一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法.pdf

1、10申请公布号CN104072504A43申请公布日20141001CN104072504A21申请号201410266459622申请日20140616C07D491/0620060171申请人南京泽朗医药科技有限公司地址210046江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边108号05幢6楼72发明人刘东锋杨成东54发明名称一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法57摘要本发明属于天然药物化学领域，涉及一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法，具体包括如下步骤（1）将药材粉碎，采用回流提取；（2）经活性炭脱色和大孔树脂富集；（3）采用聚乙二醇/硫酸铵双水相体系分离得到莲叶桐碱粗品；（4）制备高效液相色谱分离

2、得莲叶桐碱对照品，高效液相色谱检测其质量分数大于98。本发明工艺简单、设备要求低、无污染、有毒溶剂用量少，成本低，适合规模化生产。51INTCL权利要求书1页说明书2页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书2页10申请公布号CN104072504ACN104072504A1/1页21一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法，其特征在于包括以下步骤（1）将莲叶桐茎粉碎，加90100乙醇回流提取34次，每次1小时，得提取液；（2）将上述提取液加活性炭，5070条件下保温脱色除杂，减压浓缩得浸膏，用少量乙醇溶解，上大孔吸附树脂吸附，46倍柱体积95乙醇溶液洗脱，至乙醇洗脱液

3、生物碱反应呈阴性，收集洗脱液，减压回收试剂，得莲叶桐提取物；（3）将莲叶桐提取物加入至聚乙二醇/硫酸铵双水相体系中，静置分相，得到上相和下相，将上相用乙酸乙酯反萃取，回收溶剂得到粗品；（4）将步骤（3）获得的浸膏经制备高效液相色谱分离，色谱柱C18，流动相甲醇水（7228），同步采用UV检测器监测流出曲线指导产品收集，收集液经浓缩干燥后得到淡黄色莲叶桐碱。2如权利要求1所述的一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法，其特征在于所述步骤（2）中大孔吸附树脂用量与药材量质量比为23，所述大孔树脂为D101或AB8型大孔树脂。3如权利要求1所述的一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法，其特征在于所述步骤（

4、3）中聚乙二醇分子量为6000，硫酸铵质量分数为25，聚乙二醇/硫酸铵双水相体系PH9。权利要求书CN104072504A1/2页3一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法技术领域0001本发明属于中药化学领域，涉及一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法。背景技术0002莲叶桐具有行气止痛、行血去瘀，用于治疗气滞腹痛、癌性疼痛、瘀血症等，其主要化学成分为木脂素和生物碱类。莲叶桐碱是莲叶桐科植物莲叶桐HERNANDIANYMPHAEIFOLIAPRESLKUBITZKI的主要活性成分之一，属于阿朴啡类生物碱。0003莲叶桐碱分子式为C18H11NO4，分子量为30529，结构式为现代药理研究表明，莲叶

5、桐碱对P388、KB16、A549和HT29细胞株有显著细胞毒活性，其ED50分别为0539G/ML、0640G/ML、0684G/ML和0474G/ML。开发简单实用、经济可行的莲叶桐碱的提取纯化工艺，对确保该对照品的质量稳定和供应充足，确保莲叶桐药材、提取物、配方颗粒和含莲叶桐制剂的质量得到有效控制和合理评价具有重要意义。发明内容0004本发明的目的是提供一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法。0005为实现上述目的，本发明采用以下技术方案一种从莲叶桐中提取纯化莲叶桐碱的方法，其特征在于包括以下步骤（1）将莲叶桐茎粉碎，加90100乙醇回流提取34次，每次1小时，得提取液；（2）将上述提取液

6、加活性炭，5070条件下保温脱色除杂，减压浓缩得浸膏，用少量乙醇溶解，上大孔吸附树脂吸附，46倍柱体积95乙醇溶液洗脱，至乙醇洗脱液生物碱反应呈阴性，收集洗脱液，减压回收试剂，得莲叶桐提取物；（3）将莲叶桐提取物加入至聚乙二醇/硫酸铵双水相体系中，静置分相，得到上相和下相，将上相用乙酸乙酯反萃取，回收溶剂得到粗品；（4）将步骤（3）获得的浸膏经制备高效液相色谱分离，色谱柱C18，流动相甲醇水（7228），同步采用UV检测器监测流出曲线指导产品收集，收集液经浓缩干燥后得到淡黄色莲叶桐碱。0006所述步骤（2）中大孔吸附树脂用量与药材量质量比为23，所述大孔树脂为D101或AB8型大孔树脂。说明书

7、CN104072504A2/2页40007所述步骤（3）中聚乙二醇分子量为6000，硫酸铵质量分数为25，聚乙二醇/硫酸铵双水相体系PH9。0008本发明工艺简单、设备要求低、无污染、有毒溶剂用量少，成本低，适合规模化生产。0009下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。0010具体实施方式实施例1取10KG干燥的莲叶桐茎，加95乙醇回流提取3次，每次1小时，所得提取液加入1的活性炭于60条件下保温脱色20分钟，过滤得到脱色液，减压浓缩得浸膏，用少量乙醇溶解，上D101大孔吸附树脂吸附，5倍柱体积95乙醇溶液洗脱，至乙醇洗脱液生物碱反应呈阴性，收集

8、洗脱液，减压回收试剂，得莲叶桐提取物，加入聚乙二醇/硫酸铵双水相体系（聚乙二醇分子量为6000，硫酸铵质量分数为25，聚乙二醇/硫酸铵双水相体系PH9），于超声清洗机中，功率220W下超声混匀5分钟，静置分层，得到上相和下相，将上相用乙酸乙酯反萃取，回收溶剂得到粗品，加甲醇溶解，微孔滤膜（045M）过滤，经制备高效液相色谱，色谱柱C18，流动相甲醇水（7228，体积比），同步采用UV检测器监测流出曲线指导产品收集，收集液经浓缩干燥后得到淡黄色莲叶桐碱，质量分数为994。0011实施例2取10KG干燥的莲叶桐茎，加乙醇回流提取4次，每次1小时，所得提取液加入1的活性炭于70条件下保温脱色20分钟

9、，过滤得到脱色液，减压浓缩得浸膏，用少量乙醇溶解，上AB8大孔吸附树脂吸附，4倍柱体积95乙醇溶液洗脱，至乙醇洗脱液生物碱反应呈阴性，收集洗脱液，减压回收试剂，得莲叶桐提取物，加入聚乙二醇/硫酸铵双水相体系（聚乙二醇分子量为6000，硫酸铵质量分数为25，聚乙二醇/硫酸铵双水相体系PH9），于超声清洗机中，功率220W下超声混匀5分钟，静置分层，得到上相和下相，将上相用乙酸乙酯反萃取，回收溶剂得到粗品，加甲醇溶解，微孔滤膜（045M）过滤，经制备高效液相色谱，色谱柱C18，流动相甲醇水（7228，体积比），同步采用UV检测器监测流出曲线指导产品收集，收集液经浓缩干燥后得到淡黄色莲叶桐碱，质量分

10、数为982。0012实施例3取10KG干燥的莲叶桐茎，加90乙醇回流提取3次，每次1小时，所得提取液加入1的活性炭于70条件下保温脱色20分钟，过滤得到脱色液，减压浓缩得浸膏，用少量乙醇溶解，上D101大孔吸附树脂吸附，6倍柱体积95乙醇溶液洗脱，至乙醇洗脱液生物碱反应呈阴性，收集洗脱液，减压回收试剂，得莲叶桐提取物，加入聚乙二醇/硫酸铵双水相体系（聚乙二醇分子量为6000，硫酸铵质量分数为25，聚乙二醇/硫酸铵双水相体系PH9），于超声清洗机中，功率220W下超声混匀5分钟，静置分层，得到上相和下相，将上相用乙酸乙酯反萃取，回收溶剂得到粗品，加甲醇溶解，微孔滤膜（045M）过滤，经制备高效液相色谱，色谱柱C18，流动相甲醇水（7228，体积比），同步采用UV检测器监测流出曲线指导产品收集，收集液经浓缩干燥后得到淡黄色莲叶桐碱，质量分数为997。说明书CN104072504A