MIR3615P作为内参MIRNA在肿瘤诊断和监测中的应用.pdf

1、10申请公布号CN104212895A43申请公布日20141217CN104212895A21申请号201410443995922申请日20140903C12Q1/6820060171申请人复旦大学附属中山医院地址200032上海市徐汇区枫林路180号72发明人詹成王群时雨王琳74专利代理机构上海卓阳知识产权代理事务所普通合伙31262代理人金重庆54发明名称MIR3615P作为内参MIRNA在肿瘤诊断和监测中的应用57摘要本发明涉及MIR3615P的一种新用途，即，作为内参MIRNA的应用。本发明还提供一种MIRNA标准化定量的方法。本发明的优点在于，MIR3615P在多数肿瘤及对照正常组

2、织中表达最为稳定，最适合作为内参MIRNA用于肿瘤MIRNA的检测结果的标准化。本发明提供的内参MIRNA、MIRNA标准化定量的方法、定量检测MIRNA的芯片或试剂盒可以使检测结果标准化，值得广泛推广。51INTCL权利要求书1页说明书5页序列表1页附图2页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书5页序列表1页附图2页10申请公布号CN104212895ACN104212895A1/1页21MIR3615P作为内参MIRNA的应用。2MIR3615P作为内参MIRNA在肿瘤诊断和监测中的应用。3一种MIRNA标准化定量的方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤1测

3、定样本中待测MIRNA的绝对浓度；2将步骤1获得的待测MIRNA的绝对浓度与样本中内参MIRNA的绝对浓度进行比较，从而获得待测MIRNA的相对浓度，所述的内参MIRNA为MIR3615P或包含MIR3615P的MIRNA的组合。4根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤2中，将目的MIRNA的绝对浓度与样本中MIR3615P的绝对浓度进行比较。5根据权利要求3或4任一所述的方法，其特征在于，所述的样本为肿瘤组织、肿瘤患者血液、血浆、血清、体液、细胞或者其组合。6一种定量检测MIRNA的芯片或试剂盒，其特征在于，所述的芯片或试剂盒特异性地检测MIR3615P或包含MIR3615P的MIRN

4、A组合。权利要求书CN104212895A1/5页3MIR3615P作为内参MIRNA在肿瘤诊断和监测中的应用技术领域0001本发明涉及分子生物学技术领域，具体地说，是MIR3615P作为内参MIRNA在肿瘤诊断和监测中的应用。背景技术0002微小核糖核酸MICRORNA，MIRNA是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，长约2025个核苷酸。MIRNA参与各种各样的调节途径，在肿瘤生成、增殖、代谢、凋亡中都发挥着极为重要的作用，在肿瘤诊断和监测等方面也有着广阔的发展前景。0003近年来已有多种方法被用于定量检测样本中的MIRNA，如QRTPCR、探针杂交和MICROARRAY等。上述方法会

5、因为样本中MIRNA的含量和质量、反应效率、以及试验操作等原因产生较大的误差，此时便需要采用内参MIRNA对这些方法的检测结果进行标准化来消除这些误差，因此上述方法的准确性很大程度上取决于所采用的内参MIRNA。并且在比较不同实验室及不同实验方法所取得的检测结果时，采用内参MIRNA对结果进行标准化也十分重要。0004理想的内参MIRNA需要在不同样本中均保持稳定的高表达。但目前仍缺乏对内参MIRNA的系统性评估与研究，内参MIRNA的选择仍主要依据传统经验，而研究已表明目前常用的内参MIRNA在不同情况下表达具有较大差异性，难以符合标准化的要求。因此，本领域迫切需要鉴定最佳内参的MIRNA，

6、以用于MIRNA检测结果的标准化。本发明提供目前还未见报道的最佳内参MIRNA。发明内容0005本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供MIR3615P的一种新用途。0006为实现上述目的，本发明采取的技术方案是MIR3615P作为内参MIRNA的应用。0007MIR3615P作为内参MIRNA在肿瘤诊断和监测中的应用。0008一种MIRNA标准化定量的方法，所述的方法包括以下步骤1测定样本中待测MIRNA的绝对浓度；2将步骤1获得的待测MIRNA的绝对浓度与样本中内参MIRNA的绝对浓度进行比较，从而获得待测MIRNA的相对浓度，所述的内参MIRNA为MIR3615P或包含MIR3615P的

7、MIRNA的组合。0009在步骤2中，将目的MIRNA的绝对浓度与样本中MIR3615P的绝对浓度进行比较。0010所述的样本为肿瘤组织、肿瘤患者血液、血浆、血清、体液、细胞或者其组合。0011一种定量检测MIRNA的芯片或试剂盒，所述的芯片或试剂盒特异性地检测MIR3615P或包含MIR3615P的MIRNA组合。0012本发明优点在于MIR3615P在多数肿瘤及对照正常组织中表达最为稳定，最适合作为内参MIRNA用于说明书CN104212895A2/5页4肿瘤MIRNA的检测结果的标准化。本发明提供的内参MIRNA、MIRNA标准化定量的方法、定量检测MIRNA的芯片或试剂盒可以使检测结果

8、标准化，值得广泛推广。附图说明0013附图1是MIR3615P在14种肿瘤中的表达情况。0014附图2是MIR3615P、其它部分MIRNA和常用内参在肺鳞癌、肺腺癌和食管癌中的QRTPCR检测结果。具体实施方式0015下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。0016本发明涉及的MIR3615P，对应序列为5UUAUCAGAAUCUCCAGGGGUAC3（如SEQNO1所示）。0017实施例1肿瘤MIRNA表达数据分析从TCGA数据库中获得肿瘤及正常对照组织的MIRNA测序结果，共包含14种常见肿瘤的589例正常对照组织和5727例肿瘤组织样本数据，见表1。对MATUREMIRNA和

9、STARMIRNA进行分类，去掉颈环、前体和未注释的数据，并按照MIRBASEV210的MIMAT序列号整理MATUREMIRNA和STARMIRNA，计算每种MIRNA的表达量，以RPM值表示。0018表1分析所纳入的14种常见肿瘤及相应正常组织和肿瘤组织样本数量随后参照其它对内参基因的研究，基于以下的标准鉴定每种肿瘤类型中最稳定高表达的MIRNA1MEANN100且MEANT100；2CVN复旦大学附属中山医院MIR3615P作为内参MIRNA在肿瘤诊断和监测中的应用/1PATENTINVERSION33122RNA智人HOMOSAPIENS1UUAUCAGAAUCUCCAGGGGUAC22序列表CN104212895A1/2页9图1说明书附图CN104212895A2/2页10图2说明书附图CN104212895A10