西瓜中赋予对马铃薯Y病毒属抗性的QTL.pdf

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201780009717.4 (22)申请日 2017.02.06 (30)优先权数据 PCT/EP2016/052544 2016.02.05 EP (85)PCT国际申请进入国家阶段日 2018.08.03 (86)PCT国际申请的申请数据 PCT/EP2017/052523 2017.02.06 (87)PCT国际申请的公布数据 WO2017/134297 EN 2017.08.10 (83)生物保藏信息 NCIMB 42535 2016.02.03 NCIMB 42536

2、 2016.02.03 NCIMB 42537 2016.02.03 NCIMB 42538 2016.02.03 NCIMB 42539 2016.02.03 NCIMB 42540 2016.02.03 (71)申请人 瑞克斯旺种苗集团公司 地址 荷兰德利尔 (72)发明人 ES维拉达 DB德尔格 M维勒威艾乐 DM罗斯达特 (74)专利代理机构 中国国际贸易促进委员会专 利商标事务所 11038 代理人 张小勇 (51)Int.Cl. A01H 5/08(2018.01) A01H 5/10(2018.01) A01H 6/34(2018.01) C12Q 1/6895(2018.01)

3、 (54)发明名称 西瓜中赋予对马铃薯Y病毒属抗性的QTL (57)摘要 本发明涉及对马铃薯Y病毒显示抗性的西瓜 植物， 其中西瓜植物包含QTL1、 QTL2和QTL3的抗 性赋予等位基因的一种或多种， 且其中所述QTL 存在于西瓜植物中或可得自西瓜植物， 其有代表 性的种子分别以保藏登记号NCIMB 42537、 42536、 42535保藏。 在保藏号NCIMB 42537的种子 中， QTL1与选自SEQ ID NO:4-SEQ ID NO:40的确 切序列id号的标志物序列的至少一种连锁。 在保 藏号NCIMB 42536和NCIMB 42538的种子中， QTL2 与选自SEQ ID

4、 NO:46-SEQ ID NO:86的确切序列 id号的标志物序列的至少一种连锁。 在保藏号 NCIMB 42535的种子中， QTL3与选自SEQ ID NO: 92-SEQ ID NO:96的确切序列号的标志物序列的 至少一种连锁。 权利要求书2页 说明书34页 PCT/RO/134表5页 附图1页 CN 109152346 A 2019.01.04 CN 109152346 A 1.西瓜(Citrullus lanatus subsp.lanatus)种的西瓜植物， 其产生具有红色果肉的 果实并且包含位于染色体8上的QTL1和/或位于染色体6上的QTL2， 这些QTL赋予对马铃薯Y 病

5、毒属的抗性， 且其中QTL1发现于其有代表性的种子以保藏号NCIMB 42537保藏的西瓜植 物中， 且其中QTL1位于分子标志物M2382(由SEQ ID NO:1和/或SEQ ID NO:2表示)与M2386 (由SEQ ID NO:41和/或SEQ ID NO:42表示)之间， 且其中QTL2发现于其有代表性的种子以 保藏号NCIMB 42536保藏的西瓜植物中， 且其中QTL2位于分子标志物M2283(由SEQ ID NO: 43和/或SEQ ID NO:44表示)与M1567(由SEQ ID NO:87和/或SEQ ID NO:88表示)之间。 2.如权利要求1所述的西瓜植物， 其中

6、所述植物的成熟果实具有果肉， 所述果肉具有至 少5.0白利糖度、 优选至少5.5白利糖度、 更优选至少6.0白利糖度的可溶性固体。 3.如权利要求1或2所述的西瓜植物， 其中在保藏号NCIMB 42537的种子中， QTL1与选自 SEQ ID NO:4(M4996)、 SEQ ID NO:6(M4997)、 SEQ ID NO:8(M4998)、 SEQ ID NO:10(M4999)、 SEQ ID NO:12(M5000)、 SEQ ID NO:14(M5001)、 SEQ ID NO:16(M5003)、 SEQ ID NO:18 (M2384)、 SEQ ID NO:20(M5004

7、)、 SEQ ID NO:22(M5005)、 SEQ ID NO:24(M5007)、 SEQ ID NO:26(M5008)、 SEQ ID NO:28(M5010)、 SEQ ID NO:30(M5011)、 SEQ ID NO:32(M5012)、 SEQ ID NO:34M5014)、 SEQ ID NO:36(M5015)、 SEQ ID NO:38(M5016)和SEQ ID NO:40(M5017)的 标志物序列连锁， 且其中在保藏号NCIMB 42536和保藏号NCIMB 42538的种子中， QTL2与选 自SEQ ID NO:46(M2285)、 SEQ ID NO:48

8、(M4938),SEQ ID NO:50(M4939)、 SEQ ID NO:52 (M4940)、 SEQ ID NO:54(M4941)、 SEQ ID NO:56(M4941)、 SEQ ID NO:58(M4943)、 SEQ ID NO:60(M4945)、 SEQ ID NO:62(M4946)、 SEQ ID NO:64(M4947)、 SEQ ID NO:66(M4948)、 SEQ ID NO:68(M4949)、 SEQ ID NO:70(M4950)、 SEQ ID NO:72M4951)、 SEQ ID NO:74(M4952)、 SEQ ID NO:76(M4953)

9、、 SEQ ID NO:78(M2290)、 SEQ ID NO:80(M4954)、 SEQ ID NO:82 (M4955)、 SEQ ID NO:84(M4956)和SEQ ID NO:86(M2296)的标志物连锁。 4.如权利要求1-3中任一项所述的西瓜植物， 其中该西瓜植物还包含位于染色体3上的 QTL3， 其赋予对马铃薯Y病毒属的抗性， 其中QTL3发现于其有代表性的种子以保藏登记号 NCIMB 42535保藏的西瓜植物中， 且其中QTL3位于分子标志物M2112(由SEQ ID NO:89或SEQ ID NO:90表示)与M2122(由SEQ ID NO:97或SEQ ID N

10、O:98表示)之间。 5.如权利要求4所述的西瓜植物， 其中在保藏号NCIMB 42535的种子中， QTL3与选自SEQ ID NO:92(M2115)、 SEQ ID NO:94(M2116)和SEQ ID NO:96(M2118)的标志物序列连锁。 6.如权利要求4或5所述的西瓜植物， 其中QTL3包含西瓜真核生物翻译起始因子eIF4E 基因的抗性赋予等位基因。 7.如权利要求1-6中任一项所述的西瓜植物， 其中该西瓜植物显示对ZYMV和/或WMV的 抗性。 8.能够生长成如权利要求1-7中任一项所述的西瓜植物的种子。 9.如权利要求1-7中任一项所述的西瓜植物的种子， 其中该种子包含Q

11、TL1和/或QTL2 和/或QTL3。 10.能够发育成和/或衍生自如权利要求1-7中任一项所述的植物的繁殖材料， 其中该 繁殖材料选自小孢子、 花粉、 子房、 胚珠、 胚、 胚囊、 卵细胞、 插条、 根、 下胚轴、 子叶、 茎、 叶、 花、 花药、 种子、 分生组织细胞、 原生质体、 细胞、 或其组织培养物， 且其中该繁殖材料包含 QTL1和/或QTL2和/或QTL3。 权 利 要 求 书 1/2 页 2 CN 109152346 A 2 11.选择西瓜植物的方法， 该西瓜植物包含QTL1和/或QTL2和/或QTL3， 该方法包括检测 西瓜植物基因组中的标志物序列， 所述标志物序列选自SEQ

12、 ID NO:4、 SEQ ID NO:6、 SEQ ID NO:8、 SEQ ID NO:10、 SEQ ID NO:12、 SEQ ID NO:14、 SEQ ID NO:16、 SEQ ID NO:18、 SEQ ID NO:20、 SEQ ID NO:22、 SEQ ID NO:24、 SEQ ID NO:26、 SEQ ID NO:28、 SEQ ID NO:30、 SEQ ID NO:32、 SEQ ID NO:34、 SEQ ID NO:36、 SEQ ID NO:38、 SEQ ID NO:40、 SEQ ID NO:46、 SEQ ID NO:48、 SEQ ID NO:50

13、、 SEQ ID NO:52、 SEQ ID NO:54、 SEQ ID NO:56、 SEQ ID NO:58、 SEQ ID NO:60、 SEQ ID NO:62、 SEQ ID NO:64、 SEQ ID NO:66、 SEQ ID NO:68、 SEQ ID NO:70、 SEQ ID NO:72、 SEQ ID NO:74、 SEQ ID NO:76、 SEQ ID NO:78、 SEQ ID NO:80、 SEQ ID NO:82、 SEQ ID NO:84、 SEQ ID NO:86、 SEQ ID NO:92、 SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:96， 并且将包含

14、所述标志 物序列的西瓜植物选择为包含QTL1、 和/或QTL2和/或QTL3的西瓜植物。 12.权利要求11所述的方法， 其中选择包含QTL1和/或QTL2和任选的QTL3的西瓜植物， 并且对ZYMV抗性进行表型测定， 以选择对ZYMV具有抗性的西瓜植物。 13.权利要求11所述的方法， 还包含对WMV抗性进行表型测定， 以选择对WMV具有抗性的 西瓜植物。 14.如权利要求1-3任一项中所定义的QTL1和/或QTL2和/或如权利要求4-6任一项中所 定义的QTL3在鉴定和/或开发表现出对马铃薯Y病毒属具有抗性的西瓜植物中的用途。 15.如权利要求14所述的用途， 其中所述西瓜植物表现出对ZY

15、MV和/或WMV的抗性。 16.选自SEQ ID NO:4、 SEQ ID NO:6、 SEQ ID NO:8、 SEQ ID NO:10、 SEQ ID NO:12、 SEQ ID NO:14、 SEQ ID NO:16、 SEQ ID NO:18、 SEQ ID NO:20、 SEQ ID NO:22、 SEQ ID NO:24、 SEQ ID NO:26、 SEQ ID NO:28、 SEQ ID NO:30、 SEQ ID NO:32、 SEQ ID NO:34、 SEQ ID NO:36、 SEQ ID NO:38、 SEQ ID NO:40的标志物； 或来源于其中的标志物， 该标志

16、物与QTL1连锁。 17.选自SEQ ID NO:46、 SEQ ID NO:48、 SEQ ID NO:50、 SEQ ID NO:52、 SEQ ID NO:54、 SEQ ID NO:56、 SEQ ID NO:58、 SEQ ID NO:60、 SEQ ID NO:62、 SEQ ID NO:64、 SEQ ID NO: 66、 SEQ ID NO:68、 SEQ ID NO:70、 SEQ ID NO:72、 SEQ ID NO:74、 SEQ ID NO:76、 SEQ ID NO:78、 SEQ ID NO:80、 SEQ ID NO:82、 SEQ ID NO:84、 SEQ

17、ID NO:86的标志物或来源于其中 的标志物， 该标志物与QTL2连锁。 18.选自SEQ ID NO:92、 SEQ ID NO:94、 SEQ ID NO:96的标志物或来源于其中的标志 物， 该标志物与QTL3连锁。 19.标志物组， 其包含选自如权利要求16所述的标志物、 如权利要求17所述的标志物和 如权利要求18所述的标志物的两种或更多种标志物。 20.如权利要求16-19任一项中所定义的标志物或标志物组在鉴定包含QTL1、 QTL2和 QTL3的一种或多种的西瓜植物中的用途。 21.生产表现出对马铃薯Y病毒属具有抗性的西瓜植物的方法， 所述方法包括： a)使权利要求1-7中任一

18、项所述的植物与另一种植物杂交， 得到F1种群； b)任选地进行一轮或多轮的来自F1的植物的自交和/或杂交， 得到另一代种群； c)从该种群中选择包含QTL1和/或QTL2和/或QTL3并且表现出对马铃薯Y病毒属具有抗 性的植物。 权 利 要 求 书 2/2 页 3 CN 109152346 A 3 西瓜中赋予对马铃薯Y病毒属抗性的QTL 0001 本发明涉及一种对马铃薯Y病毒属具有抗性的西瓜植物。 本发明还涉及可以来源 于所述西瓜植物或能够生长成这类西瓜植物的种子和繁殖材料。 本发明还涉及用于选择对 马铃薯Y病毒属具有抗性的西瓜植物的标志物， 选择所述西瓜的方法， 以及标志物在鉴定对 马铃薯Y

19、病毒属具有抗性的西瓜植物中的用途。 0002 西瓜植物生长在世界上大部分地区。 美国的南部、 中东、 非洲、 印度、 日本和南欧是 最重要的西瓜产区。 西瓜是热带非洲的土产， 在南非、 纳米比亚、 博茨瓦纳、 津巴布韦、 莫桑 比克、 赞比亚和马拉维自然生长， 但现在广泛分布于整个非洲和整个亚洲。 它在世界的热带 和亚热带地区栽培并且是不定的(adventitious)。 西瓜被认为至少在4000年前已经被驯 化。 它的栽培可以追溯到古埃及和印度， 然后从那里传播到其他国家和地区。 0003 西瓜属于西瓜属(Citrullus)， 该属是葫芦科(Cucurbitaceae)的一部分。 现代栽

20、培西瓜被称为西瓜(Citrullus lanatus subsp.lanatus(Thunb.)， 虽然在文献中有时旧的 表示西瓜(Citrullus vulgaris Schrad.)仍然在使用。 0004 马铃薯Y病毒属(potyvirus)属于病毒的一个属， 是所谓的马铃薯Y病毒科 (Potyviridae)的一部分。 该名称取自该属的模式病毒： 马铃薯病毒Y。 马铃薯Y病毒属是农 业中的一个大问题， 并且在许多作物中造成重大损失。 它们主要由不同种类的蚜虫传播。 0005 小西葫芦黄色花叶病毒(Zucchini Yellow Mosaic virus)， 也称为缩写形式 ZYMV， 是

21、一种马铃薯Y病毒属， 并且是各种瓜类的主要病原体， 所述瓜类如笋瓜、 南瓜、 西瓜， 且顾名思义尤其是小西葫芦。 该疾病引起的症状包括使植物变黄的叶子花叶图案(因此得 名)和叶子中所谓的鞋带症状。 果实可以发育不良并且变形， 在最坏的情况下， 果实不能出 售， 并且产量严重下降。 0006 另一种已成为西瓜栽培主要病原体的马铃薯Y病毒属是西瓜花叶病毒， 称为WMV， 也称为WMV-2(西瓜花叶病毒2型)， 西葫芦(marrow)花叶病毒和甜瓜花叶病毒。 这种病毒不 仅在西瓜中引起症状， 而且在大多数瓜类中引起症状， 并且它可能感染来自不同植物科的 许多其他植物。 该病毒在温带和热带地区都很常见

22、。 由病毒引起的症状取决于宿主物种、 特 定病毒株和环境条件。 主要症状是植物一般的斑点和叶子上的所谓花叶。 在西瓜中， 它会引 起花叶病变和果实变形， 从而影响可市场化的产量。 已经据报道， WMV和ZYMV与其他病毒感 染的组合在西瓜植物中可能是致命的。 0007 ZYMV和WMV主要通过蚜虫传播， 但它们也能够通过与人或工具和机器的交互来传 播。 迄今为止已经尝试过控制ZYMV和WMV的各种解决方案， 从减少蚜虫种群的农药、 去除西 瓜田附近的替代寄主植物到轮作。 0008 在西瓜栽培中， 需要改善对马铃薯Y病毒属的抗性。 此外， 现有对马铃薯Y病毒属抗 性的遗传仍不清楚。 因此， 本发

23、明的一个目的在于提供一种对马铃薯Y病毒属具有抗性的西 瓜。 0009 在导致本发明的研究中， 开发出对马铃薯Y病毒属具有抗性的西瓜植物。 完成QTL 作图研究以鉴定对本发明植物中的马铃薯Y病毒属抗性负责的遗传区域。 鉴定了三种不同 的QTL(数量性状基因座)， 其有助于本发明植物中的马铃薯Y病毒属抗性。 说 明 书 1/34 页 4 CN 109152346 A 4 0010 本文使用的 “QTL” 或 “数量性状基因座” 定义为植物基因组上与特定性状/表型相 关的区域(基因座)， 更具体地， 基因座的变异与表型中发现的变异相关。 QTL包含与控制性 状/表型的基因连锁的基因。 0011 因此

24、， 本发明涉及一种西瓜植物， 其包含位于染色体8上的QTL1和/或位于染色体6 上的QTL2， 它们赋予对马铃薯Y病毒属的抗性， 并且其中QTL1如在西瓜植物中发现的， 其代 表性种子被保藏， 保藏号为NCIMB 42537， 且其中在保藏的种子中， QTL1位于如本文所定义 的分子标志物M2382与M2386之间， 并且其中QTL2如在西瓜植物中发现的， 其代表性种子被 保藏， 保藏号为NCIMB 42536， 且其中在保藏的种子中， QTL2位于如本文所定义的分子标志 物M2283与M1567之间。 0012 本发明还涉及一种西瓜植物， 其包含QTL1和/或QTL2和/或包含位于染色体3上

25、的 QTL3， 其中QTL3赋予对马铃薯Y病毒属的抗性， 其中QTL3如西瓜植物中发现的， 其代表性种 子以保藏登记号NCIMB 42535保藏， 且其中在保藏号NCIMB 42535的种子中， QTL3位于如本 文所定义的分子标志物M2112与M2122之间。 0013 短语 “发明涉及包含QTL1和/或QTL2和/或QTL3的西瓜植物” 还包含西瓜植物对马 铃薯Y病毒属ZYMV具有抗性并且包含 “QTL1和/或QTL2和任选的QTL3” 的情况。 西瓜中ZYMV抗 性与QTL3(EIF4e基因)之间的关系是已知的。 因此， 对ZYMV具有抗性的本发明植物在任何情 况下都具有QTL1或QTL

26、2或QTL1和QTL2二者， 并且还可以具有QTL3。 对ZYMV具有抗性且仅具 有QTL3的植物未被要求保护。 0014 发现命名为QTL1的QTL位于的西瓜植物染色体8上， 其在标志物M2382与M2386之 间。 两种形式的多态性标志物M2382由标志物序列SEQ ID NO： 1和SEQ ID NO： 2表示， 并且两 种形式的多态性标志物M2386由标志物序列SEQ ID NO： 41和SEQ ID NO： 42表示， 均如表1中 所示。 发现命名为QTL2的另一个QTL位于的西瓜植物染色体6上， 其在标志物M2283与M1567 之间。 两种形式的多态性标志物M2283由标志物序列

27、SEQ ID NO： 43和SEQ ID NO： 44表示， 且 多态性标志物M1567由两个标志物序列SEQ ID NO： 87和SEQ ID NO： 88表示， 如表1中所示。 0015 发现命名为QTL3的第三个QTL位于的染色体3上， 其在标志物M2112与M2122之间。 多态性标志物M2112由标志物序列SEQ ID NO： 89和SEQ ID NO： 90表示， 如表1中所示。 多态 性标志物M2122由标志物序列SEQ ID NO： 97和SEQ ID NO： 98表示， 如表1中所示。 0016 进一步的研究产生了可以用于鉴定QTL1、 QTL2和/或QTL3的SNP作图。

28、0017 如本文所用，“SNP” 即单核苷酸多态性定义为DNA的变异， 其由可在物种或种群内 不同的单核苷酸组成。 它们可以是突变基因的原因， 在这种情况下它们被称为因果SNP， 或 它们可以与某些基因外观(gene appearance)/基因型连锁并且因此可以用作标志物。 0018 如本文所用， 术语 “抗性赋予等位基因” 是产生马铃薯Y病毒属抗性的性状或表型 的QTL的形式。 0019 可以用于鉴定西瓜植物中QTL1的SNP存在于多态性标志物M4996、 M4997、 M4998、 M4999、 M5000、 M5001、 M5003、 M2384、 M5004、 M5005、 M500

29、7、 M5008、 M5010、 M5011、 M5012、 M5014、 M5015、 M5016和M5017中， 如表1中所示。 0020 多态性标志物由两种可能的形式表示， 即标志物序列或标志物等位基因， 在这种 情况下仅在单核苷酸多态性(SNP)中彼此不同。 在保藏号NCIMB 42537的种子中， QTL1的抗 性赋予等位基因与标志物序列中用下划线和粗体表示的核苷酸连锁， 所述标志物序列选自 说 明 书 2/34 页 5 CN 109152346 A 5 SEQ ID NO:4、 SEQ ID NO:6、 SEQ ID NO:8、 SEQ ID NO:10、 SEQ ID NO:12

30、、 SEQ ID NO:14、 SEQ ID NO:16、 SEQ ID NO:18、 SEQ ID NO:20、 SEQ ID NO:22、 SEQ ID NO:24、 SEQ ID NO: 26、 SEQ ID NO:28、 SEQ ID NO:30、 SEQ ID NO:32、 SEQ ID NO:34、 SEQ ID NO:36、 SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:40， 如表1中所示。 QTL1的野生型等位基因与标志物序列中用下划线和 粗体表示的核苷酸连锁， 所述标志物序列选自SEQ ID NO:3、 SEQ ID NO:5、 SEQ ID NO:7、 SEQ ID NO

31、:9、 SEQ ID NO:11、 SEQ ID NO:13、 SEQ ID NO:15、 SEQ ID NO:17、 SEQ ID NO:19、 SEQ ID NO:21、 SEQ ID NO:23、 SEQ ID NO:25、 SEQ ID NO:27、 SEQ ID NO:29、 SEQ ID NO: 31、 SEQ ID NO:33、 SEQ ID NO:35、 SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:39， 如表1中所示。 0021 在保藏号NCIMB 42539和42540的种子中， QTL1的抗性赋予等位基因与标志物序列 中用下划线和粗体表示的核苷酸连锁， 所述标志物序列选

32、自SEQ ID NO:4、 SEQ ID NO:6、 SEQ ID NO:8、 SEQ ID NO:10、 SEQ ID NO:12、 SEQ ID NO:14、 SEQ ID NO:16、 SEQ ID NO:18、 SEQ ID NO:20、 SEQ ID NO:22、 SEQ ID NO:24、 SEQ ID NO:26、 SEQ ID NO:28、 SEQ ID NO: 30、 SEQ ID NO:32、 SEQ ID NO:34、 SEQ ID NO:36、 SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:40， 如表1中 所示。 0022 可以用于鉴定西瓜植物中QTL2的SNP存在于

33、多态性标志物M2285、 M4938、 M4939、 M4940、 M4941、 M4942、 M4943、 M4945、 M4946、 M4947、 M4948、 M4949、 M4950、 M4951、 M4952、 M4953、 M2290、 M4954、 M4955、 M4956和M2296中， 如表1中所示。 0023 在保藏号NCIMB 42536的种子中， QTL2的抗性赋予等位基因与表1标志物序列中用 下划线和粗体表示的核苷酸连锁， 所述标志物序列选自SEQ ID NO:46、 SEQ ID NO:48、 SEQ ID NO:50、 SEQ ID NO:52、 SEQ ID N

34、O:54、 SEQ ID NO:56、 SEQ ID NO:58、 SEQ ID NO:60、 SEQ ID NO:62、 SEQ ID NO:64、 SEQ ID NO:66、 SEQ ID NO:68、 SEQ ID NO:70、 SEQ ID NO:72、 SEQ ID NO:74、 SEQ ID NO:76、 SEQ ID NO:78、 SEQ ID NO:80、 SEQ ID NO:82， 如表1中所示。 0024 在保藏号NCIMB 42538的种子中， QTL2的抗性赋予等位基因与标志物序列中用下 划线和粗体表示的核苷酸连锁， 所述标志物序列选自SEQ ID NO:62、 SEQ

35、 ID NO:64、 SEQ ID NO:66、 SEQ ID NO:68、 SEQ ID NO:70、 SEQ ID NO:72、 SEQ ID NO:74、 SEQ ID NO:76、 SEQ ID NO:78、 SEQ ID NO:80、 SEQ ID NO:82、 SEQ ID NO:84和SEQ ID NO:86， 如表1中所示。 0025 在保藏号NCIMB 42540的种子中， QTL2的抗性赋予等位基因与标志物序列中用下 划线和粗体表示的核苷酸连锁， 所述标志物序列选自SEQ ID NO:46、 SEQ ID NO:48、 SEQ ID NO:50、 SEQ ID NO:52、

36、 SEQ ID NO:54、 SEQ ID NO:56、 SEQ ID NO:58、 SEQ ID NO:60、 SEQ ID NO:62、 SEQ ID NO:64、 SEQ ID NO:66、 SEQ ID NO:68、 SEQ ID NO:70、 SEQ ID NO:72、 SEQ ID NO:74、 SEQ ID NO:76， 如表1中所示。 0026 QTL2的野生型等位基因与标志物序列中用下划线和粗体表示的核苷酸连锁， 所述 标志物序列选自SEQ ID NO:45、 SEQ ID NO:47、 SEQ ID NO:49、 SEQ ID NO:51、 SEQ ID NO: 53、 S

37、EQ ID NO:55、 SEQ ID NO:57、 SEQ ID NO:59、 SEQ ID NO:61、 SEQ ID NO:63、 SEQ ID NO:65、 SEQ ID NO:67、 SEQ ID NO:69、 SEQ ID NO:71、 SEQ ID NO:73、 SEQ ID NO:75、 SEQ ID NO:77、 SEQ ID NO:79、 SEQ ID NO:81、 SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:85， 如表1中所示。 0027 可以用于鉴定西瓜植物中QTL3的SNP的存在于标志物M2115、 M2116和M2118中。 在 保藏号NCIMB 42535的种

38、子中， QTL3的抗性赋予等位基因与标志物序列中用下划线和粗体 表示的核苷酸连锁， 所述标志物序列选自SEQ ID NO:92、 SEQ ID NO:94、 SEQ ID NO:96， 如 说 明 书 3/34 页 6 CN 109152346 A 6 表1中所示。 QTL3的野生型等位基因与标志物序列中用下划线和粗体表示的核苷酸连锁， 所 述标志物序列选自SEQ ID NO:91、 SEQ ID NO:93和SEQ ID NO:95， 如表1中所示。 0028 在保藏号NCIMB 42539和NCIMB 43538的种子中， QTL3的抗性赋予等位基因与标志 物序列中用下划线和粗体表示的核苷

39、酸连锁， 所述标志物序列选自SEQ ID NO:92、 SEQ ID NO:94、 SEQ ID NO:96， 如表1中所示。 0029 位于西瓜植物染色体3上的QTL3包含西瓜真核生物翻译起始因子eIF4E基因的抗 性赋予等位基因。 西瓜真核生物翻译起始因子eIF4E基因的序列已发表， 并且可在NCBI数据 库中找到。 已知西瓜eIF4E基因中的SNP与对ZYMV的抗性相关。 根据本发明， 在ZYMV抗性的情 况下， 植物中存在的QTL3与存在的QTL1和/或QTL2合并。 0030 侧翼标志物M2382和M2386指示QTL1的位置， 侧翼标志物M2283和M1567指示QTL2的 位置，

40、 且侧翼标志物M2112和M2122指示QTL3的位置。 序列SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2是标 志物M2382的两种可能的序列； SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:42是标志物M2386的两种可能的 序列； SEQ ID NO:43和SEQ ID NO:44是标志物M2283的两种可能的序列； SEQ ID NO:87和 SEQ ID NO:88是标志物M1567的两种可能的序列； SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:90是标志物 M2112的两种可能的序列； SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:98代表标志物M2122的两种可能的序 列。 这

41、些侧翼标志物的两种可能的标志物序列中无一必然与赋予具体QTL的马铃薯Y病毒属 抗性的等位基因连锁， 不过， 连锁是可能的。 这些标志物指示QTL的位置。 0031 在表1中通过使用下划线和粗体书写来指示与赋予马铃薯Y病毒属抗性的等位基 因连锁的标志物等位基因和与西瓜植物中的易感等位基因连锁的标志物等位基因之间不 同的核苷酸。 本发明的植物优选包含与QTL的抗性赋予等位基因连锁的标志物等位基因的 一个或多个。 0032 表1中的序列中指示的多态性核苷酸或SNP可用作分子标志物， 其用于检测在西瓜 植物中QTL1和/或QTL2和/或QTL3的赋予马铃薯Y病毒属抗性的等位基因的存在。 0033 包含

42、QTL1的赋予对马铃薯Y病毒属抗性的等位基因的植物可以是由种子生长成的 植物， 该种子的有代表性的样品以保藏号NCIMB42537、 42539和42540保藏于NCIMB。 0034 包含QTL2的赋予对马铃薯Y病毒属抗性的等位基因的植物可以是由种子生长成的 植物， 该种子的有代表性的样品以保藏号NCIMB42536、 42538和42540保藏于NCIMB。 0035 包含QTL3的赋予对马铃薯Y病毒属抗性的等位基因的植物可以是由种子生长成的 植物， 该种子的有代表性的样品以保藏号NCIMB42535、 42538和42539保藏于NCIMB。 0036 在一个实施方案中， 本发明涉及包含

43、QTL1和/或QTL2和任选的QTL3的ZYMV抗性西 瓜植物。 0037 西瓜植物基因组中存在QTL1和/或QTL2和/或QTL3改善对马铃薯Y病毒属的抗性。 0038 在实施方案中， 本发明涉及包含QTL1、 QTL2和任选的QTL3并且表现出对ZYMV的抗 性的西瓜植物。 0039 在实施方案中， 本发明涉及包含QTL1、 QTL2和任选的QTL3并且表现出对ZYMV的抗 性的西瓜植物。 0040 在实施方案中， 本发明涉及包含QTL1、 QTL2、 和/或QTL3并且表现出对WMV的抗性的 西瓜植物。 0041 在实施方案中， 本发明涉及包含QTL1和/或QTL2和/或QTL3并且产生

44、具有红色果肉 说 明 书 4/34 页 7 CN 109152346 A 7 的果实的西瓜植物(西瓜(Citrullus lanatus subsp.lanatus)， 其中所述植物的成熟果 实优选具有果肉， 其具有至少5.0白利糖度、 优选至少5.5白利糖度、 更优选至少6.0白利糖 度的可溶性固体。 如本文所用， 将 “西瓜植物” 定义为属于物种 “西瓜(Citrullus lanatus subsp.lanatus)” 的植物， 其农学上优良， 并且产生具有红色果肉的果实。 优选这种西瓜植 物的成熟果实具有至少5.0白利糖度、 优选至少5.5白利糖度、 更优选6.0白利糖度的可溶性 果肉

45、和/或平均大小的种子。 如本文所用， 将术语 农学上优良的西瓜植物 定义为包含可区 分的农学性状的西瓜植物， 其使西瓜植物适于商业生产。 0042 如本文所用的 “对马铃薯Y病毒属的抗性” 定义为马铃薯Y病毒属抗性评分以优先 级增加的顺序为比不含QTL1和/或QTL2、 和/或QTL3的抗性赋予等位基因的西瓜植物的马铃 薯Y病毒属抗性评分平均低至少1.0、 至少1.5、 至少2.0、 至少2.5、 至少3.0、 至少3.5、 至少 4.0、 至少4.5、 至少5.0、 至少5.5、 至少6.0(基于0-9的标度)。 0043 如本文所用的 “对ZYMV的抗性” 定义为ZYMV抗性增加。 包含Q

46、TL1和/或QTL2和任选 的QTL3的抗性赋予等位基因的ZYMV抗性西瓜植物具有ZYMV抗性评分， 其以优先级增加的顺 序为比不含QTL1和/或QTL2和任选的QTL3的抗性赋予等位基因的西瓜植物的马铃薯Y病毒 属抗性评分平均低至少1.0、 至少1.5、 至少2.0、 至少2.5、 至少3.0、 至少3.5、 至少4.0、 至少 4.5、 至少5.0、 至少5.5、 至少6.0(基于0-9的标度)。 0044 如本文所用的 “对WMV的抗性” 定义为WMV抗性增加。 包含QTL1和/或QTL2、 和/或 QTL3的抗性赋予等位基因的WMV抗性西瓜植物具有WMV抗性评分， 其以优先级增加的顺序

47、为 比不含QTL1和/或QTL2、 和/或QTL3的抗性赋予等位基因的西瓜植物的马铃薯Y病毒属抗性 评分平均低至少1.0、 至少1.5、 至少2.0、 至少2.5、 至少3.0、 至少3.5、 至少4.0、 至少4.5、 至 少5.0、 至少5.5、 至少6.0(基于0-9的标度)。 0045 本文定义的 “抗性评分” 以下列方式评估。 用包含马铃薯Y病毒属的混合物手工接 种5/6叶期的西瓜植物。 每株植物接种两片叶子， 3至4天后重复接种。 将植物在人工气候试 验室(climate cell)中培养， 几天后将它们放入温室中。 在第一次接种后12、 14和20天后， 根据以下半定量标度对植物进行表型分型并目测评估感染水平： 1.无症状； 2.无症状至老 叶上的一些褪绿病变； 3.老叶上的一些褪绿病变； 4.老叶上的一些褪绿病变至老叶上更多 的褪绿病变； 5.所有叶子上更多的褪绿病变； 6.更多的褪绿病变至嫩叶上有明显的花叶和 变形； 7.嫩叶上明显的花叶和变形； 8.嫩叶上明显的花叶和变形至强烈的生长迟缓和花叶 以及变