抗淋巴细胞毒素抗体.pdf

1、10申请公布号CN102341411A43申请公布日20120201CN102341411ACN102341411A21申请号200980157746022申请日2009123161/142,18220081231USC07K16/24200601A61P37/00200601A61P35/0020060171申请人比奥根艾迪克MA公司地址美国马萨诸塞州72发明人AM兰杰E加伯AA卢戈夫斯科伊J阿恩特JA卡拉维拉FR泰勒G安托格尼蒂E戴74专利代理机构北京市柳沈律师事务所11105代理人闵丹54发明名称抗淋巴细胞毒素抗体57摘要本发明至少部分基于新类型抗体的鉴别，所述抗体例如导致改善的LT阻断

2、性能。还提供制备本结合分子的方法和使用本发明的结合分子来拮抗LTR信号传导的方法。30优先权数据85PCT申请进入国家阶段日2011083186PCT申请的申请数据PCT/US2009/0699672009123187PCT申请的公布数据WO2010/078526EN2010070851INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书4页说明书92页附图9页CN102341425A1/4页21一种分离的抗体或包含其抗原结合区域的分子，其在这样的条件下在细胞中结合淋巴细胞毒素LT并且使LT诱导的生物活性阻断至少约70，在该条件下参照抗体B9由以登录号HB11962保藏在ATC

3、C的细胞系B9C91产生在细胞中使所述LT诱导的生物活性阻断约50。2一种分离的抗体或包含其抗原结合区域的分子，其在细胞中以IC50小于100NM结合淋巴细胞毒素LT并且使LT诱导的生物活性阻断。3一种分离的抗体或包含其抗原结合区域的分子，其结合淋巴细胞毒素LT并且使LTRIG与细胞的结合阻断至少85。4权利要求1或2所述的分离的抗体或包含其抗原结合区域的分子，其中所述LT诱导的生物活性是IL8释放。5权利要求1、2或3所述的分离的抗体或包含其抗原结合区域的分子，其包含人氨基酸序列。6权利要求1或2所述的分离的抗体或包含其抗原结合区域的分子，其中所述人氨基酸序列包含抗体恒定区序列或其片段。7权

4、利要求6所述的分离的抗体或包含其抗原结合区域的分子，其中所述人恒定区是已经改变以降低与至少一种FC受体结合的IGG1恒定区。8权利要求6所述的分离的抗体或包含其抗原结合区域的分子，其中所述人恒定区是已经改变以增强与至少一种FC受体结合的IGG1恒定区。9权利要求1、2或3所述的分离的抗体或其抗原结合区，其是人源化的。10权利要求1或2所述的分离的抗体或其抗原结合区，其中所述LT诱导的生物活性被阻断至少约80。11权利要求1或2所述的分离的抗体或其抗原结合区，其中所述LT诱导的生物活性被阻断至少约90。12权利要求3所述的分离的抗体或其抗原结合区，其中LTBRIG结合被阻断至少约90。13权利要

5、求2所述的分离的抗体或包含其抗原结合区域的分子，其在细胞中以IC50小于30NM使LT诱导的生物活性阻断。14权利要求2所述的分离的抗体或包含其抗原结合区域的分子，其在细胞中以IC50小于10NM使LT诱导的生物活性阻断。15权利要求2所述的分离的抗体或包含其抗原结合区域的分子，其在细胞中以IC50小于3NM使LT诱导的生物活性阻断。16权利要求3所述的分离的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或抗原结合片段结合LT上两个位点从而未残留用于LTR结合的位点。17权利要求1、2或3所述的分离的抗体或其抗原结合区，其是全长抗体。18权利要求1、2或3所述的分离的抗体或其抗原结合区，其是SCFV分子。19

6、一种特异性结合LT的抗原表位的分离的抗体，其中所述抗体与所述LT抗原表位的结合以剂量依赖性方式被102抗体竞争性阻断。20权利要求19所述的分离的抗体，其中LT的氨基酸193和194对于抗体结合是关键的。权利要求书CN102341411ACN102341425A2/4页321一种特异性结合LT的抗原表位的分离的抗体，其中所述抗体与所述LT抗原表位的结合以剂量依赖性方式被AOD9抗体竞争性阻断。22一种特异性结合LT的抗原表位的分离的抗体，其中所述抗体与所述LT抗原表位的结合以剂量依赖性方式被101/103抗体竞争性阻断。23一种特异性结合LT的抗原表位的分离的抗体，其中所述抗体与所述LT抗原表

7、位的结合以剂量依赖性方式被105抗体竞争性阻断。24权利要求23所述的分离的抗体，其中LT的氨基酸96，97，98，106，107和108对于抗体结合是关键的。25一种特异性结合LT的抗原表位的分离的抗体，其中所述抗体与所述LT抗原表位的结合以剂量依赖性方式被9B4抗体竞争性阻断。26权利要求25所述的分离的抗体，其中LT的氨基酸96，97和98对于抗体结合是关键的。27一种特异性结合LT的抗原表位的分离的抗体，其中所述抗体与所述LT抗原表位的结合以剂量依赖性方式被A1D5抗体竞争性阻断。28权利要求27所述的分离的抗体，其中LT的氨基酸172对于抗体结合是关键的。29一种特异性结合LT的抗原

8、表位的分离的抗体，其中所述抗体与所述LT抗原表位的结合以剂量依赖性方式被107抗体竞争性阻断。30权利要求29所述的分离的抗体，其中LT的氨基酸151和153对于抗体结合是关键的。31一种特异性结合LT的抗原表位的分离的抗体，其中所述抗体与所述LT抗原表位的结合以剂量依赖性方式被108抗体竞争性阻断。32权利要求1931中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合区，其包含人氨基酸序列。33权利要求32所述的分离的抗体或其抗原结合区，其中所述人氨基酸序列是抗体恒定区序列。34权利要求1931中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合区，其中所述抗体是人源化的。35一种包含重链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素

9、结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中所述轻链和重链CDR衍生自选自AOD9，108，107，A1D5，102，101/103，9B4和105的抗体。36一种包含重链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中所述CDR衍生自所述AOD9抗体。37一种包含重链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，

10、所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中所述CDR衍生自所述108抗体。38一种包含重链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，权利要求书CN102341411ACN102341425A3/4页4其中所述CDR衍生自所述107抗体。39一种包含重链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中所述CDR衍生自所述

11、A1D5抗体。40一种包含重链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中所述CDR衍生自所述102抗体。41一种包含重链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中所述CDR衍生自所述101/103抗体。42一种包含重链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变

12、区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中所述CDR衍生自所述105抗体。43一种包含重链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中所述CDR衍生自所述9B4抗体。44一种包含重链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRH1包含序列GFSLX1X2Y/SGX3H其中X是任意氨基酸。45一种包含重链可变区和轻链可变

13、区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRH2包含序列VIWX1GGX2TX3X4NAX5FX6S其中X是任意氨基酸。46一种包含轻链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL1包含序列RASX1SVX2X3X4X5或X1ASQDX2X3X4X5LX6其中X是任意氨基酸。47一种包含轻链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链

14、可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL2包含序列RAX1RLX2D其中X是任意氨基酸。48一种包含轻链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL2包含序列X1X2SX3X4X5S其中X是任意氨基酸。49一种包含轻链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDR

15、L2和CDRL3，其中CDRL3包含序列X1QX2X3X4X5PX6T其中X是任意氨基酸。50一种包含轻链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL3包含序列LX1X2DX4FPX6T其中X是任意氨基酸。51一种包含轻链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含105抗体变体的重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含105变体的轻链权利要求书CN102341411ACN102341425A4/4页5CDRCDRL1

16、、CDRL2和CDRL3。52权利要求51所述的结合分子，其中所述结合分子的溶解度大于120MG/ML。53权利要求51所述的淋巴细胞毒素结合分子，其中所述结合分子包含105变体版本L10的轻链可变区。54权利要求51所述的淋巴细胞毒素结合分子，其中所述结合分子包含105变体版本H1的重链可变区。55权利要求51所述的淋巴细胞毒素结合分子，其中所述结合分子包含105变体版本L10的轻链可变区和105变体版本H1的重链可变区。56一种组合物，包含权利要求134中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合区和载体。57一种组合物，包含权利要求3555中任一项所述的结合分子和载体。58一种治疗受试者的方法，

17、所述受试者将受益于使用抗LT结合分子的治疗，包括向所述受试者施用权利要求56或57中任一项所述的组合物，使得所得进行所述治疗。59权利要求58所述的方法，其中所述受试者患有由炎症表征的疾患。60权利要求59所述的方法，其中所述炎性疾患选自风湿性关节炎，多发性硬化，克罗恩病，溃疡性结肠炎，移植，狼疮，炎症性肝病，牛皮癣，干燥综合征，多发性硬化例如SPMS，病毒诱导的肝炎，自身免疫性肝炎，I型糖尿病，动脉硬化症和病毒休克综合征。61权利要求60所述的方法，其中所述炎性疾患是风湿性关节炎。62权利要求58所述的方法，其中所述受试者患有癌症。63权利要求62所述的方法，其中所述癌症选自多发性骨髓瘤和顽

18、性滤泡性淋巴瘤。64一种核酸分子，编码权利要求135中任一项所述的抗体。65一种核酸分子，编码权利要求3655中任一项所述的结合分子。66权利要求64或65所述的核酸分子，其在载体中。67一种宿主细胞，包含权利要求66所述的载体。68一种制备抗体或结合分子的方法，包括I培养权利要求67所述的宿主细胞，使得所述抗体或结合分子在宿主细胞培养基中分泌；II将所述抗体或结合分子从所述培养基分离。69权利要求56或57所述的组合物在制备药物中的用途。70权利要求69所述的用途，其中所述药物用于治疗和炎症有关的疾患。权利要求书CN102341411ACN102341425A1/92页6抗淋巴细胞毒素抗体0

19、001相关申请0002本专利申请要求于2008年12月31日提交的题为“抗淋巴细胞毒素抗体”的第61/142,182号美国临时专利申请的优先权。上述引用的临时专利申请的全部内容通过引用并入本文。背景技术0003淋巴细胞毒素LT是涉及TNF的细胞因子，并且其以分泌和膜结合形式发现于人系统中。分泌形式是单蛋白LT的三聚体，而LT的表面形式是两种相关分子LT和LT的络合物。主要形式是具有组成12的异源三聚体，然而，21异源三聚体也存在。同源三聚体的仅有已知的细胞表面受体是两种TNF受体，P55，P75和HVEM。相反，LT12异源三聚体不结合这些TNF受体，而是结合LT受体LTR。LT与LTR的结合

20、在淋巴管生成和炎症中发挥重要作用。有效和特异性地阻断LT与LTR的结合的抗体的开发在患者中调节LTR介导的应答方面是非常有益的。0004发明概述0005LT12是TNF配体家族的独特成员，因为其是两种不同链LT和LT的异源三聚体，而不是其他LT家族成员发现的单链的同源三聚体。该家族分子的受体发现结合在三聚体链之间的裂口中，如果配体是同源三聚体，所有三个裂口是相同的，并且结合在裂口中的单一抗体预计将同时阻断所有三个结合位点。相反，LT12异源三聚体展现出三种不同裂口其可表示为，和，并且直到本发明，并未清楚单一抗体可结合异源三聚体并且有效地阻断受体结合的所有位点，从而完全阻断生物活性。值得注意的是

21、，本发明的抗体不结合LT3或结合LT3，但和阻断TNF受体结合的方式不同并且和现有技术的抗LT12抗体相比具有改善的功能。0006例如，在一个实施方案中，本发明的抗体和现有技术的抗体如本文中使用的，术语LT是指除非另有说明相比，更有效地阻断LT与LTR的结合和/或通过LTR更有效地阻断LT信号传导的一种或多种生物效果。例如，在一个实施方案中，这些抗体导致阻断大于70的诱导的细胞因子产生。在另外的实施方案中，这些抗体导致阻断大于80的诱导的细胞因子产生。在一个实施方案中，这些抗体导致阻断大于90的诱导的细胞因子产生。在一个实施方案中，这些抗体导致阻断大于95的诱导的细胞因子产生。在另外的实施方案

22、中，这种抗体抑制LT结合和/或LT诱导的细胞因子产生的IC50小于约005UG/ML。在一个实施方案中，这种抗体抑制LT结合和/或LT诱导的细胞因子产生的IC50小于约100NM。在一个实施方案中，这种抗体抑制LT结合和/或LT诱导的细胞因子产生的IC50小于约30NM。在一个实施方案中，这种抗体抑制LT结合和/或LT诱导的细胞因子产生的IC50小于约10NM。在一个实施方案中，这种抗体抑制LT结合和/或LT诱导的细胞因子产生的IC50小于约3NM。一组这种抗体已经被开发并且这些抗体中的一些结合的抗原表位已经被映射。在优选的实施方案中，本发明的抗体还结合非人灵长类例如短尾猴的LT的抗原表位。还

23、已经阐述这些抗体的可变区的结构。该组抗体的说明书CN102341411ACN102341425A2/92页7CDR例如CHOTHIA或KABATCDR可用于产生结合LT并阻断LT诱导的信号传导的结合分子例如人源化抗体，修饰的抗体，单链结合分子。因此，本发明涉及结合分子，包含特异于LT的一个或多个结合位点例如可变重链区和可变轻链区，其阻断LT与LTR的结合，并且当和现有技术的抗体比较时具有改善的功能性能。0007在一个方面中，本发明涉及一种分离的结合分子或包含其抗原结合区域的分子，其在这样的条件下在细胞中结合淋巴细胞毒素LT并且使LT诱导的生物活性阻断至少约70，在该条件下参照抗体B9由以登录号

24、HB11962保藏在ATCC的细胞系B9C91产生在细胞中使所述LT诱导的生物活性阻断约50。0008在另外的方面中，本发明涉及一种分离的结合分子或包含其抗原结合区域的分子，其在细胞中以IC50小于100NM结合淋巴细胞毒素LT并且使LT诱导的生物活性阻断。0009在另外的方面中，本发明涉及一种分离的结合分子或包含其抗原结合区域的分子，其结合淋巴细胞毒素LT并且使LTRIG与细胞的结合阻断至少85。0010在另外的方面中，本发明涉及分离的结合分子或包含其抗原结合区域的分子，其中LT诱导的生物活性是IL8释放。0011在一个实施方案中，结合分子包含人氨基酸序列。0012在一个实施方案中，结合分子

25、包含其抗原结合区域，包含人氨基酸序列，所述人氨基酸序列包含抗体恒定区序列或其片段。0013在一个实施方案中，本发明涉及结合分子，其中人恒定区是已经改变以降低与至少一种FC受体结合的IGG1恒定区。0014在一个实施方案中，本发明涉及结合分子，其中人恒定区是已经改变以增强与至少一种FC受体结合的IGG1恒定区。0015在一个实施方案中，本发明涉及结合分子，其是人源化的。0016在一个实施方案中，LT诱导的生物活性被阻断至少约80。在一个实施方案中，LT诱导的生物活性被阻断至少约90。在一个实施方案中，LTBRIG结合被阻断至少约90。0017在一个实施方案中，结合分子或包含其抗原结合区域的分子在

26、细胞中以IC50小于30NM使LT诱导的生物活性阻断。0018在一个实施方案中，结合分子或包含其抗原结合区域的分子在细胞中以IC50小于10NM使LT诱导的生物活性阻断。0019在另外的实施方案中，本发明的结合分子或包含其抗原结合区域的分子在细胞中以IC50小于3NM使LT诱导的生物活性阻断。0020在一个实施方案中，结合分子结合LT上两个位点从而未残留用于LTR结合的位点。0021在一个实施方案中，结合分子是全长抗体。在一个实施方案中，结合分子是SCFV分子。0022在另外的实施方案中，本发明涉及特异性结合LT的抗原表位的结合分子，其中所述抗体与所述LT抗原表位的结合以剂量依赖性方式被102

27、抗体竞争性阻断。0023在一个实施方案中，LT的氨基酸193和194对于抗体结合是关键的。说明书CN102341411ACN102341425A3/92页80024在另外的实施方案中，本发明涉及特异性结合LT的抗原表位的结合分子，其中所述抗体与所述LT抗原表位的结合以剂量依赖性方式被AOD9抗体竞争性阻断。0025在另外的实施方案中，本发明涉及特异性结合LT的抗原表位的结合分子，其中所述抗体与所述LT抗原表位的结合以剂量依赖性方式被101/103抗体竞争性阻断。0026在另外的实施方案中，本发明涉及特异性结合LT的抗原表位的结合分子，其中所述抗体与所述LT抗原表位的结合以剂量依赖性方式被105

28、抗体竞争性阻断。0027在一个实施方案中，LT的氨基酸96，97，98，106，107和108对于抗体结合是关键的。0028在另外的实施方案中，本发明涉及特异性结合LT的抗原表位的结合分子，其中所述抗体与所述LT抗原表位的结合以剂量依赖性方式被9B4抗体竞争性阻断。0029在一个实施方案中，LT的氨基酸96，97和98对于抗体结合是关键的。0030在另外的实施方案中，本发明涉及特异性结合LT的抗原表位的结合分子，其中所述抗体与所述LT抗原表位的结合以剂量依赖性方式被A1D5抗体竞争性阻断。0031在一个实施方案中，LT的氨基酸172对于抗体结合是关键的。0032在另外的实施方案中，本发明涉及特

29、异性结合LT的抗原表位的结合分子，其中所述抗体与所述LT抗原表位的结合以剂量依赖性方式被107抗体竞争性阻断。0033在另外的实施方案中，本发明涉及特异性结合LT的抗原表位的结合分子，LT的氨基酸151和153对于抗体结合是关键的。0034在一个实施方案中，本发明涉及特异性结合LT的抗原表位的分离的抗体，其中所述抗体与所述LT抗原表位的结合以剂量依赖性方式被108抗体竞争性阻断。0035在一个实施方案中，结合分子包含人氨基酸序列。0036在一个实施方案中，人氨基酸序列是抗体恒定区序列。0037在一个实施方案中，抗体是人源化的。0038在另外的方面中，本发明涉及一种包含重链可变区和轻链可变区的淋

30、巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中所述轻链和重链CDR衍生自选自AOD9，108，107，A1D5，102，101/103，9B4和105的抗体。0039在另外的方面中，本发明涉及包含重链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDR衍生自所述AOD9抗体。0040在另外的方面中，本发明涉及包含重链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重

31、链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDR衍生自108抗体。0041在另外的方面中，本发明涉及包含重链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDR衍生自107抗体。0042在另外的方面中，本发明涉及包含重链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3

32、，其中CDR衍生自A1D5抗体。说明书CN102341411ACN102341425A4/92页90043在另外的方面中，本发明涉及包含重链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDR衍生自102抗体。0044在另外的方面中，本发明涉及包含重链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDR衍生自101/103抗体。0045在另外

33、的方面中，本发明涉及包含重链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDR衍生自105抗体。0046在另外的方面中，本发明涉及包含重链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDR衍生自9B4抗体。0047在另外的方面中，本发明涉及包含重链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2

34、和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRH1包含序列GFSLX1X2Y/SGX3H其中X是任意氨基酸。0048在另外的方面中，本发明涉及包含重链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRH2包含序列VIWX1GGX2TX3X4NAX5FX6S其中X是任意氨基酸。0049在另外的方面中，本发明涉及包含轻链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述

35、轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL1包含序列RASX1SVX2X3X4X5或X1ASQDX2X3X4X5LX6其中X是任意氨基酸。0050在另外的方面中，本发明涉及包含轻链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL2包含序列RAX1RLX2D其中X是任意氨基酸。0051在另外的方面中，本发明涉及包含轻链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变

36、区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL2包含序列X1X2SX3X4X5S其中X是任意氨基酸。0052在另外的方面中，本发明涉及包含轻链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3，其中CDRL3包含序列X1QX2X3X4X5PX6T其中X是任意氨基酸。0053在另外的方面中，本发明涉及包含轻链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含轻链CDRCDRL1、CDRL2

37、和CDRL3，其中CDRL3包含序列LX1X2DX4FPX6T其中X是任意氨基酸。0054在另外的方面中，本发明涉及包含轻链可变区和轻链可变区的淋巴细胞毒素结合分子，所述重链可变区包含105抗体变体的重链CDRCDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含105变体的轻链CDRCDRL1、CDRL2和CDRL3。0055在一个实施方案中，本发明涉及结合分子，其溶解度大于100或120MG/ML。0056在一个实施方案中，结合分子包含105变体版本L10的轻链可变区。说明书CN102341411ACN102341425A5/92页100057在一个实施方案中，结合分子包含105变体版本H

38、1的重链可变区。0058在一个实施方案中，结合分子包含105变体版本H1的重链可变区或其CDR和105变体L10的轻链可变区或其CDR。0059在一个实施方案中，本发明涉及组合物，包含本发明的结合分子和载体。0060在一个实施方案中，本发明涉及一种治疗受试者的方法，所述受试者将受益于使用抗LT结合分子的治疗，包括向所述受试者施用所述分子，使得所得进行所述治疗。0061在一个实施方案中，所述受试者患有由炎症表征的疾患。0062在一个实施方案中，炎性疾患选自风湿性关节炎，多发性硬化，克罗恩病，溃疡性结肠炎，移植，狼疮，炎症性肝病，牛皮癣，干燥综合征，多发性硬化例如SPMS，病毒诱导的肝炎，自身免疫

39、性肝炎，I型糖尿病，动脉硬化症和病毒休克综合征。0063在一个实施方案中，炎性疾患是风湿性关节炎。0064在一个实施方案中，受试者患有癌症。在一个实施方案中，癌症选自多发性骨髓瘤和顽性滤泡性淋巴瘤。0065在一个方面中，本发明涉及编码本发明的结合分子的核酸分子。在一个实施方案中，核酸分子在载体中。0066在一个实施方案中，本发明涉及宿主细胞，包含所述载体。0067在一个实施方案中，本发明涉及制备抗体或结合分子的方法，包括I培养权利要求66所述的宿主细胞，使得所述抗体或结合分子在宿主细胞培养基中分泌；II将所述抗体或结合分子从所述培养基分离。0068在另外的方面中，本发明涉及包含本发明的结合分子

40、的组合物在制备药物中的用途。0069在另外的实施方案中，所述药物用于治疗和炎症有关的疾患。0070附图简要说明0071图1A、1B和1C示出使用用于抗LT抗体的IL8释放测定的抑制曲线。在组A中，空心菱形表示102抗体，空心方形表示105抗体，实心三角形表示A0D9抗体，空心三角形表示B9抗体，实心圆形表示C37抗体，以及空心圆形表示B27抗体。在组B中，实心圆形表示105抗体以及空心三角形表示107抗体。组C表示9B4抗体的抑制曲线。0072图2A2G提供柱状图结果，其示出注射MOPC21鼠IGG1抗体用作同种型对照的嵌合HUSCID小鼠的MOMA1巨噬细胞的状态图2B，MLTBRMIGG1

41、图2C，抗体BBF6MIGG1图2D；抗体B9MIGG1图2E；抗体LT102图2F，抗体LT105图2G。野生型C57BL/6切片也示于图2A。0073图3A3G提供柱状图结果，其示出人LT12的阻断的HEV的减少。MOPC21鼠IGG1抗体用作同种型对照图3B，MLTBRMIGG1图3C，抗体BBF6MIGG1图3D；抗体B9MIGG1图3E；抗体LT102图3F，抗体LT105图3G。野生型C57BL/6切片也示于图3A。0074图4组A提供图，其示出抗体LT102和LT105在其中测量LTRIG或FC与表达LT的细胞的阻断的阻断测定中表现出优异的效力。在组A中实心方形表示LTRIG，空

42、心圆形表示102抗体，空心方形表示105抗体，空心三角形表示B9抗体，空心菱形表示C37抗体并且实心圆形表示B27抗体。组B显示出抗体9B4的LTRIG或FC的阻断的类似的说明书CN102341411ACN102341425A6/92页11优异的效力。0075图5提供LTRIG阻断测定如图4中的数据，其示出抗体102空心三角形，105实心圆形，A1D5空心菱形，107实心三角形，A0D9B空心圆形和103实心菱形都比B9空心多边形B27空心反向三角和C37空心方形更有效地阻断。LTBR显示为实心方形。0076图6示出LT12异源三聚体的图，包括三个不同裂口，和，包括两个B亚基和单一A亚基。00

43、77发明详述0078I定义0079应当注意术语“一个”或“一种”实体指一个或多个该种实体；例如，“一种LT结合分子”应理解为代表一个或多个LT结合分子如本文中使用的，术语LT是指LT12，除非另有说明。因此，术语“一个”或“一种”，“一个或多个”以及“至少一个”在本文中可进行互换。0080本文中所用的术语“多肽”意欲同时包括了单数和复数的“多肽”，并指由酰胺键也称作肽键线性连接的单体氨基酸所构成的一种分子。术语“多肽”指两个或多个氨基酸的任何链，且不指定产物的具体长度。因此，肽、二肽、三肽、寡肽、“蛋白”、“氨基酸链”或任何其他用来指代两个或多个氨基酸链的术语都包含在“多肽”的定义之内，且术语

44、“多肽”可用来取代任何上述术语或与之互换。术语“多肽”还意欲指多肽表达后修饰的产物，包括但不限于糖基化，乙酰化，磷酸化，酰胺化，通过已知的保护/阻断基团进行衍生化，蛋白水解裂解，或通过非天然存在的氨基酸进行修饰。多肽可衍生自天然的生物来源或通过重组技术生产，但不一定需要转译自指定的核酸序列。它可通过任何方式生成，包括化学合成。0081本发明的多肽包含特异于本文更详细描述的LT的至少一个结合位点。因此，本多肽在本文也称为“结合分子”。在一个实施方案中，本发明的结合分子是抗LT抗体或修饰的抗体。0082在一个实施方案中，本发明的多肽是分离的。“分离的”多肽或其片段，变体或衍生物指一种不存在于其天然

45、环境中的多肽。在一个实施方案中，不要求达到特定的纯化水平。例如，一种分离的多肽可取自其自然的或天然的环境中。在宿主细胞中表达的重组生产的多肽和蛋白被认为对于本发明的目的而言是分离的，因为它们是通过任何合适的技术分离、分割、或者部分或充分纯化的天然或重组多肽。0083本文中所用的术语“衍生自”指定蛋白是指多肽的来源。在一个实施方案中，衍生自特定起始多肽的多肽或氨基酸序列是可变区序列例如VH和/或VL或其相关序列例如CDR或衍生自其的框架区。在一个实施方案中，衍生自特定起始多肽的氨基酸序列不是连续的。例如，在一个实施方案中，一个、二个、三个、四个、五个或六个CDR例如CHOTHIA或KABATCD

46、R衍生自本发明的结合分子中使用的起始抗LT抗体。在一个实施方案中，衍生自特定起始多肽或氨基酸序列的多肽或氨基酸序列所具有的氨基酸序列和所述起始序列或其部分基本上一致，其中所述部分由下列构成至少35氨基酸、510个氨基酸、至少1020个氨基酸、至少2030个氨基酸、或至少3050个氨基酸、或本领域普通技术人员鉴别为具有在起始序列中的来源的。说明书CN102341411ACN102341425A7/92页120084本发明的多肽还包括前述多肽的片段、衍生物、类似物或变体及其任意组合。术语“片段”、“变体”、“衍生物”和“类似物”在涉及本发明的结合分子时包括任何至少保留了一些相应分子的结合性能的多肽

47、。除在本发明其他地方讨论的特定抗体片段之外，本发明的多肽片段包括蛋白水解片段以及缺失片段。本发明的结合分子的变体包括如上所述的片段，还包括具有由氨基酸替换、缺失或插入所得的变更氨基酸序列的多肽。变体可以是天然存在的或是非天然存在的。非天然存在的变体可通过本领域已知的突变技术进行制备。变体多肽可包含保守或非保守氨基酸替换、缺失或添加。因此，多肽中的氨基酸残基可被来自相同侧链家族的另外氨基酸残基取代。在另外的实施方案中，氨基酸链可被侧链家族成员的顺序和/或组成不同的结构上类似的链取代。或者，在另外的实施方案中，可对多肽的全部或部分随机引入突变。0085在一个实施方案中，本发明的多肽是抗体分子或修饰

48、的抗体分子，包含含有六种CDR的至少一种抗LT抗体结合位点即，衍生自结合LT的抗体的三种轻链CDR和衍生自结合LT的相同或不同抗体的三种重链CDR。在一个实施方案中，本发明的结合分子包含一个结合位点，包含衍生自结合LT的抗体的轻链可变区和衍生自结合LT的抗体的重链可变区。在一个实施方案中，本发明的结合分子包含至少两个结合位点。在一个实施方案中，结合分子包含两个结合位点。在一个实施方案中，结合分子包含多于两个的结合位点。在一个实施方案中，本发明涉及这些分离的LT结合分子或编码它们的核酸分子。0086在一个实施方案中，本发明的结合分子是单体。在另外的实施方案中，本发明的结合分子是多聚体。例如，在一

49、个实施方案中，本发明的结合分子是二聚体。在一个实施方案中，本发明的二聚体是同源二聚体，包含两个相同的单体亚基。在另外的实施方案中，本发明的二聚体是异源二聚体，包含两个不同的单体亚基。二聚体的亚基可包含一种或多种多肽链。例如，在一个实施方案中，二聚体包含至少两个多肽链。在一个实施方案中，二聚体包含两个多肽链。在另外的实施方案中，二聚体包含四个多肽链例如抗体分子中的情况。0087在一个实施方案中，本发明的结合分子是单价的，即包含一个LT靶结合位点例如SCFV分子中的情况。在一个实施方案中，本发明的结合分子是多价的，即包含多于一个的靶结合位点。在另外的实施方案中，结合分子包含至少两个结合位点。在一个实施方案中，结合分子包含两个结合位点例如抗体的情况中。在一个实施方案中，结合分子包含三个结合位点。在另外的实施方案中，结合分子包含四个结合位点。在另外的实施方案中，结合分子包含多于四个结合位点。0088本文中所用的术语“化合价”指结合分子中的潜在结合位点的数量。结合分子可以是“单价的”并且具有单一结合位点，或者结合分子可以是“多价的”例如二价、三价、四价或更多价。各结合位点特异性结合一个靶分子或靶分子上的特定位点例如抗原表位。当结合分