一种尾巨桉组培苗简易移栽方法.pdf

1、(10)申请公布号 CN 102524074 A (43)申请公布日 2012.07.04 CN 102524074 A *CN102524074A* (21)申请号 201210024923.1 (22)申请日 2012.02.06 A01H 4/00(2006.01) (71)申请人 湛江师范学院 地址 524000 广东省湛江市赤坎区寸金路 29 号湛江师范学院 (72)发明人 曾富华 欧阳乐军 黄真池 (74)专利代理机构 广州市南锋专利事务所有限 公司 44228 代理人 刘广生 (54) 发明名称 一种尾巨桉组培苗简易移栽方法 (57) 摘要 本发明公开了一种尾巨桉组培苗简易移栽方

2、 法。本发明包括以下步骤 ：（1） 、 将生根良好的组 培苗和培养瓶一起从恒温光照培养箱移至室外自 然环境中炼苗 ；（2） 、 炼苗完成后， 用镊子将培养 瓶内的组培苗取出， 用无菌水将组培苗根系上的 琼脂漂洗干净 ；（3） 、 将漂洗干净的组培苗置于高 锰酸钾溶液中浸泡 30 秒， 取出后， 用无菌水漂洗 ； （4） 、 将漂洗后的组培苗移植入栽培基质中， 植入 时以栽培基质覆盖住组培苗的根系即可 ；（5） 、 移 植完成后， 用多菌灵喷一次组培苗， 以湿润栽培基 质上部 1/3 1/2 即可 ；（6） 、 对组培苗保湿保温， 直至组培苗新芽萌发 ；（7） 、 组培苗新芽萌发一个 星期后，

3、移入田间栽培。 本发明的移栽成活率可以 达到 98% 以上。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 1/1 页 2 1. 一种尾巨桉组培苗简易移栽方法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： （1） 、 将生根良好的组培苗和培养瓶一起从恒温光照培养箱移至室外自然环境中炼 苗 ； （2） 、 炼苗完成后， 用镊子将培养瓶内的组培苗取出， 用无菌水将组培苗根系上的琼脂 漂洗干净 ； （3） 、 将漂洗干净的组培苗置于高锰酸钾溶液中浸泡 30 秒， 取出后， 用无菌水漂洗 ； （4） 、

4、将漂洗后的组培苗移植入栽培基质中， 植入时以栽培基质覆盖住组培苗的根系即 可 ； （5） 、 移植完成后， 用多菌灵喷一次组培苗， 以湿润栽培基质上部 1/3 1/2 即可 ； （6） 、 对组培苗保湿保温， 直至组培苗新芽萌发 ； （7） 、 组培苗新芽萌发一个星期后， 移入田间栽培。 2. 按照权利要求 1 所述的一种尾巨桉组培苗简易移栽方法， 其特征在于 ： 在步骤 （1） 中， 炼苗时间为 10 15 天。 3. 按照权利要求 1 所述的一种尾巨桉组培苗简易移栽方法， 其特征在于 ： 所述的高锰 酸钾溶液的质量百分比浓度为 0.1%。 4. 按照权利要求 1 所述的一种尾巨桉组培苗简易

5、移栽方法， 其特征在于 ： 在步骤 （3） 中， 无菌水漂洗时间为 1 分钟。 5. 按照权利要求 1 所述的一种尾巨桉组培苗简易移栽方法， 其特征在于 ： 所述的栽培 基质由黄心土与腐殖土组成， 黄心土与腐殖土的质量比例为 2 1。 6. 按照权利要求 5 所述的一种尾巨桉组培苗简易移栽方法， 其特征在于 ： 在步骤 （4） 中， 先将所述的栽培基质置于高压灭菌锅中 121灭菌 50min， 待栽培基质冷却后再移植组 培苗。 7. 按照权利要求 1 所述的一种尾巨桉组培苗简易移栽方法， 其特征在于 ： 所述的多菌 灵的质量百分比浓度为 0.25%。 8. 按照权利要求 1 所述的一种尾巨桉组

6、培苗简易移栽方法， 其特征在于， 在步骤 （6） 中， 对组培苗进行保湿保温的具体步骤为 ： 用透明塑料袋套住移栽组培苗的花盆， 花盆边缘 四周用四根玻璃棒支撑塑料袋以形成一定的空间， 用橡皮筋扎紧花盆外缘塑料袋以保湿， 温度维持在 26 30。 权 利 要 求 书 CN 102524074 A 2 1/3 页 3 一种尾巨桉组培苗简易移栽方法 技术领域 0001 本发明涉及植物组织培养的技术领域， 特别是涉及一种尾巨桉转基因组织培养生 根苗的一种简易移栽方法。 背景技术 0002 桉树 ( E. ucalyptus) 主要是桃金娘科 (M. grtaceae) 桉属 ( E. ucalypt

7、us) 植 物的统称， 是世界三大速生树种之一。尾巨桉 (E. urophyllaE. grandis) 是尾叶桉 (E. urophylla) 与巨桉 (E.grandis) 的杂交种， 具有明显的杂种优势， 其树干通直、 均匀， 具有 适应性广、 耐寒性强， 速生丰产等优点， 是优良的工业材料， 其种植面积已占到了桉树人工 林面积的 40%， 成为我国南方热带、 亚热带地区最重要的速生丰产造林树种之一。近年来， 随着桉树人工林种植面积的不断扩大和新品种的引进， 桉树病害爆发频繁， 给生产带来巨 大的损失。桉树病害至今已发现有 33 种， 其中叶部病害 20 种， 枝干病害 4 种， 根部病

8、害 5 种， 苗期病害 4 种， 在这些病害中， 青枯病、 猝倒病、 灰霉病、 白绢病、 褐斑病、 紫斑病、 溃疡病 等是我国桉树的常见病害。 传统育种方法虽然能利用作物本身或亲缘种的抗性基因选育抗 病品种， 但存在着可利用的抗性品种资源少， 选育时间长， 耗资大等缺点。施用化学药剂来 防治桉树病害并非完全有效， 而且污染环境， 易使病原物产生耐药性等。 0003 近年来植物基因工程技术的不断发展以及对植物和病原物相互作用的逐渐了解， 使得将外源抗性基因导入植物来提高抗病性成为一条有效途径。 通过转基因技术可以打破 传统育种中种间不亲和现象， 消除杂交障碍， 极大地拓宽了抗性基因的来源。 基因

9、工程育种 可以通过外源基因的导入， 针对目标性状进行改良， 具有快速性和定向性。因此， 通过基因 工程技术培育具有青枯菌抗性在内的广谱抗性的桉树新品种， 可提高桉树单位面积产量、 改善产品品质、 减少农药的用量， 具有重要的经济效益和生态效益。 0004 建立高效稳定的植物再生和遗传转化体系是转基因的关键， 而再生体系的建立又 以高的移栽成活率为前提。在组培苗的培育过程中， 尾巨桉苗从无菌室被移栽到外界环境 时， 由于各种因素的影响， 使得移栽成活率受到很大的影响， 严重时成活率为零。影响尾巨 桉组培苗移栽成活率的因素很多， 主要包括器官结构、 生理功能和外界环境三个方面。 0005 器官结构

10、方面， 有些组培苗的根无根毛或有很少根毛， 或是其输导系统与茎的输 导系统不连通， 移栽以后， 根系吸收的水分和养分满足不了植物本身的需求。 叶片部分主要 包括组培苗叶表角质层、 蜡质层不发达或无 ； 叶面无表皮毛或极少 ； 叶组织间隙大， 栅栏组 织薄， 易失水导致植株死亡。 另外， 由于组培苗幼嫩， 结构较松散且含水量高， 机械组织很不 发达极易发生机械损伤， 对病虫害的抵抗力又很弱， 组培苗移栽以后容易导致茎叶甚至整 株死亡。 0006 生理功能方面， 移栽前组培苗所需要的营养主要从培养基中获得， 光合作用效率 低下， 在这种情况下， 叶片中的叶绿素含量很低， 并且光合作用能力很弱。组培

11、苗移栽以后 会因为得不到足够的有机营养而死亡， 从而不利于移栽成活。 0007 外界环境方面， 主要包括温度、 湿度、 光照、 微生物等因素。 转化植株由于被转入了 说 明 书 CN 102524074 A 3 2/3 页 4 外源基因， 在器官结构、 生理和生化方面与未转化的再生苗存在着一定的差异， 同时又由于 从子叶预培养到得到转基因苗的培养时间与单纯再生得到组培苗的时间相比明显延长。 长 时间的高湿度生长环境影响了转基因苗叶片的形态结构， 如角质层变薄、 气孔调节失灵， 从 而导致转基因苗移栽后散失的水分多于吸收的水分， 对外界环境的变化所做出的反应也相 应较大， 因此， 对转基因苗来说

12、， 移栽成活变得更加因难。 0008 综上所述， 关于尾巨桉遗传转化过程中组培苗移栽方法偶见国内外文献， 但不系 统， 未见简便有效的组培生根苗移栽管理方法的研究报道。 发明内容 0009 本发明需要解决的技术问题在于提供一种尾巨桉组培苗简易移栽方法， 以提高尾 巨桉转基因组培苗的移栽成活率。 0010 为解决上述技术问题， 本发明采用的技术方案为 ： 一种尾巨桉组培苗简易移栽方 法， 包括以下步骤 ： （1） 、 将生根良好的组培苗和培养瓶一起从恒温光照培养箱移至室外自然环境中炼 苗 ； （2） 、 炼苗完成后， 用镊子将培养瓶内的组培苗取出， 用无菌水将组培苗根系上的琼脂 漂洗干净 ； （

13、3） 、 将漂洗干净的组培苗置于高锰酸钾溶液中浸泡 30 秒， 取出后， 用无菌水漂洗 ； （4） 、 将漂洗后的组培苗移植入栽培基质中， 植入时以栽培基质覆盖住组培苗的根系即 可 ； （5） 、 移植完成后， 用多菌灵喷一次组培苗， 以湿润栽培基质上部 1/3 1/2 即可 ； （6） 、 对组培苗保湿保温， 直至组培苗新芽萌发 ； （7） 、 组培苗新芽萌发一个星期后， 移入田间栽培。 0011 优选的， 在步骤 （1） 中， 炼苗时间为 10 15 天。 0012 优选的， 所述的高锰酸钾溶液的质量百分比浓度为 0.1%。 0013 优选的， 在步骤 （3） 中， 无菌水漂洗时间为 1

14、分钟。 0014 优选的， 所述的栽培基质由黄心土与腐殖土组成， 黄心土与腐殖土的质量比例为 2 1。 0015 优选的， 在步骤 （4） 中， 先将所述的栽培基质置于高压灭菌锅中 121灭菌 50min， 栽培基质冷却后再移植组培苗。 0016 优选的， 所述的多菌灵的质量百分比浓度为 0.25%。 0017 优选的， 在步骤 （6） 中， 对组培苗进行保湿保温的具体步骤为 ： 用透明塑料袋套住 移栽组培苗的花盆， 花盆边缘四周用四根玻璃棒支撑塑料袋以形成一定的空间， 用橡皮筋 扎紧花盆外缘塑料袋以保湿， 温度维持在 26 30。 0018 由于采用了上述的方法， 本发明具有下述的有益效果

15、： （l） 操作简便， 容易实施， 实用性强。 0019 （2） 管理容易， 成本低廉， 移栽成活率可以达到 98% 以上。 具体实施方式 说 明 书 CN 102524074 A 4 3/3 页 5 0020 本发明所述的一种尾巨桉组培苗简易移栽方法， 具体包括以下步骤 ： （1） 、 将生根良好的转基因尾巨桉组培苗和培养瓶一起从恒温光照培养箱移至室外自 然环境中炼苗， 炼苗时间为 10 15 天。 0021 （2） 、 炼苗完成后， 用镊子将培养瓶内的组培苗取出， 用无菌水将组培苗根系上的 琼脂漂洗干净， 无菌水漂洗时间为 1 2 分钟。 0022 （3） 、 将漂洗干净的组培苗置于高锰酸

16、钾溶液中浸泡 30 秒， 高锰酸钾溶液的质量 百分比浓度为 0.1%， 浸泡后取出组培苗， 用无菌水漂洗 1 分钟， 漂洗后的组培苗置于搪瓷盘 上。 0023 （4） 、 将漂洗后的组培苗移植入栽培基质中。所述的栽培基质由黄心土 （或山地红 壤） 与腐殖土组成， 黄心土与腐殖土的质量比例为 2 1。植入时， 先将栽培基质装于花盆 当中， 浇透水， 然后置于高压灭菌锅中 121灭菌 50min。待灭菌栽培基质冷却后， 将组培苗 移植入栽培基质中， 以栽培基质轻轻覆盖住组培苗的根系即可。 0024 （5） 、 移植完成后， 用质量百分比浓度为 0.25% 的多菌灵喷一次组培苗， 以湿润栽 培基质上

17、部 1/3 1/2 即可。 0025 （6） 、 对组培苗保湿保温， 直至组培苗新芽萌发。对组培苗进行保湿保温的具体步 骤为 ： 用透明塑料袋套住移栽组培苗的花盆， 花盆边缘四周用四根玻璃棒支撑塑料袋以形 成一定的空间， 用橡皮筋扎紧花盆外缘塑料袋以保湿， 温度维持在 26 30 ， 2 周后可 见新芽萌发， 此时除去塑料袋。 0026 （7） 、 组培苗新芽萌发一个星期后， 尾巨桉组培苗生长正常， 移入田间栽培。 0027 总之， 本发明虽然例举了上述优选实施方式， 但是应该说明， 虽然本领域的技术人 员可以进行各种变化和改型， 除非这样的变化和改型偏离了本发明的范围， 否则都应该包 括在本发明的保护范围内。 说 明 书 CN 102524074 A 5