荨麻提取物的提取方法.pdf

1、(10)授权公告号 CN 102512463 B (45)授权公告日 2014.04.16 CN 102512463 B (21)申请号 201210003786.3 (22)申请日 2012.01.06 A61K 36/185(2006.01) A61P 13/08(2006.01) A61P 9/12(2006.01) (73)专利权人 吉林省宏久生物科技股份有限公 司 地址 135118 吉林省通化市辉南县平安川开 发区 (72)发明人 冯涛 金爱玉 白凤英 (74)专利代理机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 代理人 逯长明 闵勇， 等 . 荨麻属植物的研究进展 .时珍国

2、医国药 .2010, 第 21 卷 ( 第 9 期 ), 第 2345-2346 页， 参见 “2.2 抑制前列腺炎” . 宋学伟, 等.球面对称设计优化荨麻多糖的 提取工艺 .中草药 .2006, 第 37 卷 ( 第 9 期 ), 第 1344-1345 页， 参见 “2.1 粗多糖的提取与精 制” . 贺帅， 等 . 应用超高压技术提取元胡中延胡 索乙素的研究 .中药材 .2010, 第 33 卷 ( 第 1 期 ), 第 137-140 页， 参见摘要 . (54) 发明名称 荨麻提取物的提取方法 (57) 摘要 本发明涉及医药技术领域， 特别涉及荨麻提 取物的提取方法。该提取方法获得

3、的荨麻提取物 的收率为 46.5 49.6， 可以用于制备治疗前 列腺炎、 前列腺肥大、 前列腺良性增生或高血压药 物。本发明提供的荨麻提取物能够有效治疗前 列腺炎、 前列腺肥大、 前列腺良性增生或高血压。 其对急性前列腺炎的有效率为 93.33， 对慢性 前列腺炎的有效率为 90.33， 对前列腺肥大的 有效率为 89.0， 对前列腺良性增生的有效率为 90.67， 对高血压的有效率为 91.0。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 束云 权利要求书 1 页 说明书 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书5页 (10)授权公告号

4、CN 102512463 B CN 102512463 B 1/1 页 2 1. 一种荨麻提取物的提取方法， 其特征在于， 包括如下步骤 ： 步骤 1 ： 取荨麻加过量水在 300 500MPa、 15 35的条件下超高压提取 8 10min， 过滤后收集滤液， 经第一浓缩至相对密度为 1.12 1.15， 获得第一浸膏 ； 步骤2 ： 取所述第一浸膏在35透析后， 收集保留液， 与氯仿和正丁醇的混合溶液经 sevage 法脱蛋白， 收集水层， 经第二浓缩至相对密度为 1.12 1.15， 获得第二浸膏 ； 步骤 3 ： 取所述第二浸膏加入浓度为 80 95% 的乙醇醇沉 20 24h， 离心

5、后收集沉渣， 加入水搅拌溶解， 经第三浓缩至相对密度为 1.12 1.18， 获得第三浸膏， 过滤后收集滤液， 即得 ； 以 g/mL 计， 所述第二浸膏与乙醇的质量体积比为 1 3， 所述沉渣与水的质量体积比 为 1:3 7。 2. 根据权利要求 1 所述的提取方法， 其特征在于， 步骤 1 中， 以 g/mL 计， 所述荨麻与水 的质量体积比为 1:10 15。 3. 根据权利要求 1 所述的提取方法， 其特征在于， 所述透析选用 22mm 半透膜。 4. 根据权利要求 1 所述的提取方法， 其特征在于， 所述第一浓缩、 第二浓缩或第三浓缩 为在 70 80， 真空度为 0.06MPa 的

6、条件下浓缩。 5. 根据权利要求 1 所述的提取方法， 其特征在于， 所述混合溶液中氯仿和正丁醇的体 积比为 5:1。 6.根据权利要求1所述的提取方法， 其特征在于， 步骤2中所述保留液与所述混合溶液 的体积比为 1:1。 7. 根据权利要求 1 所述的提取方法， 其特征在于， 步骤 2 中所述收集水层后、 所述第二 浓缩前还包括经 300 目滤布过滤的步骤。 8.根据权利要求1所述的提取方法， 其特征在于， 步骤3中所述离心为在3000rpm的条 件下离心 15min。 9. 根据权利要求 1 至 8 提供的提取方法获得的荨麻提取物。 10. 根据权利要求 9 所述的荨麻提取物在制备治疗前

7、列腺炎、 前列腺良性增生或高血 压药物中的应用。 权 利 要 求 书 CN 102512463 B 2 1/5 页 3 荨麻提取物的提取方法 技术领域 0001 本发明涉及医药技术领域， 特别涉及荨麻提取物的提取方法。 背景技术 0002 荨麻是荨麻科荨麻多年野生草本植物， 该植物为传统的药食同用的野生植物， 其 富含蛋白质、 多糖、 黄酮类化合物、 氨基酸等成分。 该植物幼嫩时可做山野菜食用， 花期后具 有药用价值。荨麻具有祛风定惊， 消食通便的功效， 用于风湿关节痛， 产后抽风， 小儿惊风， 小儿麻痹后遗症， 高血压， 消化不良， 大便不通 ； 外用治荨麻疹初起， 蛇咬伤。 现代研究证明，

8、 荨麻对男性前列腺良性增生有很好的疗效。 临床治疗上， 荨麻早已被应用于治疗荨麻疹、 风 湿关节痛， 采用现代科学技术深加工， 将其所含的多糖活性成分提取出来， 用于前列腺炎， 前列腺肥大， 前列腺良性增生， 高血压等方面的治疗， 有很好的疗效。 0003 目前的提取工艺获得的荨麻提取物收率不高， 因此， 提供一种荨麻提取物的提取 方法， 具有现实意义。 发明内容 0004 有鉴于此， 本发明提供一种荨麻提取物的提取方法。该提取方法获得的荨麻提取 物的收率为 46.5 49.6， 可以用于制备治疗前列腺炎、 前列腺肥大、 前列腺良性增生或 高血压药物。 0005 为了实现上述发明目的， 本发明

9、提供以下技术方案 ： 0006 本发明提供了一种荨麻提取物的提取方法， 包括如下步骤 ： 0007 步骤 1 ： 取荨麻加过量水在 300 500MPa、 15 35的条件下超高压提取 8 10min， 过滤后收集滤液， 经第一浓缩至相对密度为 1.12 1.15(70 80 )， 获得第一浸 膏 ； 0008 步骤2 ： 取所述第一浸膏在35透析后， 收集保留液， 与氯仿和正丁醇的混合溶 液经 sevage 法脱蛋白， 收集水层， 经第二浓缩至相对密度为 1.12 1.15(70 80 )， 获 得第二浸膏 ； 0009 步骤 3 ： 取所述第二浸膏加入浓度为 80 95的乙醇醇沉 20 2

10、4h， 离心后收集 沉渣， 加入水搅拌溶解， 经第三浓缩至相对密度为 1.12 1.18(70 80 )， 获得第三浸 膏， 过滤后收集滤液， 即得 ； 以 g/mL 计， 所述第二浸膏与乙醇的质量体积比为 1 3， 所述沉 渣与水的质量体积比为 1 3 7。 0010 所述相对密度为物质在 70 80的密度和水在 70 80的密度的比值。 0011 Sevage 法 ： 利用蛋白质在三氯乙烷等有机溶剂中变性的特点， 将提取液与 Sevage 试剂 氯仿正丁醇 5 1(V/V) 按照体积比为 1 1 混合， 振荡， 离心， 变性后的蛋白 质介于提取液与 Sevage 试剂交界处。此法的优点是条

11、件温和， 不会引起多糖的变性。 0012 在本发明提供的实施例中， 本发明提供的荨麻提取物的提取方法， 步骤 1 中， 以 g/ mL 计， 所述荨麻与水的质量体积比为 1 10 15。 说 明 书 CN 102512463 B 3 2/5 页 4 0013 在本发明提供的实施例中， 本发明提供的荨麻提取物的提取方法， 所述透析选用 22mm 半透膜。 0014 在本发明提供的实施例中， 本发明提供的荨麻提取物的提取方法， 所述第一浓缩、 第二浓缩或第三浓缩为在 70 80， 真空度为 0.06MPa 的条件下浓缩。 0015 在本发明提供的实施例中， 本发明提供的荨麻提取物的提取方法， 所述

12、混合溶液 中氯仿和正丁醇的体积比为 5 1。 0016 在本发明提供的实施例中， 本发明提供的荨麻提取物的提取方法， 步骤 2 中所述 保留液与所述混合溶液的体积比为 1 1。 0017 在本发明提供的实施例中， 本发明提供的荨麻提取物的提取方法， 步骤 2 中所述 收集水层后、 所述第二浓缩前还包括经 300 目滤布过滤的步骤。 0018 在本发明提供的实施例中， 本发明提供的荨麻提取物的提取方法， 步骤 3 中所述 离心为在 3000rpm 的条件下离心 15min。 0019 在本发明提供的实施例中， 本发明提供的荨麻提取物的提取方法， 步骤 3 过滤收 集滤液后， 还包括喷雾干燥的步骤

13、 ； 喷雾干燥的进风温度为 120， 出风温度为 80。 0020 本发明还提供了上述提取方法获得的荨麻提取物。 0021 本发明还提供了上述提取方法获得的荨麻提取物在制备治疗前列腺炎、 前列腺肥 大、 前列腺良性增生或高血压药物中的应用。 0022 本发明提供了一种荨麻提取物的提取方法。该提取方法获得的荨麻提取物的收率 为46.549.6， 可以用于制备治疗前列腺炎、 前列腺肥大、 前列腺良性增生或高血压药物。 本发明提供的荨麻提取物能够有效治疗前列腺炎、 前列腺肥大、 前列腺良性增生或高血压。 其 对急性前列腺炎的有效率为 93.33， 对慢性前列腺炎的有效率为 90.33， 对前列腺肥大

14、的 有效率为 89.0， 对前列腺良性增生的有效率为 90.67， 对高血压的有效率为 91.0。 具体实施方式 0023 本发明公开了一种荨麻提取物的提取方法， 本领域技术人员可以借鉴本文内容， 适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是， 所有类似的替换和改动对本领域技术人员来 说是显而易见的， 它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例 进行了描述， 相关人员明显能在不脱离本发明内容、 精神和范围内对本文所述的方法和应 用进行改动或适当变更与组合， 来实现和应用本发明技术。 0024 本发明提供的荨麻提取物的提取方法中， 所用原料及试剂均可由市场购得。 0025 下面结合

15、实施例， 进一步阐述本发明 ： 0026 实施例 1 荨麻提取物的制备 0027 取狭叶荨麻药材 100g， 粉碎后加 15 倍量水， 超高压力为 300MPa， 15提取 10 分 钟， 提取液过滤， 在温度为 70， 真空度为 0.06MPa 的条件下浓缩至相对密度 1.12(70 )， 将浓缩液放凉后， 装入 22mm 半透膜的透析袋中， 置于盛有磷酸缓冲液的不锈钢桶中， 在 5 下进行透析， 除去盐分及一些小分子杂质， 期间更换缓冲液 3-4 次。取透析袋中的保留液， 用sevage法脱蛋白， 除去中间白色絮状沉淀， 取水层在温度为70， 真空度为0.06MPa的条 件下浓缩至相对密度

16、为 1.12(70 )， 获得浸膏 52g， 加入 1 倍量 95乙醇醇沉， 静置 20 小 时， 收集沉渣离心， 回收乙醇， 再加入 3 倍量水搅拌溶解， 在温度为 70， 真空度为 0.06MPa 说 明 书 CN 102512463 B 4 3/5 页 5 的条件下浓缩至相对密度 1.12(70 )， 过滤， 喷雾干燥， 即得荨麻提取物 5.1g。 0028 对获得的荨麻提取物进行检测， 结果如下 ： 0029 荨麻多糖的鉴别 ： 鉴别方法为苯酚 - 硫酸试剂反应 ( 阳性 )， 本发明提供的荨麻提 取物中含有荨麻多糖。 0030 荨麻多糖含量 ： 46.5 ( 用苯酚 - 硫酸法测定

17、) 0031 荨麻多糖分子量测定 ： 53010Da( 参考 2010 年药典二部附录 VH)。 0032 实施例 2 荨麻提取物的制备 0033 取荨麻药材 100g， 粉碎后加 10 倍量水， 超高压力为 500MPa， 35提取 8 分钟， 提取 液过滤， 在温度为80， 真空度为0.06MPa的条件下浓缩至相对密度1.15(80)， 将浓缩液 放凉后， 装入 22mm 半透膜的透析袋中， 置于盛有磷酸缓冲液的不锈钢桶中， 在 3下进行透 析， 除去盐分及一些小分子杂质， 期间更换缓冲液 3-4 次。取透析袋中的保留液， 用 sevage 法脱蛋白， 除去中间白色絮状沉淀， 取水层在温度

18、为 80， 真空度为 0.06MPa 的条件下浓缩 至相对密度为 1.15(80 )， 获得浸膏 54g， 加入 3 倍量 80乙醇醇沉， 静置 24 小时， 收集沉 渣离心， 回收乙醇， 再加入7倍量水搅拌溶解， 在温度为80， 真空度为0.06MPa的条件下浓 缩至相对密度 1.18(80 )， 过滤， 喷雾干燥， 即得荨麻提取物 5.5g。 0034 对获得的荨麻提取物进行检测， 结果如下 ： 0035 荨麻多糖的鉴别 ： 鉴别方法为苯酚 - 硫酸试剂反应 ( 阳性 )， 本发明提供的荨麻提 取物中含有荨麻多糖。 0036 荨麻多糖含量 ： 47.1 ( 用苯酚 - 硫酸法测定 ) 00

19、37 荨麻多糖分子量测定 ： 51980Da( 参考 2010 年药典二部附录 VH)。 0038 实施例 3 荨麻提取物的制备 0039 取荨麻药材 100g， 粉碎后加 13 倍量水， 超高压力为 400MPa， 25提取 9 分钟， 提取 液过滤， 在温度为73， 真空度为0.06MPa的条件下浓缩至相对密度1.13(70)， 将浓缩液 放凉后， 装入 22mm 半透膜的透析袋中， 置于盛有磷酸缓冲液的不锈钢桶中， 在 4下进行透 析， 除去盐分及一些小分子杂质， 期间更换缓冲液 3-4 次。取透析袋中的保留液， 用 sevage 法脱蛋白， 除去中间白色絮状沉淀， 取水层在温度为 73

20、， 真空度为 0.06MPa 的条件下浓缩 至相对密度为 1.13(70 )， 获得浸膏 50g， 加入 1.5 倍量 90乙醇醇沉， 静置 22 小时， 收集 沉渣离心， 回收乙醇， 再加入5倍量水搅拌溶解， 在温度为73， 真空度为0.06MPa的条件下 浓缩至相对密度 1.15(70 )， 过滤， 喷雾干燥， 即得荨麻提取物 4.9g。 0040 对获得的荨麻提取物进行检测， 结果如下 ： 0041 荨麻多糖的鉴别 ： 鉴别方法为苯酚 - 硫酸试剂反应 ( 阳性 )， 本发明提供的荨麻提 取物中含有荨麻多糖。 0042 荨麻多糖含量 ： 46.8 ( 用苯酚 - 硫酸法测定 ) 0043

21、 荨麻多糖分子量测定 ： 56850Da( 参考 2010 年药典二部附录 VH)。 0044 实施例 4 荨麻提取物的制备 0045 取狭叶荨麻药材 100g， 粉碎后加 12 倍量水， 超高压力为 350MPa， 30提取 8 分钟， 提取液过滤， 在温度为 78， 真空度为 0.06MPa 的条件下浓缩至相对密度 1.14(80 )， 将 浓缩液放凉后， 装入 22mm 半透膜的透析袋中， 置于盛有磷酸缓冲液的不锈钢桶中， 在 5下 进行透析， 除去盐分及一些小分子杂质， 期间更换缓冲液 3-4 次。取透析袋中的保留液， 用 说 明 书 CN 102512463 B 5 4/5 页 6

22、sevage法脱蛋白， 除去中间白色絮状沉淀， 取水层在温度为78， 真空度为0.06MPa的条件 下浓缩至相对密度为 1.14(80 )， 获得浸膏 g， 加入 2.3 倍量 85乙醇醇沉， 静置 23 小时， 收集沉渣离心， 回收乙醇， 再加入4倍量水搅拌溶解， 在温度为78， 真空度为0.06MPa的条 件下浓缩至相对密度 1.16(80 )， 过滤， 喷雾干燥， 即得荨麻提取物 5.3g。 0046 对获得的荨麻提取物进行检测， 结果如下 ： 0047 荨麻多糖的鉴别 ： 鉴别方法为苯酚 - 硫酸试剂反应 ( 阳性 )， 本发明提供的荨麻提 取物中含有荨麻多糖。 0048 荨麻多糖含量

23、 ： 49.6 ( 用苯酚 - 硫酸法测定 ) 0049 荨麻多糖分子量测定 ： 57140Da( 参考 2010 年药典二部附录 VH)。 0050 实施例 5 药效评价 0051 试验组 ： 本发明实施例1至4提供的荨麻提取物， 对前列腺炎、 前列腺肥大、 前列腺 良性增生、 高血压各 300 名患者进行治疗 ； 每天服用三次， 每次服用 2 4g ； 0052 阳性药物对照组 ： 阳性药物对前列腺炎、 前列腺肥大、 前列腺良性增生、 高血压各 300 名患者进行治疗 ； 每天三次， 每次服用 4 8 片， 每片 0.5g。 0053 急性前列腺炎 ： 0054 治愈 ： 症状消失， 局部

24、肿胀消退， 无触痛， 连续 3 次以上前列腺液检查均为正常 ； 0055 有效 ： 症状改善， 但前列腺液常规检查仍达不到正常标准 ； 0056 无效 ： 治疗 1 周后， 症状体征仍无改善者。 0057 慢性前列腺炎 ： 0058 治愈 ： 自觉症状消失 ； 触诊时前列腺压痛消失， 质地变软或改善 ； 定位分段尿试验 正常 ； 前列腺液镜检白细胞数 10 个 /HPF， 细菌培养阴性， 并连续检查 2 次以上正常。 0059 有效 ： 自觉症状消失或部分症状改善、 消失 ； 触诊前列腺正常或改善 ； 前列腺液镜 检白细胞数仍 10 个 /HPF， 较治疗前有好转， 或细菌培养仍阳性。 006

25、0 无效 ： 症状和前列腺液镜检均无改善。 0061 前列腺肥大 ： 0062 痊愈 ： 主要临床症状消失， 排尿通畅， 尿流率参数正常或基本正常， 残尿量 20ml， 夜尿次数 2 次， 前列腺体积接近正常或较前缩小 1/4 以上 ； 0063 有效 ： 症状基本消失， 排尿自觉通畅， 尿流率参数接近正常， 残尿量 50ml 或较前 减少 1/2， 夜尿 3 次， 前列腺体积有缩小 ； 或尿流率参数较治疗前有改善， 残尿量少于治疗 前， 夜尿次数较前减少 ； 0064 无效 ： 症状无好转， 尿流率、 残尿量无改变。 0065 前列腺良性增生 (Benign Prostatic Hyperp

26、lasia， BPH) 是一个组织学名词， 指 发生于前列腺尿道周围区、 以基质和上皮细胞增生为特征的疾病过程。BPH 是老年男性最 常见的疾病之一。临床上通常表现为一系列令人烦恼的下尿路症状 (Low urinary tract symptoms， LUTS)， 包括 ： 尿频、 尿急、 夜尿、 尿流无力、 尿流中断和尿不尽感。 这些症状可通过 干扰病人的日常活动和夜间睡眠而影响其生活质量。 0066 疗效判定标准 ： 0067 痊愈 ： 临床症状消失， 体格检查、 直肠指诊、 尿液分析 90患者恢复正常。 0068 好转 ： 临床症状减轻， 体格检查、 直肠指诊、 尿液分析 60患者趋于正

27、常。 说 明 书 CN 102512463 B 6 5/5 页 7 0069 无效 ： 治疗前后， 临床症状和体格检查、 直肠指诊、 尿液分析等检查无改善或无明 显改善， 30患者趋于正常。 0070 高血压 ： 0071 疗效判定标准 ： 0072 痊愈 ： 90患者血压控制在 140/90mmHg 水平以下， 无明显临床症状 ； 0073 好转 ： 60患者血压控制在 140/90mmHg 水平以下， 临床症状减轻 ； 0074 无效 ： 30患者血压未达到 140/90mmHg 水平以下， 临床症状无改善或无明显改 善。 0075 0076 结果见表 1。 0077 表 1 本发明提供的

28、蛙皮提取物或蛙骨骼提取物药效试验 0078 0079 由表 1 结果可知， 本发明实施例 1 至 4 提供的荨麻提取物， 与阳性药物对照组 相比， 对急性前列腺炎的有效率由 78.0提高至 93.33 ； 对慢性前列腺炎的有效率由 74.67提高至 90.33 ； 对前列腺肥大的有效率由 78.33提高至 89.0 ； 对前列腺良性 增生的有效率由 75.67提高至 90.67 ； 对高血压的有效率由 73.33提高至 91.0， 差 异均具有显著性 (P 0.05)。 0080 综合上述结果， 本发明实施例 1 至 4 提供的荨麻提取物， 与阳性药物对照组相比， 显著提高了药效。 0081 以上所述仅是本发明的优选实施方式， 应当指出， 对于本技术领域的普通技术人 员来说， 在不脱离本发明原理的前提下， 还可以做出若干改进和润饰， 这些改进和润饰也应 视为本发明的保护范围。 说 明 书 CN 102512463 B 7