抗甲型流感病毒原料及制剂与涂料.pdf

1、(10)申请公布号 CN 102260235 A (43)申请公布日 2011.11.30 CN 102260235 A *CN102260235A* (21)申请号 201010199781.3 (22)申请日 2010.06.13 C07D 309/30(2006.01) A01N 43/16(2006.01) A01P 1/00(2006.01) C09D 133/00(2006.01) C09D 5/14(2006.01) (71)申请人 徐友志 地址 222000 江苏省连云港市海州区锦屏镇 朐山 13 号楼源吉微生物研究所 (72)发明人 徐友志 陈佑龙 (74)专利代理机构 南京

2、众联专利代理有限公司 32206 代理人 刘喜莲 (54) 发明名称 抗甲型流感病毒原料及制剂与涂料 (57) 摘要 一种抗甲型流感病毒原料， 其特征在于， 它采 用以下方法制成 ： 它以 MEG 树脂为原料进行蒸馏， 提取 200-220馏份， 得淡黄色油状液体， 冷却后 投入反应釜中， 缓慢升温至 70-80， 再进行保温 并开动搅拌， 缓慢滴加磷酸或盐酸进行水解反应， 至反应物料无分层并呈透明状， 即制得 MEG 消毒 剂。本发明还公开了一种用该抗甲型流感病毒原 料制成的制剂与涂料。本发明抗甲型流感病毒原 料是一种空气或界面消毒剂， 主要用于抗甲流环 境的治理， 抗甲型流感病毒制剂、 涂

3、料可以配合使 用于大型畜牧场、 医院和公共场所的空间及墙壁、 顶棚、 地面等各个界面， 阻断人畜之间的交叉感 染， 能够从病原体的源点到人类的公共环境， 系统 地预防和控制疫情的传播蔓延。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 2 页 说明书 10 页 附图 2 页 CN 102260239 A1/2 页 2 1. 一种抗甲型流感病毒原料， 其特征在于， 它采用以下方法制成 ： 它以 MEG 树脂为原 料进行蒸馏， 提取 200-220馏份， 得淡黄色油状液体， 冷却后投入反应釜中， 缓慢升温至 70-80， 再进行保温并开动搅拌， 缓

4、慢滴加磷酸或盐酸进行水解反应， 至反应物料无分层 并呈透明状， 即制得抗甲型流感病毒原料 MEG 消毒剂。 2.根据权利要求1所述的一种抗甲型流感病毒原料， 其特征在于 ： 搅拌的转速为40-60 转 /min。 3.一种抗甲型流感病毒制剂， 其特征在于， 它由水与权利要求1或2所述的MEG消毒剂 混合溶解制成， 且 MEG 消毒剂占制剂的重量百分比为 0.5-3。 4.权利要求1或2所述的抗甲型流感病毒原料在制备抗甲型流感病毒消毒制剂中的用 途。 5. 一种抗甲型流感病毒的水性内墙涂料， 其特征在于， 它以水性白浆和调漆料混合制 成， 调漆料以权利要求 1 或 2 所述的 MEG 消毒剂作为

5、功能基料 ； 水性白浆的各原料重量配比为 ： 水 140-160 ； 增稠剂 5-9 ； 氨水 1-2 ； 分散剂 5-7 ； 润湿剂 1-2 ； 消泡剂 1-3 ； 钛白粉 180-220 ； 高岭土 70-90 ； 重质碳酸钙 150-190 ； 调漆料的各原料重量配比为 ： MEG 消毒剂 40-60 ； 丙烯酸乳液 230-280 ； 成膜助剂 12-17 ； 丙二醇 12-17 ； 增稠剂 8-12 ； 消泡剂 1-3 防腐剂 1-3 ； 水 30-50 ； 其中， 水性白浆与调漆料之间按重量比 5-7 10 进行混合调配。 6. 根据权利要求 5 所述的抗甲型流感病毒的水性内墙涂料

6、， 其特征在于， 水性白浆的各原料重量配比为 ： 水 150 ； 增稠剂 7 ； 氨水 1.5 ； 分散剂 6 ； 润湿剂 1.5 ； 消泡剂 2 ； 钛白粉 200 ； 高岭土 80 ； 重质碳酸钙 170 ； 调漆料的各原料重量配比为 ： MEG 消毒剂 50 ； 丙烯酸乳液 250 ； 成膜助剂 15 ； 丙二醇 15 ； 增稠剂 10 ； 消泡剂 2 防腐剂 2 ； 水 38 ； 其中， 水性白浆与调漆料之间按重量比 6 10 进行调配。 7. 一种抗甲型流感病毒的水性地板涂料， 其特征在于， 它由水性白浆和调漆料混合制 成， 调漆料以权利要求 1 或 2 所述的 MEG 消毒剂作为功

7、能基料 ； 权 利 要 求 书 CN 102260235 A CN 102260239 A2/2 页 3 水性白浆的各原料重量配比为 ： MEG 消毒剂 45-55 ； 水 110-130 ； 羟乙基纤维素 3-4 ； 防腐剂 2-3 ； 丙二醇 30-40 ； 分散剂 8-10 ； 非离子表面活性剂 1.5-2.5 ； 消泡剂 1.5-2.5 ； 钛白粉 180-220 ； 调漆料的各原料重量配比为 ： 水 35-45 ； 丙烯酸乳液 480-530 ； 二甘醇丁醚 18-22 ； 防腐剂 8-10 ； 消泡剂 2-3 ； 其中， 水性白浆与调漆料之间按重量比 4-5 10 进行调配。 8.

8、 根据权利要求 7 所述的一种抗甲型流感病毒的水性地板涂料， 其特征在于， 水性白浆的各原料重量配比为 ： MEG 消毒剂 50 ； 水 121 ； 羟乙基纤维素 3.5 ； 防腐剂 2.5 ； 丙二醇 34.3 ； 分散剂 9.1 ； 非离子表面活性剂 2.1 ； 消泡剂 1.8 ； 钛白粉 198 ； 调漆料的各原料重量配比为 ： 水 42 ； 丙烯酸乳液 503 ； 二甘醇丁醚 20.4 ； 防腐剂 9.5 ； 消泡剂 2.6 ； 其中， 水性白浆与调漆料之间按重量比 4.2 10 进行调配。 权 利 要 求 书 CN 102260235 A CN 102260239 A1/10 页 4

9、 抗甲型流感病毒原料及制剂与涂料 技术领域 0001 本发明涉及一种空间或界面消毒原料， 特别是一种抗甲型流感病毒原料 ； 本发明 还涉及该抗甲型流感病毒的制剂， 以及使用该抗甲型流感病毒原料制成的涂料。 背景技术 0002 流感病毒属正粘病毒科成员， 是流行性感冒 ( 俗称流感 ) 的病原体。流感病毒为 负链 RNA 病毒， 分为甲、 乙、 丙三型。甲型流感病毒根据外膜蛋白血凝素抗原 (HA) 和神经氨 酸酶 (NA) 再分为若干个亚型。我们所熟知的 H1N1、 H5N1 流感病毒就属于甲型流感病毒的 亚型之一。甲型流感病毒易发生变异， 而出现新的基因型 / 抗原型， 使其能逃避宿主的免疫

10、防护， 过去的疫苗对人群无保护作用， 新毒株的出现又导致疾病爆发流行。 流感病毒主要是 经飞沫、 气溶胶通过呼吸道在人群间传播。 甲型流感病毒除感染人类外， 还可以感染禽、 猪、 马等多种动物， 具有传染性强、 发病率高、 流行面广等特点， 是人类至今不能有效控制的世 界性传染病。禽流感 (H5N1)、 甲型 H1N1 等重大病毒均是来自于禽畜类对人的传播和蔓延。 目前， 甲型 H1N1 流感在世界范围内爆发流行， 从环境上防治， 具有重大的现实意义。 发明内容 0003 本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足， 提供一种新的原料简单、 抗 病毒效果好的抗甲型流感病毒原料。 0004 本

11、发明所要解决的另一个技术问题是提供了一种如以上所述的抗甲型流感病毒 原料制成的制剂及其抗甲型流感病毒用途。 0005 本发明所要解决的另一个技术问题是提供了一种如以上所述的抗甲型流感病毒 原料制成的内墙涂料。 0006 本发明所要解决的另一个技术问题是提供了一种如以上所述的抗甲型流感病毒 原料制成的地块涂料。 0007 本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。 本发明是一种抗甲 型流感病毒原料， 其特征在于， 它采用以下方法制成 ： 它以 MEG 树脂为原料进行蒸馏， 提取 200-220馏份， 得淡黄色油状液体， 冷却后投入反应釜中， 缓慢升温至 70-80， 再进行保 温并开

12、动搅拌， 缓慢滴加磷酸或盐酸进行水解反应， 至反应物料无分层并呈透明状， 即制得 抗甲型流感病毒原料 MEG 消毒剂。 0008 上述技术方案中， 搅拌的转速可以根据需要调整， 优选为 40-60 转 /min。 0009 本 发 明 所 述 的 MEG 树 脂 是 指 ： 专 利 申 请 号 为 200710026054.5， 公 开 号 为 CN101168589， 名称为 “一种新型树脂的生产工艺” 的中国专利中所述的新型树脂， 它通过丙 烯醛与乙烯基乙醚经缩合反应制得， 其具体制法可以参见该公开专利文献中的记载。现该 树脂在连云港市源吉微生物研究所有售。 0010 本发明还公开了一种抗

13、甲型流感病毒制剂， 其特点是， 它由水与以上技术方案所 述的MEG消毒剂混合溶解制成， 且MEG消毒剂占制剂的重量百分比为0.5-3。 该制剂可以 说 明 书 CN 102260235 A CN 102260239 A2/10 页 5 用于空间和界面消毒。 0011 本发明还公开了一种抗甲型流感病毒的水性内墙涂料， 其特点是， 它由水性白浆 和调漆料混合制成， 调漆料以上技术方案所述的 MEG 消毒剂作为功能基料 ； 0012 水性白浆的各原料重量配比为 ： 0013 水 140-160 ； 增稠剂 5-9 ； 0014 氨水 1-2 ； 分散剂 5-7 ； 0015 润湿剂 1-2 ； 消泡

14、剂 1-3 ； 0016 钛白粉 180-220 ； 高岭土 70-90 ； 0017 重质碳酸钙 150-190 ； 0018 调漆料的各原料重量配比为 ： 0019 MEG 消毒剂 40-60 ； 丙烯酸乳液 230-280 ； 0020 成膜助剂 12-17 ； 丙二醇 12-17 ； 0021 增稠剂 8-12 ； 消泡剂 1-3 0022 防腐剂 1-3 ； 水 30-50 ； 0023 其中， 水性白浆与调漆料之间按重量比 5-7 10 进行调配。 0024 以上所述的抗甲型流感病毒的水性内墙涂料中， 水性白浆的各原料重量配比优选 为 ： 0025 水 150 ； 增稠剂 7 ；

15、0026 氨水 1.5 ； 分散剂 6 ； 0027 润湿剂 1.5 ； 消泡剂 2 ； 0028 钛白粉 200 ； 高岭土 80 ； 0029 重质碳酸钙 170 ； 0030 调漆料的各原料重量配比优选为 ： 0031 MEG 消毒剂 50 ； 丙烯酸乳液 250 ； 0032 成膜助剂 15 ； 丙二醇 15 ； 0033 增稠剂 10 ； 消泡剂 2 ； 0034 防腐剂 2 ； 水 38 ； 0035 其中， 水性白浆与调漆料之间按重量比优选 6 10 进行调配。 0036 本发明还公开了一种抗甲型流感病毒的水性地板涂料， 其特点是， 它由水性白浆 和调漆料混合制成， 调漆料以上技

16、术方案所述的 MEG 消毒剂作为功能基料 ； 0037 水性白浆的各原料重量配比为 ： 0038 MEG 消毒剂 45-55 ； 水 110-130 ； 0039 羟乙基纤维素 3-4 ； 防腐剂 2-3 ； 0040 丙二醇 30-40 ； 分散剂 8-10 ； 0041 非离子表面活性剂 1.5-2.5 ； 消泡剂 1.5-2.5 ； 0042 钛白粉 180-220 ； 0043 调漆料的各原料重量配比为 ： 0044 水 35-45 ； 丙烯酸乳液 480-530 ； 0045 二甘醇丁醚 18-22 ； 说 明 书 CN 102260235 A CN 102260239 A3/10

17、页 6 0046 防腐剂 8-10 ； 消泡剂 2-3 ； 0047 其中， 水性白浆与调漆料之间按重量比 4-5 10 进行调配。 0048 以上所述的一种抗甲型流感病毒的水性地板涂料中， 0049 水性白浆的各原料重量配比优选为 ： 0050 MEG 消毒剂 50 ； 水 121 ； 0051 羟乙基纤维素 3.5 ； 防腐剂 2.5 ； 0052 丙二醇 34.3 ； 分散剂 9.1 ； 0053 非离子表面活性剂 2.1 ； 消泡剂 1.8 ； 0054 钛白粉 198 ； 0055 调漆料的各原料重量配比优选为 ： 0056 水 42 ； 丙烯酸乳液 503 ； 0057 二甘醇丁醚

18、 20.4 ； 0058 防腐剂 9.5 ； 消泡剂 2.6 ； 0059 其中， 水性白浆与调漆料之间按重量比优选 4.2 10 进行调配。 0060 本发明所述的内墙涂料、 地板涂料中， 起最关键作用功能性原料 MEG 消毒剂， 因 此， 涂料配方中所述的其它各原料可选用的具体种类很多， 因此如无特别说明， 均可指现有 技术中公开的任何一种可适用于内墙涂料、 地板涂料生产的原料或市售原料。 0061 本发明所述的内墙涂料、 地板涂料均可以按以下生产工艺制备 ： 在低速搅拌下依 次将所述各原料加入不锈钢容器中， 充分混合后高速分散， 使细度达到 50m， 制得水性白 浆 ； 再将调漆料的各原

19、料在低速搅拌下充分混合， 然后加入已分散好的水性白浆， 混合均匀 过筛即为成品。 0062 在以上所述的内墙或地板涂料的原料中， 如无特别说明， 各原料均可指现有技术 中公开的任何一种可适用于涂料生产的原料或市售原料。 0063 本发明所述的内墙涂料、 地板涂料的主要技术指标是 ： 0064 Stormer 粘度 /ku ： 17.7 左右 ； 细度 /m ： 50 左右 ； 0065 密度 /(kg/L) ： 1.45-1.60 ； PVC/ ： 55 左右 ； 0066 病毒灭活率 / ： 80左右。 0067 本发明所述的内墙涂料或地板涂料的施工方法为 ： 基底务必处理洁净、 平滑， 喷

20、、 刷、 涂均可。施工方便， 快干， 一天可涂刷 3 遍， 根据现场需要可选择亮光、 亚光和半亚光地 板漆。 0068 与现有技术相比， 本发明抗甲型流感病毒原料、 制剂及涂料具有以下优点 ： 0069 一是本发明抗甲型流感病毒原料是继抗甲型 H1N1 流感病毒 “疫苗” 之后， 能够有 效控制疫情的产品， 该抗甲型流感病毒原料是一种空气或界面消毒剂， 主要用于抗甲流环 境的治理， 而不在于人体的本身。 0070 二是本发明产品抗甲型流感病毒制剂、 抗甲型流感病毒涂料， 可以配合使用于大 型畜牧场、 医院和公共场所的空间及墙壁、 顶棚、 地面等各个界面， 阻断人畜之间的交叉感 染， 能够从病原

21、体的源点到人类的公共环境， 系统地预防和控制疫情的传播蔓延。 0071 三是本发明产品是属于 MEG 树脂的衍生产品， 不仅具有抗病毒的特性， 同时还具 备杀菌、 防霉和除藻的特性， 广谱、 高效、 耐久、 安全， 属于环境友好型抗菌材料。 说 明 书 CN 102260235 A CN 102260239 A4/10 页 7 附图说明 0072 图 1 为受试材料 A 抗甲型 H1N1流感病毒作用图 ； 0073 图 2 为受试材料 B 抗甲型 H1N1流感病毒作用图 ； 0074 图 3 为受试材料 C 抗甲型 H1N1流感病毒作用图。 具体实施方式 0075 以下进一步描述本发明的具体技

22、术方案， 以便于本领域的技术人员进一步地理解 本发明， 而不构成对其权利的限制。 0076 实施例 1。一种抗甲型流感病毒原料， 它采用以下方法制成 ： 它以 MEG 树脂为原料 进行蒸馏， 提取 200馏份， 得淡黄色油状液体， 冷却后投入反应釜中， 缓慢升温至 70， 再 进行保温并开动搅拌， 缓慢滴加磷酸或盐酸进行水解反应， 至反应物料无分层并呈透明状， 即制得抗甲型流感病毒原料 MEG 消毒剂。 0077 实施例 2。一种抗甲型流感病毒原料， 它采用以下方法制成 ： 它以 MEG 树脂为原料 进行蒸馏， 提取 220馏份， 得淡黄色油状液体， 冷却后投入反应釜中， 缓慢升温至 80，

23、再 进行保温并开动搅拌， 搅拌转速为 60 转 /min， 缓慢滴加磷酸或盐酸进行水解反应， 至反应 物料无分层并呈透明状， 即制得抗甲型流感病毒原料 MEG 消毒剂。 0078 实施例 3。一种抗甲型流感病毒原料， 它采用以下方法制成 ： 它以 MEG 树脂为原料 进行蒸馏， 提取 210馏份， 得淡黄色油状液体， 冷却后投入反应釜中， 缓慢升温至 75， 再 进行保温并开动搅拌， 搅拌转速为 40 转 /min， 缓慢滴加磷酸或盐酸进行水解反应， 至反应 物料无分层并呈透明状， 即制得抗甲型流感病毒原料 MEG 消毒剂。 0079 实施例 4。一种抗甲型流感病毒制剂， 它由水与实施例 1-

24、3 中任何一项所述的 MEG 消毒剂混合溶解制成， 且 MEG 消毒剂占制剂的重量百分比为 0.5。 0080 实施例 5。一种抗甲型流感病毒制剂， 它由水与实施例 1-3 中任何一项所述的 MEG 消毒剂混合溶解制成， 且 MEG 消毒剂占制剂的重量百分比为 3。 0081 实施例 6。一种抗甲型流感病毒制剂， 它由水与实施例 1-3 中任何一项所述的 MEG 消毒剂混合溶解制成， 且 MEG 消毒剂占制剂的重量百分比为 1.5。 0082 实施例 7。一种抗甲型流感病毒的水性内墙涂料， 它以水性白浆和调漆料混合制 成， 调漆料以实施例 1-3 中任何一项所述的 MEG 消毒剂作为功能基料

25、； 0083 水性白浆的各原料重量配比为 ： 0084 水 140 ； 增稠剂 5 ； 0085 氨水 1 ； 分散剂 5 ； 0086 润湿剂 1 ； 消泡剂 1 ； 0087 钛白粉 180 ； 高岭土 70 ； 0088 重质碳酸钙 150 ； 0089 调漆料的各原料重量配比为 ： 0090 MEG 消毒剂 40 ； 丙烯酸乳液 230 ； 0091 成膜助剂 12 ； 丙二醇 12 ； 0092 增稠剂 8 ； 消泡剂 1 ； 说 明 书 CN 102260235 A CN 102260239 A5/10 页 8 0093 防腐剂 1 ； 水 30 ； 0094 其中， 水性白浆与调

26、漆料之间按重量比 5 10 进行混合调配。 0095 实施例 8。一种抗甲型流感病毒的水性内墙涂料， 它以水性白浆和调漆料混合制 成， 调漆料以实施例 1-3 中任何一项所述的 MEG 消毒剂作为功能基料 ； 0096 水性白浆的各原料重量配比为 ： 0097 水 160 ； 增稠剂 9 ； 0098 氨水 2 ； 分散剂 7 ； 0099 润湿剂 2 ； 消泡剂 3 ； 0100 钛白粉 220 ； 高岭土 90 ； 0101 重质碳酸钙 190 ； 0102 调漆料的各原料重量配比为 ： 0103 MEG 消毒剂 60 ； 丙烯酸乳液 280 ； 0104 成膜助剂 17 ； 丙二醇 17

27、 ； 0105 增稠剂 12 ； 消泡剂 3 0106 防腐剂 3 ； 水 50 ； 0107 其中， 水性白浆与调漆料之间按重量比 7 10 进行混合调配。 0108 实施例 9。一种抗甲型流感病毒的水性内墙涂料， 它以水性白浆和调漆料混合制 成， 调漆料以实施例 2 所述的 MEG 消毒剂作为功能基料 ； 0109 水性白浆的各原料重量配比为 ： 0110 水 150 ； 增稠剂 7 ； 0111 氨水 1.5 ； 分散剂 6 ； 0112 润湿剂 1.5 ； 消泡剂 2 ； 0113 钛白粉 200 ； 高岭土 80 ； 0114 重质碳酸钙 170 ； 0115 调漆料的各原料重量配比

28、为 ： 0116 MEG 消毒剂 50 ； 丙烯酸乳液 250 ； 0117 成膜助剂 15 ； 丙二醇 15 ； 0118 增稠剂 10 ； 消泡剂 2 0119 防腐剂 2 ； 水 38 ； 0120 其中， 水性白浆与调漆料之间按重量比 6 10 进行调配。 0121 实施例 10。一种抗甲型流感病毒的水性地板涂料， 它由水性白浆和调漆料混合制 成， 调漆料以实施例 1-3 任何一项所述的 MEG 消毒剂作为功能基料 ； 0122 水性白浆的各原料重量配比为 ： 0123 MEG 消毒剂 45 ； 水 110 ； 0124 羟乙基纤维素 3 ； 防腐剂 2 ； 0125 丙二醇 30 ；

29、 分散剂 8 ； 0126 非离子表面活性剂 1.5 ； 消泡剂 1.5 ； 0127 钛白粉 180 ； 0128 调漆料的各原料重量配比为 ： 说 明 书 CN 102260235 A CN 102260239 A6/10 页 9 0129 水 35 ； 丙烯酸乳液 480 ； 0130 二甘醇丁醚 18 ； 0131 防腐剂 8 ； 消泡剂 2 ； 0132 其中， 水性白浆与调漆料之间按重量比 4 10 进行调配。 0133 实施例 11。一种抗甲型流感病毒的水性地板涂料， 它由水性白浆和调漆料混合制 成， 调漆料以实施例 1-3 任何一项所述的 MEG 消毒剂作为功能基料 ； 013

30、4 水性白浆的各原料重量配比为 ： 0135 MEG 消毒剂 55 ； 水 130 ； 0136 羟乙基纤维素 4 ； 防腐剂 3 ； 0137 丙二醇 40 ； 分散剂 10 ； 0138 非离子表面活性剂 2.5 ； 消泡剂 2.5 ； 0139 钛白粉 220 ； 0140 调漆料的各原料重量配比为 ： 0141 水 45 ； 丙烯酸乳液 530 ； 0142 二甘醇丁醚 22 ； 0143 防腐剂 10 ； 消泡剂 3 ； 0144 其中， 水性白浆与调漆料之间按重量比 5 10 进行调配。 0145 实施例 12。一种抗甲型流感病毒的水性地板涂料， 它由水性白浆和调漆料混合制 成，

31、调漆料以实施例 2 所述的 MEG 消毒剂作为功能基料 ； 0146 水性白浆的各原料重量配比为 ： 0147 MEG 消毒剂 50 ； 水 121 ； 0148 羟乙基纤维素 3.5 ； 防腐剂 2.5 ； 0149 丙二醇 34.3 ； 分散剂 9.1 ； 0150 非离子表面活性剂 2.1 ； 消泡剂 1.8 ； 0151 钛白粉 198 ； 0152 调漆料的各原料重量配比为 ： 0153 水 42 ； 丙烯酸乳液 503 ； 0154 二甘醇丁醚 20.4 ； 0155 防腐剂 9.5 ； 消泡剂 2.6 ； 0156 其中， 水性白浆与调漆料之间按重量比 4.2 10 进行调配。

32、0157 实验例。MEG 树脂的不同衍生物的对甲型 H1N1流感病毒的作用实验。本实验是申 请人委托武汉大学病毒所 / 国家病毒学重点实验室所做， 实验期间为 2009 年 7 月 -2009 年 12 月。 0158 1、 实验目的 0159 (1) 受试材料对 MDCK 细胞的毒性作用实验。 0160 (2) 甲型 H1N1流感病毒滴度测定。 0161 (3) 受试材料对甲型流感病毒直接杀伤作用。 0162 2、 实验方法 0163 2.1 受试材料及配制 说 明 书 CN 102260235 A CN 102260239 A7/10 页 10 0164 受试材料 A ： 实施例 3 所述

33、的 MEG 消毒剂， 淡黄色水剂 ； 0165 受试材料 B ： 实施例 9 所述的水性内墙涂料， 淡棕色水剂 ； 0166 受试材料 C ： 实施例 12 所述的水性地板涂料， 乳白色水剂 ； 0167 受试材料配制方法 ： 受试材料均由连云港市源吉微生物研究所提供， 并用细胞维 持培养基稀释至对应浓度。 0168 2.2 使用培养基 0169 细胞增殖培养基 0170 含 10小牛血清 (GIBCO) 的 DMEM(GIBCO) 培养基。青霉素、 链霉素含量为 100IUml-1。 0171 细胞维持培养基 0172 除不含血清外， 其余同细胞增殖培养基， 另外加入胰蛋白酶 (2gml-1

34、)。 0173 2.3 细胞及培养 0174 狗肾细胞 (MDCK) 为本实验室保存。用细胞增殖培养基在细胞培养瓶中单层培养 MDCK 细胞。细胞培养瓶置于 37， 5 CO2孵箱中。 0175 2.4 实验用病毒悬液制备 0176 甲型 H1N1流感病毒为本实验室保存。将病毒液用 15gml-1胰酶处理后接种于 已长成单层的狗肾细胞 (MDCK)， 2h 后弃去病毒液， 洗涤细胞后加入含 2gml-1胰酶的细 胞维持液， 于 37， 5 CO2孵箱中培养 1 3 天。毒种使用前与 MDCK 上传代 2 3 次， 反 复冻融 3 次后收集病毒液分装， 所有毒种均置 -80保存备用。 0177

35、2.5 实验方法 0178 2.5.1 受试材料对 MDCK 细胞毒性 (TC50) 测定 0179 在 96 孔板上， 每孔加入 0.1mL、 5104浓度的 MDCK 细胞， 24h 待细胞长成单层后， 加入不同浓度的含受试材料维持液继续培养。每天于倒置显微镜下观察细胞变化， 48h 后， MTT 法检测细胞存活率。每一受试材料浓度均重复 4 孔。同时设正常细胞对照。细胞存活 率 ( ) ( 实验组平均 A 值 / 细胞对照组平均 A 值 )100。用统计软件 SPSS17.0 对 数据进行分析， 并计算受试材料的半数细胞毒性浓度 (TC50)。 0180 2.5.2 甲型 H1N1流感病

36、毒滴度测定 0181 在 96 孔板上， 每孔加入 100l 的 5104浓度的 MDCK 细胞。待 24h 细胞长成单 层后， 用细胞维持培养基洗涤一次， 再加入按 10 倍滴度梯度稀释的病毒液 (50l/ 孔 ) 吸 附 2h。吸出病毒液后换细胞维持培养基 (200l/ 孔 )， 放入 37温箱， 每天于倒置显微 镜下观察细胞变化， 48h 后， MTT 法检测细胞存活率。每一病毒滴度均重复 4 孔， 共做 10 个 梯度， 同时设正常细胞对照。细胞存活率 ( ) ( 实验组平均 A 值 / 细胞对照组平均 A 值 )100。用统计软件 SPSS17.0 对数据进行分析， 并计算半数组织感

37、染量 (TCID50)。 0182 2.5.3 受试材料抗甲型 H1N1流感病毒作用 0183 方法一 ： 先用 100TCID50的病毒与无毒范围内不同浓度的受试材料预作用 6 小时， 每孔50L感染细胞， 吸附2h后， 换为细胞维持培养基， 每天于倒置显微镜下观察细胞变化 ( 适用于受试材料 A)。 0184 方法二 ： 取适量受试材料均匀涂成一层凉干， 加入甲型 H1N1流感病毒原液， 4作 用 6 小时后， 将病毒按 10 倍递减稀释 7 个滴度， 每孔 50L 感染细胞， 吸附 2h 后， 换为细胞 说 明 书 CN 102260235 A CN 102260239 A8/10 页

38、11 维持培养基， 每天于倒置显微镜下观察细胞变化。( 适用于受试材料 B 和受试材料 C)。 0185 观测指标 ： 细胞病变效应 (CPE)， 记录方法为 ： - 为无 CPE， + 为 25细胞出现 CPE， + 为 50细胞出现 CPE， + 为 75细胞出现 CPE， + 为 100细胞出现 CPE。待病毒对 照孔CPE达80以上且细胞对照正常时， 用MTT法检测细胞存活率， 每一受试材料A浓度均 重复 4 孔， 同时设正常细胞对照和病毒对照。 0186 3、 实验结果 0187 3.1 受试材料对 MDCK 细胞的毒性作用 0188 受试材料 A 对 MDCK 细胞的毒性作用表现为

39、细胞折光性增加、 细胞变圆、 OD 值明显 下降。且受试材料对细胞的毒性作用在一定范围内随着受试材料浓度的增加， 细胞存活率 降低。通过显微镜观察细胞形态和 MTT 法测定 OD 值， 通过 SPSS17.0 进行数据分析计算原 药， 受试材料 B 和受试材料 C 的半数细胞毒性浓度 (TC50) 为 110-2( 受试材料与稀释液的 体积比例 )， 受试材料 A 的半数细胞毒性浓度 (TC50) 约为 410-4( 受试材料与稀释液的体 积比例 )。 0189 3.2 甲型 H1N1流感病毒滴度 0190 甲型流感病毒对 MDCK 细胞 CPE 表现为细胞成星状、 聚集、 折光性增强、 脱落

40、、 OD 值 下降。且病毒的 CPE 程度在一定范围内随着病毒滴度的增加而增加。通过显微镜观察细胞 形态和 MTT 法测定 OD 值， 确定甲型 H1N1流感病毒 TCID50为 10-3. 0191 表 1 病毒滴定结果 0192 0193 3.3 受试材料抗甲型 H1N1流感病毒作用 0194 甲型流感病毒对 MDCK 细胞 CPE 表现为细胞成星状、 聚集、 折光性增强、 脱落、 OD 值 下降。通过显微镜观察细胞形态和 MTT 法测定 OD 值， 各受试材料对甲型流感病毒生物合成 的抑制作用实验结果如下所示。 0195 表 2 受试材料 A 抗甲型 H1N1流感病毒作用 0196 说

41、明 书 CN 102260235 A CN 102260239 A9/10 页 12 0197 表 3 受试材料 A 对甲型 H1N1流感病毒作用 0198 0199 参照图 1( 图中所述的药物组即为对应的受试材料组， 图 2、 图 3 同 )， 其中 ： 梯 度 1 5 是受试材料 A 稀释度 / 病毒滴度分别为 410-4/10-1、 410-5/10-1、 410-6/10-1、 410-7/10-1、 410-8/10-1。 0200 表 4 受试材料 B 抗甲型 H1N1流感病毒作用 0201 0202 0203 参照图 2 显示的受试材料 B 抗甲型 H1N1流感病毒作用 ( 梯

42、度 1 7 表示同图 1)。 0204 表 5 受试材料 C 抗甲型 H1N1 流感病毒作用 0205 说 明 书 CN 102260235 A CN 102260239 A10/10 页 13 0206 “？ ” 有沉淀， 无法观察。 0207 并参照图 3 显示的受试材料 C 抗甲型 H1N1流感病毒作用 ( 梯度 1 7 表示同图 1)。 0208 结论 0209 本实验对基于 MEG 消毒剂的不同受试材料进行了抗甲型 H1N1流感病毒实验研究， 目的是希望从各个空间和界面， 形成对流感病毒的灭活作用。本实验用 3 种受试材料 A、 B、 C 进行抗病毒实验， 结果表明受试材料 A 稀释度为 110-8， 病毒灭活率为 89.7。抗病毒 作用随受试材料浓度变化而变化， 呈明显的量效关系。受试材料 B 稀释度为 110-2， 病毒 灭活率为 84.8。受试材料 C 稀释度为 110-2， 病毒灭活率为 88.7。结论认为 MEG 消 毒剂具有明显的抗甲型 H1N1流感病毒作用。 说 明 书 CN 102260235 A CN 102260239 A1/2 页 14 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 102260235 A CN 102260239 A2/2 页 15 图 3 说 明 书 附 图 CN 102260235 A