榨汁， 再用纱布将得到的汁液过三遍， 滤液在3500rpm离心8min， 移取果汁的上清液， 用真空

15、抽滤泵抽滤三遍， 将滤液再3500rpm离 心8min， 取上清液即软枣猕猴桃汁； 然后用无菌滤膜在超净工作台内过滤除菌， 放入冰箱内 速冻备用； 0048 B、 将脱脂乳粉按150g/L的比例加水放入培养基中， 混匀， 115高压灭菌12min， 得 到脱脂乳粉培养基备用； 0049 C、 将软枣猕猴桃汁调至pH值7.0， 过滤除菌后， 加入灭菌的脱脂乳培养基中， 混匀， 备用； 0050 D、 将活化好的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum WW)菌体悬液， 调节浓度 107cfu/mL， 然后在超净工作台下， 接种于软枣猕猴桃汁脱脂乳培养基中， 于培养箱中38 培养

16、6h， 包装， 灭菌。 0051 所述的步骤A中， 软枣猕猴桃果和水的加入量的质量比为3 1。 0052 所述的无菌滤膜的孔径为0.22 m。 0053 实施例3 0054 一种软枣猕猴桃发酵乳， 包括以下体积百分比含量的成分： 0055 Lactobacillus plantarum WW(CGMCC No.12852) 3 0056 软枣猕猴桃汁 40 0057 脱脂乳培养基 余量。 0058 一种软枣猕猴桃发酵乳的制备方法， 包括以下步骤： 0059 A、 将软枣猕猴桃果用清水冲洗， 加水将果子榨汁， 再用纱布将得到的汁液过三遍， 滤液在2000rpm离心15min， 移取果汁的上清液，

17、 用真空抽滤泵抽滤三遍， 将滤液再2000rpm 离心15min， 取上清液即软枣猕猴桃汁； 然后用无菌滤膜在超净工作台内过滤除菌， 放入冰 箱内速冻备用； 0060 B、 将脱脂乳粉按150g/L的比例加水放入培养基中， 混匀， 115高压灭菌8min， 得 到脱脂乳粉培养基备用； 说 明 书 3/5 页 5 CN 106472669 A 5 0061 C、 将软枣猕猴桃汁调至pH值7.0， 过滤除菌后， 加入灭菌的脱脂乳培养基中， 混匀， 备用； 0062 D、 将活化好的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum WW)菌体悬液， 调节浓度 107cfu/mL， 然后在超

18、净工作台下， 接种于软枣猕猴桃汁脱脂乳培养基中， 于培养箱中40 培养5h， 包装， 灭菌。 0063 所述的步骤A中， 软枣猕猴桃果和水的加入量的质量比为5 1。 0064 所述的无菌滤膜的孔径为0.22 m。 0065 以下为对比实施例， 对本发明的各种制备条件进一步分析： 0066 对比实施例1： 凝乳试验 0067 将活化好的菌悬液， 调节浓度107cfu/mL。 向脱脂乳培养基中， 加入10(v/v)的灭 菌水。 然后以2(v/v)接种量分别接种于5mL脱脂乳培养基、 5mL的10(v/v)软枣猕猴桃汁 脱脂乳培养基中， 于培养箱中37培养， 记录凝乳时间， 观察凝乳效果。 凝乳完全

19、后取样， 分 别测定凝乳中pH。 以此来初步判断软枣猕猴桃汁是否对菌株生长有影响。 0068 表1： 添加10(v/v)软枣猕猴桃汁的凝乳效果 0069 0070 加入软枣猕猴桃汁后， 凝乳时间大大缩短， 凝乳效果也有明显改善。 0071 对比实施例2： 软枣猕猴桃汁添加量对菌株生长的影响 0072 将活化好的菌悬液， 以2(v/v)接种量分别接种于基础MRS液体培养基中， 3(v/ v)低聚果糖改良培养基， 以及10(v/v)、 20(v/v)、 30(v/v)、 40(v/v)、 50(v/v)、 60(v/v)软枣猕猴桃汁改良培养基中， 混匀后于培养箱中37培养， 并于6h， 12h，

20、18h， 24h， 30h， 倾注法菌落计数。 以此来探究不同添加量的软枣猕猴桃汁对菌株生长的作用， 并 确定最佳软枣猕猴桃汁促生长添加量。 0073 基础MRS液体培养基(g/L)： 葡萄糖20； 蛋白胨10； 牛肉浸膏8； 无水乙酸钠5； 磷酸氢 二钾2； 酵母浸粉4； 柠檬酸钠2； 七水硫酸镁0.58； 四水硫酸锰0.25； 吐温1。 pH值6.2-6.4， 121 高压灭菌20min备用。 0074 软枣猕猴桃汁改良培养基： 将软枣猕猴桃汁调至pH值为6.4， 过滤除菌后， 加入灭 菌的MRS液体培养基中， 混匀， 备用。 0075 由添加10-30软枣猕猴桃汁对菌株的生长影响图(图1

21、)可以知道， 菌种接种于 培养基中后， 通过菌落计数将基础培养基与改良培养基的对比， 我们发现改良培养基中的 说 明 书 4/5 页 6 CN 106472669 A 6 活菌数明显高于基础培养基。 而且在10-30(v/v)范围内， 随着添加软枣猕猴桃汁比例 的增加， 活菌数也一直在相应提高。 说明软枣猕猴桃汁对菌体生长有一定的促进作用， 提高 了菌株的存活率。 0076 确定10-30(v/v)的软枣猕猴桃汁对菌体的生长有促进作用后， 继续对比软枣猕 猴桃汁添加量30(v/v)， 40(v/v)， 50(v/v)， 60(v/v)对菌体生长的影响。 0077 由添加30-60软枣猕猴桃汁对

22、菌株的生长影响图(图2)数据显示， 添加30 (v/v)， 40(v/v)软枣猕猴桃汁浓度后， 作用效果相近， 而当浓度添加至60(v/v)时， 活菌 数开始有所下降。 乳酸菌菌株在增殖过程中会消耗大量碳源氮源等营养物质， 并产生乳酸， 降低了培养体系中的酸度， 酸度过低会抑制菌体的生长。 当猕猴桃汁添加量过多， 可能导致 改良培养基中缺乏微生物繁殖所需氮源， 调节pH的缓冲盐等必要成分， 满足不了菌体的增 殖所需。 果汁浓度过大， 也可能使培养基渗透压增加， 细胞为维持内外渗透压而失水， 也会 抑制菌体的正常生长。 最终确定， 软枣猕猴桃汁促进菌体生长的最佳浓度为30(v/v)。 0078

23、对比实施例3： 软枣猕猴桃汁对菌株耐酸和耐受人工胃肠液能力的影响 0079 由30软枣猕猴桃汁对菌株耐受人工胃液能力的影响图(图3)和30软枣猕猴桃 汁对菌株耐受人工肠液能力的影响图(图4)可以看出， 软枣猕猴桃的加入可以提高益生菌 菌体耐人工胃肠环境的能力。 0080 软枣猕猴桃汁的添加， 能够促进试验菌株分解利用糖类， 从而产生更多的酸性代 谢产物， 降低pH， 所以乳酸菌对酸度有着不同程度的固有耐受性。 当乳酸菌暴露在酸性环境 中， 菌体逐渐适应酸度的期间， 会伴随着一系列由外到内的调节机制。 0081 关于乳酸菌的耐酸机制尚不完全明了， 但目前主要提出了以下几种理论： 在酸环 境压力下

24、， 细胞膜最先暴露在酸环境中， 在抗酸作用中发挥着重要的作用。 乳酸菌细胞膜中 不同脂肪酸含量会随外界酸度变化而改变， 因而影响细胞膜的渗透性， 阻断外界酸进入胞 内来保护菌体； 乳酸菌还可以通过促进自身酶作用来维持内外酸碱平衡， 保护菌体不受酸 环境压力的抑制。 遇到酸胁迫时， 菌体内的F0F1-ATP酶会变得更活跃， 使分子跨膜动力增 强， 乳酸菌细胞质中的氢离子会经过跨膜运输作用， 而被排除胞外； 即便若菌体蛋白因为酸 抑制而受到损伤， 其自动修复功能会将蛋白及DNA进行部分复原， 降低菌体的死亡率。 而人 体的胃肠环境呈酸性， 软枣猕猴桃汁的添加， 对菌体起到了一定的保护作用， 增加了菌体的 活性。 所以， 菌株对人工胃肠液的耐受力也随之增强。 0082 以上所述仅为本发明的优选实施例而已， 并不用于限制本发明， 对于本领域的技 术人员来说， 本发明可以有各种更改和变化。 凡在本发明的精神和原则之内， 所作的任何修 改、 等同替换、 改进等， 均应包含在本发明的保护范围之内。 说 明 书 5/5 页 7 CN 106472669 A 7 图1 图2 说 明 书 附 图 1/2 页 8 CN 106472669 A 8 图3 图4 说 明 书 附 图 2/2 页 9 CN 106472669 A 9