活的减毒嵌合猪圆环病毒疫苗.pdf

1、(10)申请公布号 CN 102971425 A (43)申请公布日 2013.03.13 CN 102971425 A *CN102971425A* (21)申请号 201180024467.4 (22)申请日 2011.03.16 61/314362 2010.03.16 US C12N 15/34(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 7/04(2006.01) C07K 14/01(2006.01) A61K 39/12(2006.01) A61P 31/20(2006.01) (71)申请人 弗吉尼亚科技知识产权有限公司 地址 美国弗吉尼亚州 (72)发

2、明人 X-J. 蒙 N. 比奇 S. 拉马穆尔蒂 (74)专利代理机构 中国专利代理(香港)有限公 司 72001 代理人 孔青 权陆军 (54) 发明名称 活的减毒嵌合猪圆环病毒疫苗 (57) 摘要 本发明提供一种新的嵌合猪圆环病毒感染性 DNA克隆和活的减毒嵌合病毒， 其中PCV2(优选为 亚型 PCV2b) 的衣壳基因整合到非致病的 PCV1 病 毒基因组中。在一个特定实施方案中， PCV2 衣壳 基因为亚型PCV2b的， 亚型PCV2b是全世界猪中流 通的主要亚型。 命名为PCV1-2b的减毒嵌合病毒， 有效保护猪免受 PCV2b 攻击并可用作针对 PCV2b 和 PCV2a 亚型感染

3、提供保护和交叉保护的活疫苗 以及灭活(死)疫苗。 本发明的活的减毒疫苗亦有 效保护猪免受猪圆环病毒相关的疾病 (PCVAD)。 (30)优先权数据 (85)PCT申请进入国家阶段日 2012.11.16 (86)PCT申请的申请数据 PCT/US2011/028665 2011.03.16 (87)PCT申请的公布数据 WO2011/116094 EN 2011.09.22 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 29 页 附图 7 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 2 页 说明书 29 页 附图 7 页 1/2 页 2 1. 一种嵌合猪圆

4、环病毒 (PCV) 的核酸分子， 其包含编码非致病的嵌合 PCV 的核酸分 子， 所述嵌合 PCV 来源于 1 型 PCV (PCV1) 的基因组序列和 2 型 PCV (PCV2) 的衣壳蛋白的 至少一部分编码序列。 2. 权利要求 1 的核酸分子， 其中所述 PCV2 的衣壳蛋白的编码序列选自亚型 PCV2a、 PCV2b 和 PCV2c。 3. 权利要求 2 的核酸分子， 其中所述 PCV2 的衣壳蛋白的编码序列为亚型 PCV2b 的。 4. 权利要求 1 的核酸分子， 其中所述 PCV2 的衣壳蛋白的编码序列为 PCV2 的至少一部 分开放阅读框 2 (ORF2)。 5. 权利要求 5

5、 的核酸分子， 其中所述 PCV2 的衣壳蛋白的编码序列为亚型 PCV2b 的至 少一部分 ORF2。 6. 权利要求 1 的核酸分子， 其中所述核酸分子编码超过一份拷贝的非致病的嵌合 PCV， 所述嵌合 PCV 来源于 1 型 PCV (PCV1) 的基因组序列和 2 型 PCV (PCV2) 的衣壳蛋白的 至少一部分编码序列。 7. 一种生物功能质粒或病毒载体， 其包含权利要求 1 的核酸分子。 8. 一种合适的宿主细胞， 其被权利要求 7 的包含核酸分子的载体转染。 9. 一种无毒感染性嵌合 PCV， 其由权利要求 8 的包含核酸分子的细胞产生。 10. 权利要求 9 的无毒感染性嵌合

6、PCV， 其中所述 PCV2 的衣壳蛋白的编码序列选自亚 型 PCV2a、 PCV2b 和 PCV2c。 11. 权利要求10的无毒感染性嵌合PCV， 其中所述PCV2的衣壳蛋白的编码序列为亚型 PCV2b 的。 12. 权利要求 9 的无毒感染性嵌合 PCV， 其中所述 PCV2 的衣壳蛋白的编码序列为 PCV2 的至少一部分开放阅读框 2 (ORF2)。 13. 权利要求 11 的无毒感染性嵌合 PCV， 其中所述 PCV2 的衣壳蛋白的编码序列为 PCV2b 的至少一部分 ORF2。 14. 一种灭活的嵌合 PCV， 其由权利要求 8 的包含核酸分子的细胞产生。 15. 权利要求 14

7、的灭活嵌合 PCV， 其中 PCV2 的衣壳蛋白的编码序列为亚型 PCV2b 的。 16. 一种病毒疫苗， 其包含生理上可接受的载体和免疫原性量的选自以下的成员 ： (a) 猪圆环病毒(PCV)的核酸分子， 其包含编码嵌合非致病的PCV的核酸分子， 所述嵌 合非致病的 PCV 来源于 1 型 PCV (PCV1) 的基因组序列和 2 型 PCV (PCV2) 的衣壳蛋白的至 少一部分编码序列 ； (b) 生物功能质粒或病毒载体， 其包含含有编码嵌合非致病的 PCV 的核酸分子的 PCV 的核酸分子， 所述嵌合非致病的 PCV 来源于 PCV1 的基因组序列和 PCV2 的衣壳蛋白的至少 一部分

8、编码序列 ； (c) 无毒感染性嵌合PCV， 其包含含有编码嵌合非致病的PCV的核酸分子的PCV的核酸 分子， 所述嵌合非致病的 PCV 来源于 PCV1 的基因组序列和 PCV2 的衣壳蛋白的至少一部分 编码序列 ； 和 (d) 灭活的嵌合 PCV， 其包含 PCV2 的衣壳蛋白的至少一部分。 17. 权利要求 16 的病毒疫苗， 其中所述疫苗包含活的嵌合 PCV 病毒。 18. 权利要求 16 的病毒疫苗， 其中所述疫苗包含灭活的嵌合 PCV 病毒。 权 利 要 求 书 CN 102971425 A 2 2/2 页 3 19. 权利要求 16 的病毒疫苗， 其中所述 PCV2 的衣壳蛋白为

9、亚型 PCV2b 的。 20. 权利要求 16 的病毒疫苗， 其另外包含佐剂。 21. 权利要求 16 的病毒疫苗， 其中所述疫苗针对 PCV2a 和 PCV2b 感染保护。 22. 一种针对 PCV2 病毒感染免疫猪的方法， 其包括将免疫有效量的权利要求 16 的疫 苗给予猪。 23. 权利要求 22 的方法， 其包括将所述核酸分子或活的减毒嵌合 PCV 病毒给予猪。 24. 权利要求 22 的方法， 其包括将所述灭活的嵌合 PCV 病毒给予猪。 25. 权利要求 22 的方法， 其包括将所述疫苗胃肠外、 鼻内、 皮内或经皮给予猪。 26. 权利要求 22 的方法， 其包括将疫苗淋巴内或肌内

10、给予猪。 27. 一种针对猪圆环病毒相关的疾病 (PCVAD) 保护猪的方法， 其包括将免疫有效量的 权利要求 16 的疫苗给予猪。 权 利 要 求 书 CN 102971425 A 3 1/29 页 4 活的减毒嵌合猪圆环病毒疫苗 0001 相关申请的引用 本专利申请要求 2010 年 3 月 16 日申请的美国临时专利申请号 61/314,362 的权益， 其 说明书本文通过引用以其整体结合到本说明书中。 发明领域 0002 本发明涉及猪圆环病毒 (PCV) ( 特别是 PCV1 和 PCV2 ( 特别是亚型 PCV2b) 的嵌 合病毒 ) 的感染性 DNA 克隆、 活的减毒疫苗和灭活疫苗

11、以及用于针对 PCV 感染和猪圆环病 毒相关的疾病 (PCVAD) 进行保护的方法。 0003 发明背景 猪圆环病毒(PCV)是一种小的、 无包膜的DNA病毒， 其属于圆环病毒科(Circoviridae) (Todd, D. 等 , 2005, Circoviridae, 第 327-334 页 . 载于 C. M. Fauquet 等 ( 主 编 ), Virus Taxonomy: Eighth Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses, Elsevier Academic Press, San Diego)

12、。1 型 PCV (PCV1) 在七十年代中 期作为猪肾 PK-15 细胞系的污染物被发现 (Tischer, I. 等 , 1974, Characterization of papovavirus-and picornavirus-like particles in permanent pig kidney cell lines( 永久猪肾细胞系中的乳多空病毒和小 RNA 病毒样颗粒的表征 ), Zentralbl Bakteriol Orig A 226:153-67)。 0004 PCV1被认为是非致病的病毒， 因为用来源于PK-15细胞系的PCV1病毒接种猪不引 起猪的任何疾病(Ti

13、scher, I. 等, 1986, Studies on epidemiology and pathogenicity of porcine circovirus( 对猪圆环病毒的流行病学和致病性的研究 ), Arch Viroi 91:271-6)。在 1997 年， 在加拿大的患有萎缩病的小猪中发现了 PCV 的变异株 ( 命名为 2 型 PCV (PCV2) (Allan, G. M. 等 , 1998, Isolation of porcine circovirus-like viruses from pigs with a wasting disease in the USA an

14、d Europe( 从美国和欧洲的 患有萎缩病的猪中分离猪圆环病毒样病毒 ). J Vet Diagn Invest 10:3-10 ； Clark, E. G., 1997, 报告于美国猪医师协会 (American Association of Swine Practitioners) 第 28 届年会 ； Ellis, J. 等 , 1998, Isolation of circovirus from lesions of pigs with postweaning muitisystemic wasting syndrome( 从患有断奶后多系统衰竭综 合征的猪的损害中分离圆环病毒 )

15、, Can Vet J 39:44-51 ； Meehan, B. M. 等 , 1998, Characterization of novel circovirus DNAs associated with wasting syndromes in pigs( 与猪的衰竭综合征相关的新的圆环病毒 DNA 的表征 ), J Gen Virol 79 (Pt 9):2171-9)。目前， PCV2 是猪圆环病毒相关的疾病 (PCVAD) 的主要病原体， 猪圆环 病毒相关的疾病包括消瘦、 死亡、 呼吸征、 肠炎、 不能繁殖和猪皮炎肾病综合征 (PDNS) (Opriessnig, T. 等, 20

16、07, Porcine circovirus type 2 associated disease: update on current terminology, clinical manifestations, pathogenesis, diagnosis, and intervention strategies(2 型猪圆环病毒相关的疾病 ： 对目前术语、 临床表现、 病理、 诊 断和介入策略的更新 ), J Vet Diagn Invest 19:591-615)。PCV2 目前被认为是全球猪 说 明 书 CN 102971425 A 4 2/29 页 5 群中最经济上重要的病毒病原体之

17、一， 并在世界的每个主要产猪国家发现 (Gillespie, J. 等 , 2009, Porcine circovirus Type 2 and porcine Circovirus-Associated Disease(2 型猪圆环病毒和猪圆环病毒相关的疾病 ), J Vet Intern Med)。在用 PCV2 单独实验感染的常规猪中观察到重度临床 PCVAD 是不常见的， 并通常需要与其他猪病 原体 ( 例如猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV) 或猪细小病毒 (PPV) 共感染以诱导全 谱的临床 PCVAD (Allan, G. M. 等 , 2000, Experimental

18、infection of colostrum deprived piglets with porcine circovirus 2 (PCV2) and porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) potentiates PCV2 replication( 用猪圆环病 毒 2 (PCV2) 和猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV) 实验感染剥夺初乳的小猪增强 PCV2 复 制), Arch Virol 145:2421-9 ； Opriessnig, T. 等 2007. 同上 ； Roca, M. 等, 2004,

19、In vitro and in vivo characterization of an infectious clone of a European strain of porcine circovirus type 2 (2 型猪圆环病毒欧洲株的感染性克隆的体外和体内表 征 ), J Gen Virol 85:1259-66 ； Rovira, A. 等 , 2002, Experimental inoculation of conventional pigs with porcine reproductive and respiratory syndrome virus and porci

20、ne circovirus2 ( 用猪繁殖与呼吸综合征病毒与猪圆环病毒 2 实验接种常规 猪 ), J Virol 76:3232-9 ； Tomas, A. 等 , 2008, A meta-analysis on experimental infections with porcine circovirus type 2 (PCV2) ( 对 2 型猪圆环病毒 (PCV2) 实验 感染的综合分析), Vet Microbiol 132:260-73)。 然而， 用PCV2单独感染剖腹产来源剥夺 初乳的 (CD/CD) 猪已引起重度临床 PCVAD 和死亡 (Allan, G. 等 2003

21、, Reproduction of postweaning muitisystemic wasting syndrome in pigs experimentally inoculated with a Swedish porcine circovirus 2 isolate ( 在用瑞典猪圆环病毒 2 隔离群实验接 种的猪中再现断奶后多系统衰竭综合征 ), J Vet Diagn Invest 15:553-60 ； Allan, G. M. 等 , 2004, PMWS: experimental model and co-infections (PMWS ： 实验模型与共感 染 ), V

22、et Microbiol 98:165-8 ； Bolin, S. R. 等 , 2001, Postweaning multisystemic wasting syndrome induced after experimental inoculation of cesarean-derived, colostrum-deprived piglets with type 2 porcine circovirus ( 在用 2 型猪圆环病 毒实验接种剖腹产来源剥夺初乳的小猪后诱导断奶后多系统衰竭综合征 ), J Vet Diagn Invest 13:185-94 ； Harms, P. A.

23、等 , 2001, Experimental reproduction of severe disease in CD/CD pigs concurrently infected with type 2 porcine circovirus and porcine reproductive and respiratory syndrome virus ( 在用 2 型猪圆环病毒和猪繁 殖与呼吸综合征病毒同时感染的CD/CD猪中实验再现重度疾病), Vet Pathol 38:528-39 ； Kennedy, S. 等 , 2000, Reproduction of lesions of po

24、stweaning muitisystemic wasting syndrome by infection of conventional pigs with porcine circovirus type 2 alone or in combination with porcine parvovirus( 通过用 2 型猪圆环病毒 单独或与猪细小病毒联合感染常规猪来再现断奶后多系统衰竭综合征的损害 ), J Comp Pathol 122:9-24)。PCV2 的数篇病理、 免疫学和分子生物学综合综述是可得的 (Allan, G. M. 和 J. A. Ellis, 2000, Porcin

25、e circoviruses: a review( 猪圆环病毒 ： 综 述 ). J Vet Diagn Invest 12:3-14 ； Ellis, J. 等 , 2004, Porcine circovirus-2 and concurrent infections in the field(猪圆环病毒-2和野外并发感染), Vet Microbiol 说 明 书 CN 102971425 A 5 3/29 页 6 98:159-63 ； Finsterbusch, T. 和 A. Mankertz, 2009, Porcine circoviruses-small but powerf

26、ul( 猪圆环病毒 - 小但有力 ), Virus Res 143:177-83 ； Gillespie, J. 等 , 2009, 同上 ； Mankertz, A. 等 , 2004, Molecular biology of Porcine circovirus: analyses of gene expression and viral replication( 猪圆环病毒的分子生物学 ： 基 因表达和病毒复制的分析 ), Vet Microbiol 98:81-8 ； Opriessnig, T. 等 2007, 同 上 ； Ramamoorthy, S. 和 X. J. Meng,

27、 2009, Porcine circoviruses: a minuscule yet mammoth paradox( 猪圆环病毒 ： 一个微小但庞大的悖论 ), Anim Health Res Rev 10:1-20 ； Segales, J. 等 , 2005, porcine circovirus diseases( 猪圆环病毒疾病 ), Anim Health Res Rev 6:119-42)。 0005 虽然致病的 PCV2 与非致病的 PCV1 的基因组组构类似， 但是 PCV1 与 PCV2 的 基因组享有仅大约 68-76% 的核苷酸序列同一性 (Fenaux, M. 等

28、 , 2004, Detection and in vitro and in vivo characterization of porcine circovirus DNA from a porcine-derived commercial pepsin product( 来自猪来源的商业胃蛋白酶产品的猪圆 环病毒 DNA 的检测以及体外和体内表征 ), J Gen Virol 85:3377-82 ； Hamel, A. L 等 , 1998, Nucleotide sequence of porcine circovirus associated with postweaning muit

29、isystemic wasting syndrome in pigs( 与猪的断奶后多系统衰竭综合征有关的猪 圆环病毒的核苷酸序列 ), J Virol 72:5262-7 ； Tischer, I. 等 , 1982, A very small porcine virus with circular single-stranded DNA ( 具有圆形单链 DNA 的非常小的 猪病毒 ), Nature 295:64-6)， 并且已报道了转录模式和衣壳蛋白的抗原概况中的差异 (Cheung, A. K. 2003, Comparative analysis of the transcript

30、ional patterns of pathogenic and nonpathogenic porcine circoviruses( 致病与非致病的猪圆环病毒的 转录模式的比较分析 ), Virology 310:41-9 ； Lekcharoensuk, P. 等 , 2004, Epitope mapping of the major capsid proteins of type 2 porcine circovirus (PCV2) by using chimeric PCV1 and PCV2 (通过使用嵌合PCV1和PCV2来对2型猪圆环病毒(PCV2) 的主要衣壳蛋白进行表位

31、作图 ), J Virol 78:8135-45 ； Shang, S. B. 等 , 2009, Fine mapping of antigenic epitopes on capsid protein of porcine circovirus, and antigenic phenotype of porcine circovirus type 2 (猪圆环病毒的衣壳蛋白上的抗原 表位的优良作图和2型猪圆环病毒的抗原表型), Mol Immunol 46:327-34)。 由病毒基因组 编码的两个主要基因包括 942 bp 复制酶 (rep) 基因 (Mankertz, A. 和 B.

32、Hillenbrand, 2001, Replication of porcine circovirus type 1 requires two proteins encoded by the viral rep gene (1 型猪圆环病毒的复制需要由病毒 rep 基因编码的两种蛋白 ), Virology 279:429-38) 和 702 bp 衣壳基因 (cap) (Nawagitgul, P. 等 , 2000, Open reading frame 2 of porcine circovirus type 2 encodes a major capsid protein(2 型猪圆

33、环病毒的开放阅读框2编码一种主要的衣壳蛋白), J Gen Virol 81:2281-7)。 Rep 基因在 PCV1 与 PCV2 之间是高度保守的， 具有约 83% 的核苷酸序列同一性， 而 cap 基因享有 仅约 67-70% 的同一性 (Mankertz, A. 等 , 2004, 同上 )。目前， 在全世界猪群中已鉴定了 至少3种PCV2的亚型 ： PCV2a、 PCV2b和PCV2c (Dupont, K. 等, 2008, Genomic analysis of PCV2 isolates from Danish archives and a current PMWS case

34、-control study supports a shift in genotypes with time( 来自丹麦档案与当前 PMWS 病例的 PCV2 说 明 书 CN 102971425 A 6 4/29 页 7 隔离群的基因组分析 - 对照研究支持基因型随时间转变 ), Vet Microbiol 128:56-64 ； Segales, J. 等, 2008, PCV-2 genotype definition and nomenclature (PCV-2基因型 定义和命名), Vet Rec 162:867-8)。 PCV2a和PCV2b两者都与不同严重程度的临床PCVAD

35、相关 (An, D. J. 等 , 2007, Phylogenetic characterization of porcine circovirus type 2 in PMWS and PDNS Korean pigs between 1999 and 2006 (1999-2006 年之间 的 PMWS 和 PDNS 韩国猪的 2 型猪圆环病毒的系统发育表征 ), Virus Res 129:115-22 ； Ciacci-Zanella, J. R. 等 , 2009, Detection of Porcine Circovirus type 2 (PCV2) variants PCV

36、2-1 and PCV2-2 in Brazilian pig population( 巴西猪群的 2 型猪圆环 病毒 (PCV2) 变体 PCV2-1 和 PCV2-2 的检测 ), Res Vet Sci 87:157-60 ； Lager, K. M 等 , 2007, Mortality in pigs given porcine circovirus type 2 subgroup 1 and 2 viruses derived from DNA clones(给予来源于DNA克隆的2型猪圆环病毒亚型1和2病 毒的猪的死亡率 ), Vet Rec 161:428-9 ； Madson

37、, D. M. 等 , 2008, Characterization of shedding patterns of Porcine circovirus types 2a and 2b in experimentally inoculated mature boars( 实验接种的成熟野猪中的 2a 和 2b 型猪圆环病毒的释放模 式表征 ), J Vet Diagn invest 20:725-34 ； Opriessnig, T. 等 , 2006, Genetic and experimental comparison of porcine circovirus type 2 (PCV

38、2) isolates from cases with and without PCV2-associated lesions provides evidence for differences in virulence( 来自有和没有 PCV2 相关损害的病例的 2 型猪圆环病毒 (PCV2) 隔离群的基 因和实验比较为毒力差异提供证据 ), J Gen Virol 87:2923-32 ； Opriessnig, T. 等 , 2008, Differences in virulence among porcine circovirus type 2 isolates are unrela

39、ted to cluster type 2a or 2b and prior infection provides heterologous protection(2 型猪圆环病毒隔离群之间的毒力差异与簇类型 2a 或 2b 不相关且感染之前 提供异种保护 ), J Gen Virol 89:2482-91)。2005 年之前， 在美国和加拿大的猪群中仅 发现 PCV2a， 而在欧洲和中国存在 PCV2a 和 PCV2b 两者 (Chae, J. S. and K. S. Choi, 2009, Genetic diversity of porcine circovirus type 2 fr

40、om pigs in Republic of Korea( 来自韩国的猪的 2 型猪圆环病毒的遗传多样性 ), Res Vet Sci ； Dupont, K. 等 , 2008, 同上 )。自 2005 年以来， 新的 PCV2b 株在美国被识别， 且在猪群中存在的全球性变 化是 PCV2b 的占优势盛行， 同时临床 PCVAD 的严重性增加 (Carman, S. 等 , 2008, The emergence of a new strain of porcine circovirus-2 in Ontario and Quebec swine and its association wi

41、th severe porcine circovirus associated disease-2004-2006 ( 安大略和魁北克猪中出现的猪圆环病毒 -2 的新毒株及其与重度猪圆环病毒相关的疾病 的关系-2004-2006), Can J Vet Res 72:259-68 ； Chae, J. S. 和 K. S. Choi, 2009, 同 上 ； Cheung, A. K.等, 2007, Detection of two porcine circovirus type 2 genotypic groups in United States swine herds(在美国猪群中检测

42、到两种2型猪圆环病毒基因型 的类型 ), Arch Virol 152:1035-44 ； Ciacci-Zanella, J. R. 等 , 2009, 同上 ； Dupont, K. 等 , 2008, 同上 ； Gagnon, C. A. 等 , 2007, The emergence of porcine circovirus 2b genotype (PCV-2b) in swine in Canada( 在加拿大的猪中出现猪圆环病毒 2b 基因型 (PCV-2b), Can Vet J 48:811-9 ； Lipej, Z. 等 , 2005, Postweaning muiti

43、systemic wasting syndrome(PMWS) in pigs in Croatia: detection and characterisation of 说 明 书 CN 102971425 A 7 5/29 页 8 porcine circovirus type 2 (PCV2) ( 克罗地亚猪的断奶后多系统衰竭综合征 (PMWS) ： 检测和表征 2 型猪圆环病毒 (PCV2), Acta Vet Hung 53:385-96 ； Wang, F. 等 , 2009, Genetic variation analysis of Chinese strains of por

44、cine circovirus type 2 (2 型猪圆环病毒的中国株的遗传变异分析 ), Virus Res 145:151-6 ； Wiederkehr, D. D. 等 , 2009, A new emerging genotype subgroup within PCV-2b dominates the PMWS epizooty in Switzerland (PCV-2b 中新出现的基因型亚型控制瑞士的 PMWS 病 ), Vet Microbiol 136:27-35)。PCV2c 的致病性不清楚， 因为它仅在 1980、 1987 和 1990 年在丹麦 的无疾病猪群中被报道

45、 (Dupont, K. 等 , 2008, 同上 )。 0006 目前可得的商业疫苗都为基于 PCV2a 亚型的死疫苗或重组疫苗 (Opriessnig, T. 等 2007, 同上 ； Ramamoorthy, S.和 X. J. Meng, 2009, 同上)。 发明人之前已成功开发 了基于 PCV1-2a 嵌合病毒 ( 在 PCV1 的骨架中具有 PCV2a 的衣壳基因 ) 的灭活疫苗 Suvaxyn PCV2 One dose(Fenaux, M. 等, 2004A, A chimetic porcine circovirus (PCV) with the immunogenic c

46、apsid gene of the pathogenic PCV type 2 (PCV2) cloned into the genomic backbone of the nonpathogenic PCV1 induces protective immunity against PCV2 infection in pigs( 致病的 2 型 PCV (PCV2) 的免疫原性衣壳基因克隆到非致病的 PCV1 的基因组骨架中的嵌合猪圆环病毒 (PCV) 诱导针对猪的 PCV2 感染的保护性免疫 ), J Virol 78:6297-303 ； Fenaux, M. 等 , 2003, Immu

47、nogenicity and pathogenicity of chimeric infectious DNA clones of pathogenic porcine circovirus type 2 (PCV2) and nonpathogenic PCV1 in weanling pigs( 断奶猪的致病的 2 型猪圆环病毒 (PCV2) 和非致病的 PCV1 的嵌合感染性 DNA 克隆的免疫原性和致病性 ), J Virol 77:11232-43 ； Gillespie, J. 等 , 2008, A genetically engineered chimeric vaccine

48、against porcine circovirus type 2 (PCV2) is genetically stable in vitro and in vivo(针 对 2 型猪圆环病毒 (PCV2) 的基因工程嵌合疫苗在体外和体内遗传稳定 ), Vaccine 26:4231-6)。 然而， 因为PCV2b亚型现在在商品猪中已成为与重度临床PCVAD相关的全球主 要基因型， 且因为 PCV2a 和 PCV2b 有多达 10% 核苷酸序列同一性的差异 (Fenaux, M. 等 , 2000, Genetic characterization of type 2 porcine circ

49、ovirus (PCV-2) from pigs with postweaning muitisystemic wasting syndrome in different geographic regions of North America and development of a differential PCR-restriction fragment length polymorphism assay to detect and differentiate between infections with PCV-1 and PCV-2 ( 遗传表征来自北美不同地理区域的患断奶后多系统衰竭综合征的 猪的 2 型猪圆环病毒 (PCV-2) 以及开发差异 PCR- 限制性片段长度多态性测定以检测和 区分 PCV-1 与 PCV-2 之间的感染 ), J Clin Microbiol 38:2494-503 ； Olvera, A. 等 , 2007, Molecular evolution of porcine circovirus type 2 genomes: phylogeny and clonality(2 型猪圆环病毒基因组的分子进化 ： 系统发育和克隆形成能力 ), Virology 357:175-85)， 所以是否当前基于PCV