丙氨酸和亮氨酸含量高的弱苦味玉米低聚肽及其制备方法.pdf

1、(10)申请公布号 CN 102994598 A (43)申请公布日 2013.03.27 CN 102994598 A *CN102994598A* (21)申请号 201210492616.6 (22)申请日 2012.11.27 C12P 21/06(2006.01) (71)申请人 广州合诚实业有限公司 地址 510530 广东省广州市萝岗区云埔 （白 云） 工业区云诚路 8 号 (72)发明人 周雪松 申世强 曾建新 蒋文真 (74)专利代理机构 广州市华学知识产权代理有 限公司 44245 代理人 裘晖 (54) 发明名称 丙氨酸和亮氨酸含量高的弱苦味玉米低聚肽 及其制备方法 (5

2、7) 摘要 本发明属于农副产品高附加值加工利用技术 领域， 公开了一种丙氨酸和亮氨酸含量高的弱苦 味玉米低聚肽及其制备方法。该制备方法分为以 下步骤 ：（1） 玉米蛋白粉的分散、 水化 ；（2） 糊化、 - 高温淀粉酶酶解、 脱脂、 去淀粉 ；（3） 酶解 ；（4） 灭酶、 脱色 ；（5） 粗滤、 超滤、 纳滤、 干燥， 即得弱苦 味玉米低聚肽。该弱苦味玉米低聚肽中蛋白质的 质量百分比为85.42%87.63%， 相对分子量小于 1000Da肽的质量百分比为92.44%94.21%， 丙氨 酸的质量百分比为6.75%6.94%， 亮氨酸的质量 百分比为14.12%14.66% ； 游离氨基酸的

3、质量百 分比为 1.12% 1.36%， 可广泛用作保健食品、 普 通食品的原料， 尤其可用于醒酒护肝产品。 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 8 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 2 页 说明书 8 页 1/2 页 2 1. 一种丙氨酸和亮氨酸含量高的弱苦味玉米低聚肽的制备方法， 其特征在于 ： 包括以 下步骤 ： （1） 玉米蛋白粉的分散、 水化 ： 将玉米蛋白粉粉碎， 用去离子水配制为玉米蛋白溶液， 将 玉米蛋白溶液分散、 水化 ； （2） 糊化、 脱脂、 去淀粉 ： 调节分散、 水化好的玉米蛋白溶液的 pH 值为 5 7， 加

4、热至 80 85， 并保持 20min 60min ； 加入相当于玉米蛋白粉质量 0.1% 1% 的 - 高温淀 粉酶， 在 80 85条件下， 搅拌酶解 30min 60min 后， 钝化 - 高温淀粉酶活性， 降温 冷却， 离心， 去脂肪和液体， 取沉淀 ； （3） 酶解 ： 用去离子水将步骤 （2） 得到的沉淀搅拌分散为玉米蛋白浆， 保证玉米蛋白浆 中蛋白质的质量百分比为 5% 20%， 调节玉米蛋白浆的 pH 值为 6 7， 加入相当于玉米蛋 白浆中蛋白质质量 0.5% 2% 的中性蛋白酶于 50 55搅拌水解 1h 2h， 再加入相当 于玉米蛋白浆中蛋白质质量 0.5% 2% 的酸性

5、蛋白酶于 50 55搅拌水解 4h 8h， 至 酶解结束 ； （4） 灭酶、 脱色 ： 酶解结束后， 升温， 加入活性炭粉末搅拌混匀， 恒温搅拌 30 60min ； （5） 粗滤、 超滤、 纳滤 ： 将灭酶、 脱色后的玉米蛋白浆粗滤， 压滤后的清液通过超滤， 滤过 液再经过纳滤， 完成脱盐、 去游离氨基酸并浓缩， 干燥， 得到丙氨酸和亮氨酸含量高的弱苦 味玉米低聚肽。 2.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于 ： 步骤 （1） 中所述的玉米蛋白粉中蛋白 质的质量百分为 60% 以上 ； 所述的粉碎是指将玉米蛋白粉粉碎至 80 目 ； 所述的玉米蛋白溶液中玉米蛋白粉的终浓度的质量百分比为

6、 5% 20% ； 所述的分散、 水化的剪切速度为 2000rpm 3000rpm， 时间为 1020min。 3. 根据权利要求 1 所述的制备方法， 其特征在于 ： 步骤 （2） 中所述的 pH 值通过使用氢 氧化钠溶液调节 ； 所述的搅拌酶解的搅拌速度为 36rpm ； 所述的钝化 - 高温淀粉酶活性是指将酶解液在 95 100保持 10min 20min; 所述的降温冷却是指冷却到 55 60 ； 所述的离心是在 4000rpm 6000rpm 下离心 10min 20min。 4.根据权利要求3所述的制备方法， 其特征在于 ： 所述的氢氧化钠溶液的浓度为1mol. L-1 5mol.

7、L-1。 5.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于 ： 步骤 （3） 中所述的去离子水的温度为 50 55。 6.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于 ： 步骤 （4） 中所述的升温是指温度升至 80 85 ； 所述的活性炭粉末的加入量相当于玉米蛋白浆中蛋白质质量的 0.2% 1% ； 所用活性 炭为 200 目以上的活性炭。 7. 根据权利要求 1 所述的制备方法， 其特征在于 ： 步骤 （5） 中所述的粗滤是指将灭酶、 脱色后的玉米蛋白浆泵入板框式硅藻土过滤机粗滤 ； 所述的超滤是指压滤后的清夜先通过截留分子量 100kDa 的超滤膜超滤， 滤过液再通 权 利 要 求 书 CN

8、 102994598 A 2 2/2 页 3 过截留分子量 5kDa 的超滤膜超滤 ； 所述的纳滤是指滤过液经过孔径为 1nm 的纳滤膜纳滤 ； 所述的干燥通过干燥塔干燥， 操作参数优选为进口温度为 160 170， 出口温度为 70 90。 8. 一种丙氨酸和亮氨酸含量高的弱苦味玉米低聚肽， 通过权利要求 1 7 任一项所述 的制备方法得到。 9. 根据权利要求 1 所述的丙氨酸和亮氨酸含量高的弱苦味玉米低聚肽， 其特征在于 ： 所述的丙氨酸和亮氨酸含量高的弱苦味玉米低聚肽中蛋白质的质量百分比为 85.42% 87.63%， 相对分子量小于1000Da肽的质量百分比为92.44%94.21%

9、， 丙氨酸的质量百分比 为 6.75% 6.94%， 亮氨酸的质量百分比为 14.12% 14.66% ； 游离氨基酸的质量百分比为 112% 136%。 权 利 要 求 书 CN 102994598 A 3 1/8 页 4 丙氨酸和亮氨酸含量高的弱苦味玉米低聚肽及其制备方法 技术领域 0001 本发明属于农副产品高附加值加工利用技术领域， 具体涉及一种丙氨酸和亮氨酸 含量高的弱苦味玉米低聚肽及其制备方法。 背景技术 0002 玉米是世界上三大粮食作物之一， 也是我国传统农作物。 2009年， 我国玉米产量已 达 1.64 亿吨， 约占谷物产量 20%， 位居世界第二位。玉米的主要用途之一是生

10、产玉米淀粉， 湿磨法生产玉米淀粉过程中的主要副产品是玉米蛋白粉 （Corn Gluten Meal， CGM） ， 也称黄 粉， 玉米蛋白粉一般含60%左右的蛋白质， 主要成分为玉米醇溶蛋白(68%)、 谷蛋白(22%)和 球蛋白 (1.2%)。玉米蛋白质中含有高比例的亮氨酸、 异亮氨酸、 缬氨酸、 丙氨酸等疏水性氨 基酸和脯氨酸、 谷氨酸等， 但赖氨酸、 色氨酸等必需氨基酸含量较低， 这种独特的氨基酸组 成使玉米蛋白水溶性差， 营养价值不高， 限制了玉米蛋白质的深加工利用。长期以来， 玉米 蛋白粉主要作为畜禽廉价的饲料来源或随废液自然排放。据不完全统计， 全国每年随废液 自然排放的玉米蛋白粉

11、在 8 万吨以上， 不仅浪费了资源， 而且造成了环境污染。因此研究玉 米蛋白质的深加工有着重要的社会经济意义。 0003 近年来， 研究发现， 玉米蛋白氨基酸组成的不平衡性使得其具有独特的生理功能， 通过科学合理的生物工程手段可获得具有多种生理功能的活性肽， 包括易消化吸收、 抗氧 化、 消除疲劳、 降低血氨浓度、 降血压、 促进乙醇代谢等生理活性肽， 其中促进乙醇代谢功效 方面， 因玉米低聚肽与目前已有市售解酒、 醒酒药物不同， 属天然绿色保健食品， 作用机理 明确， 能迅速解酒护肝， 缓解醉酒带来的身体不适， 无防腐剂等化学添加剂、 无中药成分、 无 副作用， 安全性高， 具有良好的市场应

12、用前景， 具有醒酒功效的玉米低聚肽已成为国内外研 发的热点。 0004 玉米醒酒肽是通过提高血液中的丙氨酸和亮氨酸浓度而产生稳定的辅脱氢酶 NAD+， 增强乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的活性， 促进体内乙醇的分解和代谢， 从而降低血液中 乙醇的浓度， 对酒精引起的肝脏损害可起到预防作用。所以， 可以用丙氨酸和亮氨酸的含 量， 特别是以低聚肽形式存在的丙氨酸、 亮氨酸含量来衡量玉米醒酒肽的醒酒效果。 0005 天然玉米蛋白分子由于氢键、 疏水键、 二硫键等作用， 肽链卷曲于蛋白分子内部近 似于球状， 结构紧密且有较强的疏水性， 很难被蛋白酶水解 ； 另外， 玉米黄粉中还存在相当 量的淀粉、 油脂和色素

13、等， 影响玉米蛋白质的深加工利用。目前， 国内外玉米蛋白质深加工 方面研究主要集中在如何高效酶解玉米蛋白， 获得高得率的小分子量玉米低聚肽。玉米低 聚肽制备突出的难题包括四个方面 ：（1） 产品纯度低， 即玉米低聚肽蛋白质含量偏低， 主要 是前期玉米蛋白粉提纯处理做得不到位， 影响了产品的质量 ；（2） 制备工艺繁琐、 未经科学 优化， 成本高， 难以工业化实施 ；（3） 玉米活性肽的口感苦味浓甚至刺激， 很难被大众接受， 推广应用受到限制 ；（4） 玉米低聚肽具有多种生理功效， 但没有针对某一特定功效研发， 产 品功效不突出。如专利 CN101531700A 公开了以玉米黄粉 （蛋白含量 6

14、0% 左右） 为原料， 采 用碱水处理， 除去淀粉、 油脂等杂质得到高纯度玉米蛋白料渣， 再将此料渣预处理、 酶水解、 说 明 书 CN 102994598 A 4 2/8 页 5 离心过滤、 浓缩干燥制备出蛋白质含量 85% 以上、 分子量分布在 2000Da 以下的玉米低聚肽 粉， 该发明中碱性蛋白酶用量为 5% 8%、 中性蛋白酶用量为 5% 8%， 总酶用量达到 10% 16%， 耗水、 碱、 酸量大， 产品得率 （玉米肽与玉米蛋白粉质量之比） 22.3% 24%， 产品的制造 成本非常高 ； 另外专利中没有脱色去异味工艺、 没有描述产品风味， 也没有具体针对产品的 某一功效设计 ；

15、专利 CN102028093A 公开了以玉米黄粉为原料， 采用碱性蛋白酶 Alcalase、 复合蛋白酶 Protamex 分段酶解， 酶解产物经离心分离， 上清液分别经 100kDa、 10 6kDa 截 断分子量的超滤膜超滤， 再将滤过液浓缩、 喷雾干燥获得玉米醒酒肽粉， 该产品中分子量小 于 1200Da 的肽段占 73.19%， 丙氨酸和亮氨酸的含量分别大于 6.43% 和 12.42%， 产品的玉米 肽纯度低、 风味情况没有描述， 另外因发明中仅通过粗分离和超滤去除大分子物质， 获得的 产品中游离氨基酸含量、 灰分含量没有提供数据， 实际以低聚肽形式存在的丙氨酸、 亮氨酸 含量不清楚

16、 ； 专利 CN102172293A 公开了一种玉米活性小肽醒酒剂制备方法， 采用碱水处理 玉米蛋白粉提纯， 再加入碱性蛋白酶Alcalase45%、 风味蛋白酶Flavourzyme和复合蛋白 酶Protamex13%分段水解， 酶解产物离心分离后上清液经过二级超滤膜分离获得主要分 子量为 200 1000Da 的小肽， 该法用酶量大， 达到 5% 8%。 发明内容 0006 为了解决上述现有技术的难点和不足之处， 本发明的首要目的在于提供一种丙氨 酸和亮氨酸含量高的弱苦味玉米低聚肽的制备方法。 该制备方法采用脱脂、 脱淀粉处理， 结 合酶解、 活性碳选择性吸附、 浓缩、 干燥制备出丙氨酸、

17、 亮氨酸含量高的弱苦味玉米低聚肽， 成本低廉， 适合工业化生产。 0007 本发明的另一个目的在于提供通过上述制备方法得到的丙氨酸和亮氨酸含量高 的弱苦味玉米低聚肽。该肽可用作保健食品、 普通食品的原料， 尤其可用于醒酒护肝产品。 0008 本发明是通过下述技术方案来实现的 ： 一种丙氨酸和亮氨酸含量高的弱苦味玉米 低聚肽的制备方法， 包括以下步骤 ： 0009 （1） 玉米蛋白粉的分散、 水化 ： 将玉米蛋白粉粉碎， 用去离子水配制为玉米蛋白溶 液， 将玉米蛋白溶液分散、 水化 ； 0010 （2） 糊化、 脱脂、 去淀粉 ： 调节分散、 水化好的玉米蛋白溶液的 pH 值为 5 7， 加热

18、至 80 85， 并保持 20min 60min， 使得玉米蛋白分子结构充分展开， 并且使其中的淀 粉充分糊化 ； 加入相当于玉米蛋白粉质量 0.1% 1% 的 - 高温淀粉酶， 在 80 85条 件下， 搅拌酶解 30min 60min 后， 钝化 - 高温淀粉酶活性， 降温冷却， 离心， 去脂肪和液 体， 取沉淀 ； 沉淀即为脱脂和去淀粉后的提纯玉米蛋白 ； 0011 （3） 酶解 ： 用去离子水将步骤 （2） 得到的沉淀搅拌分散为玉米蛋白浆， 保证玉米蛋 白浆中蛋白质的质量百分比为5%20%， 调节玉米蛋白浆的pH值为67， 加入相当于玉米 蛋白浆中蛋白质质量 0.5% 2% 的中性蛋白

19、酶于 50 55搅拌水解 1h 2h， 再加入相 当于玉米蛋白浆中蛋白质质量 0.5% 2% 的酸性蛋白酶于 50 55搅拌水解 4h 8h， 至酶解结束 ； 0012 （4）灭酶、 脱色 ： 酶解结束后， 升温， 加入活性炭粉末搅拌混匀， 恒温搅拌 30 60min， 实现灭酶、 脱色、 提升丙氨酸和亮氨酸的含量 ； 0013 （5） 粗滤、 超滤、 纳滤 ： 将灭酶、 脱色后的玉米蛋白浆粗滤， 压滤后的清液通过超滤， 说 明 书 CN 102994598 A 5 3/8 页 6 滤过液再经过纳滤， 完成脱盐、 去游离氨基酸并浓缩， 干燥， 得到丙氨酸和亮氨酸含量高的 弱苦味玉米低聚肽。 0

20、014 步骤 （1）中所述的玉米蛋白粉 （又称黄粉） ， 要求至少达到饲料用玉米蛋白粉 NYT685-2003 规定， 优选一级饲料用玉米蛋白粉 ； 0015 所述的玉米蛋白粉中蛋白质的质量百分比为 60% 以上 ； 0016 所述的粉碎是指将玉米蛋白粉粉碎至 80 目 ； 0017 所述的玉米蛋白溶液中玉米蛋白粉的终浓度的质量百分比为 5% 20% ； 0018 所述的分散、 水化的剪切速度为 2000rpm 3000rpm， 时间为 1020min。 0019 步骤 （2） 中所述的 pH 值通过使用氢氧化钠溶液调节 ； 0020 所述的氢氧化钠溶液的浓度为 1mol.L-1 5mol.L

21、-1； 0021 所述的搅拌酶解的搅拌速度为 36rpm ； 0022 所述的钝化 - 高温淀粉酶活性是指将酶解液在 95 100保持 10min 20min; 0023 所述的降温冷却是指冷却到 55 60 ； 0024 所述的离心是在 4000rpm 6000rpm 下离心 10min 20min。 0025 步骤 （3） 中所述的去离子水的温度为 50 55。 0026 步骤 （4） 中所述的升温是指温度升至 80 85 ； 0027 所述的活性炭粉末的加入量相当于玉米蛋白浆中蛋白质质量的 0.2% 1% ； 所用 活性炭为 200 目以上的活性炭。 0028 步骤 （5） 中所述的粗滤

22、是指将灭酶、 脱色后的玉米蛋白浆泵入板框式硅藻土过滤 机粗滤 ； 0029 所述的超滤是指压滤后的清夜先通过截留分子量 100kDa 的超滤膜超滤， 滤过液 再通过截留分子量 5kDa 的超滤膜超滤 ； 0030 所述的纳滤是指滤过液经过孔径为 1nm 的纳滤膜纳滤 ； 0031 所述的干燥优选通过干燥塔干燥， 操作参数优选为进口温度为 160 170， 出 口温度为 70 90。 0032 一种丙氨酸和亮氨酸含量高的弱苦味玉米低聚肽， 由上述方法制备得到， 所制备 得到的玉米低聚肽中蛋白质的质量百分比为 85.42% 87.63%， 相对分子量小于 1000Da 肽 的质量百分比为 92.4

23、4% 94.21%， 丙氨酸的质量百分比为 6.75% 6.94%， 亮氨酸的质量 百分比为 14.12% 14.66% ； 游离氨基酸的质量百分比为 1.12% 1.36%， 该玉米低聚肽可 广泛用作保健食品、 普通食品的原料， 尤其可用于制备醒酒护肝产品。 0033 本发明与现有技术相比， 具有如下优点和有益效果 ： 0034 （1） 本发明采用高温糊化、 - 高温淀粉酶降解、 离心分离工艺， 一方面高效去除 玉米蛋白粉中的淀粉、 脂肪， 提升酶解底物玉米蛋白粉的纯度， 另一方面持续高温处理可 有效打开玉米蛋白的紧密结构， 降低其疏水性， 便于后续酶解， 提高玉米肽产品得率 （相对 分子量

24、小于 1000Da 肽的质量百分比为 92.44% 94.21%） ， 此法能耗低、 操作方便、 易于工 业化实现。目前研究打开玉米蛋白的紧密结构一般采用高温高压处理 （如 121左右处 理 10min 以上） 、 超微粉碎、 超声波处理等工艺， 或采用变性剂如亚硫酸钠等， 前者如专利 CN101126103A、 CN101411494A 等， 能耗高、 对设备要求高 ； 后者如专利 CN1786183A 等， 添加 说 明 书 CN 102994598 A 6 4/8 页 7 的变性剂会产生残留， 降低产品的安全性。 目前研究去除玉米蛋白粉中的淀粉、 脂肪一般采 用碱液处理离心再高温或低温淀

25、粉酶处理离心工艺， 如专利 CN101531700A、 CN102172293A 等， 这种方法在碱液处理离心中除掉了油脂， 同时也损失了玉米蛋白粉中的可溶性蛋白， 降 低了产品得率 ； 也有报道采用有机溶剂萃取油脂后再处理淀粉工艺， 存在操作繁琐、 残留安 全性问题。 0035 （2） 本发明酶解工艺中采用调节初始浆液 pH 值至 6.0 7.0、 中性蛋白酶酶解引 起玉米蛋白浆pH值降至5.0以下加入酸性蛋白酶酶解， 组合梯度酶解可充分发挥酶组合的 作用优势， 提高酶解效率和产品得率， 酶用量14%即可， 且避免引入过多的酸液、 碱液， 生 产成本大大降低。 另外， 本发明采用中性蛋白酶和

26、酸性蛋白酶组合酶解， 避免了大部分文献 报道中采用碱性酶酶解， 可显著降低酶解产物的苦味， 改善产品风味。 0036 （3） 本发明通过科学优选活性碳和吸附工艺控制选择性吸附色素物质和苦味物 质达到脱色、 去异味， 同时该活性碳具有对含丙氨酸、 亮氨酸的低聚肽吸附率低特点， 可明 显提升丙氨酸、 亮氨酸低聚肽在产品中的含量， 提升产品的醒酒护肝功效， 也非常易于工业 化。 0037 本发明旨在以玉米蛋白粉 （黄粉） 为原料， 采用脱脂、 脱淀粉处理， 结合梯度酶解、 活性碳选择性吸附、 浓缩、 干燥制备出弱苦味的玉米低聚肽， 该肽蛋白质含量 85% 以上， 相 对分子量小于 1000Da 低聚

27、肽占 90% 以上， 游离氨基酸含量低于 1.5%， 苦味弱、 特征氨基酸 （丙氨酸、 亮氨酸） 含量高， 低聚肽中含有的丙氨酸、 亮氨酸含量分别达到 6.75%、 14.1% 以上， 可广泛用作保健食品、 普通食品的原料， 尤其可用于醒酒护肝产品。本发明通过预处理、 酶 解、 精制工艺的科学优选实现非常经济性的工业化制备玉米低聚肽， 产品品质好， 苦味弱、 易于和其他食品配料搭配， 醒酒护肝功效突出， 可以作为优质功能性基料广泛应用于各类 食品、 保健品中。 本发明可实现玉米精深加工副产物的高附加值综合利用， 提升玉米精深加 工企业经济效益， 促进玉米种植、 加工、 养殖的良性循环。 具体实

28、施方式 0038 下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述， 但本发明的实施方式不限于此。 0039 实施例 1 0040 （1） 玉米蛋白粉的分散、 水化 ： 将玉米蛋白粉 （蛋白质含量 60%， 购于山东西王集 团） 粉碎至 80 目， 用去离子水将玉米蛋白粉配制成质量百分比为 10% 的玉米蛋白溶液， 用搅 拌机以 2000rpm 的转速将玉米蛋白粉分散、 水化 20min ； 0041 （2） 糊化、 脱脂、 去淀粉 ： 用摩尔浓度为 3mol.L-1的氢氧化钠溶液将玉米蛋白粉溶 液pH调节至6.0， 加热至82， 并保持40min， 使得玉米蛋白分子结构充分展开， 并且使其中 的淀粉

29、充分糊化 ； 加入相当于玉米蛋白粉质量的0.5%的-高温淀粉酶 （SUKAMy-Hi LQ20， 苏柯汉生物工程有限公司） ， 在 36rpm、 82条件下酶解 45min， 酶解结束后， 酶解液于 95 保持 15min， - 钝化高温淀粉酶的活性， 然后降温冷却至 60， 采用离心分离机以 5000r/ min 转速离心 15min， 去脂肪和液体， 固体渣即为脱脂和去除淀粉后的提纯玉米蛋白粉 ； 0042 （3） 酶解 ： 用 55去离子水将固体渣搅拌分散成玉米蛋白浆， 保证浆液中蛋白质 含量为10% ； 调节浆液pH值至6.5， 55恒温下， 加入相当于玉米蛋白浆中蛋白质质量1%的 中

30、性蛋白酶 （Neutrase0.8L， 诺维信 （中国） 投资有限公司） 搅拌水解 1.5h 后， 再加入相当于 说 明 书 CN 102994598 A 7 5/8 页 8 玉米蛋白浆中蛋白质质量 1% 的酸性蛋白酶 （杰能科食品级酸性蛋白酶 Protex26L， 无锡杰 能科生物工程有限公司） 搅拌水解 6h ； 0043 （4） 灭酶、 脱色 ： 酶解结束后升温至 85， 加入相当于玉米蛋白浆液中蛋白质重量 的 0.6% 的活性碳粉末 （200 目） 搅拌混匀， 恒温 36rpm 搅拌 45min， 实现灭酶、 吸附脱色以及 提升产物中含丙氨酸和亮氨酸的低聚肽含量 ； 0044 （5）

31、粗滤、 超滤、 纳滤 ： 将含活性碳的玉米蛋白浆液泵入板框式硅藻土过滤机粗 滤， 压滤后的清液首先通过截留分子量为 100kDa 的超滤膜超滤， 滤过液再通过截留分子量 5kDa 的超滤膜超滤， 滤过液再经过孔径为 1nm 的纳滤膜纳滤， 完成脱盐、 去游离氨基酸并浓 缩， 浓缩液经干燥塔干燥， 进口温度控制为 170， 出口温度控制为 80， 干燥结束， 包装， 即得到丙氨酸和亮氨酸含量高的弱苦味玉米低聚肽。 0045 实施例 2 0046 （1） 玉米蛋白粉的分散、 水化 ： 将玉米蛋白粉 （蛋白质含量 60%， 购于山东西王集 团） 粉碎至 80 目， 用去离子水将玉米蛋白粉配制成质量百

32、分比为 20% 的玉米蛋白溶液， 用搅 拌机以 3000rpm 的转速将玉米蛋白粉分散、 水化 10min ； 0047 （2） 糊化、 脱脂、 去淀粉 ： 用摩尔浓度为 5mol.L-1的氢氧化钠溶液将玉米蛋白粉溶 液pH调节至7.0， 加热至80， 并保持60min， 使得玉米蛋白分子结构充分展开， 并且使其中 的淀粉充分糊化 ； 加入相当于玉米蛋白粉质量的 1% 的 - 高温淀粉酶 （SUKAMy-Hi LQ20， 苏柯汉生物工程有限公司） ， 在 36rpm、 80条件下酶解 60min， 酶解结束后， 酶解液于 95 保持 20min， - 钝化高温淀粉酶的活性， 然后降温冷却至 5

33、5， 采用离心分离机以 6000r/ min 转速离心 10min， 去脂肪和液体， 固体渣即为脱脂和去除淀粉后的提纯玉米蛋白粉 ； 0048 （3） 酶解 ： 用 50去离子水将固体渣搅拌分散成玉米蛋白浆， 保证浆液中蛋白质 含量为20% ； 调节浆液pH值至7.0， 50恒温下， 加入相当于玉米蛋白浆中蛋白质质量2%的 中性蛋白酶 （Neutrase0.8L， 诺维信 （中国） 投资有限公司） 搅拌水解 1h 后， 再加入相当于玉 米蛋白浆中蛋白质质量 0.5% 的酸性蛋白酶 （杰能科食品级酸性蛋白酶 Protex26L， 无锡杰 能科生物工程有限公司） 搅拌水解 4h ； 0049 （4

34、） 灭酶、 脱色 ： 酶解结束后升温至 80， 加入相当于玉米蛋白浆液中蛋白质重量 的 0.2% 的活性碳粉末 （400 目） 搅拌混匀， 恒温 36rpm 搅拌 30min， 实现灭酶、 吸附脱色以及 提升产物中含丙氨酸和亮氨酸的低聚肽含量 ； 0050 （5） 粗滤、 超滤、 纳滤 ： 将含活性碳的玉米蛋白浆液泵入板框式硅藻土过滤机粗 滤， 压滤后的清液首先通过截留分子量为 100kDa 的超滤膜超滤， 滤过液再通过截留分子量 5kDa 的超滤膜超滤， 滤过液再经过孔径为 1nm 的纳滤膜纳滤， 完成脱盐、 去游离氨基酸并浓 缩， 浓缩液经干燥塔干燥， 进口温度控制为 160， 出口温度控

35、制为 70， 干燥结束， 包装， 即得到丙氨酸和亮氨酸含量高的弱苦味玉米低聚肽。 0051 实施例 3 0052 （1） 玉米蛋白粉的分散、 水化 ： 将玉米蛋白粉 （蛋白质含量 60%， 购于山东西王集 团） 粉碎至 80 目， 用去离子水将玉米蛋白粉配制成质量百分比为 5% 的玉米蛋白溶液， 用搅 拌机以 2500rpm 的转速将玉米蛋白粉分散、 水化 15min ； 0053 （2） 糊化、 脱脂、 去淀粉 ： 用摩尔浓度为 1mol.L-1的氢氧化钠溶液将玉米蛋白粉溶 液pH调节至5.0， 加热至85， 并保持20min， 使得玉米蛋白分子结构充分展开， 并且使其中 说 明 书 CN

36、102994598 A 8 6/8 页 9 的淀粉充分糊化 ； 加入相当于玉米蛋白粉质量的0.1%的-高温淀粉酶 （SUKAMy-Hi LQ20， 苏柯汉生物工程有限公司） ， 在 36rpm、 85条件下酶解 30min， 酶解结束后， 酶解液于 100 保持 10min， - 钝化高温淀粉酶的活性， 然后降温冷却至 55， 采用离心分离机以 4000r/ min 转速离心 20min， 去脂肪和液体， 固体渣即为脱脂和去除淀粉后的提纯玉米蛋白粉 ； 0054 （3） 酶解 ： 用 50去离子水将固体渣搅拌分散成玉米蛋白浆， 保证浆液中蛋白质 含量为 5% ； 调节浆液 pH 值至 6.0，

37、 50恒温下， 加入相当于玉米蛋白浆中蛋白质质量 0.5% 的中性蛋白酶 （Neutrase0.8L， 诺维信 （中国） 投资有限公司） 搅拌水解 2h 后， 再加入相当于 玉米蛋白浆中蛋白质质量 2% 的酸性蛋白酶 （杰能科食品级酸性蛋白酶 Protex26L， 无锡杰 能科生物工程有限公司） 搅拌水解 8h ； 0055 （4） 灭酶、 脱色 ： 酶解结束后升温至 85， 加入相当于玉米蛋白浆液中蛋白质重量 的 1% 的活性碳粉末 （200 目） 搅拌混匀， 恒温 36rpm 搅拌 60min， 实现灭酶、 吸附脱色以及提 升产物中含丙氨酸和亮氨酸的低聚肽含量 ； 0056 （5） 粗滤、

38、 超滤、 纳滤 ： 将含活性碳的玉米蛋白浆液泵入板框式硅藻土过滤机粗 滤， 压滤后的清液首先通过截留分子量为 100kDa 的超滤膜超滤， 滤过液再通过截留分子量 5kDa 的超滤膜超滤， 滤过液再经过孔径为 1nm 的纳滤膜纳滤， 完成脱盐、 去游离氨基酸并浓 缩， 浓缩液经干燥塔干燥， 进口温度控制为 165， 出口温度控制为 90， 干燥结束， 包装， 即得到丙氨酸和亮氨酸含量高的弱苦味玉米低聚肽。 0057 实施例 4 0058 （1） 玉米蛋白粉的分散、 水化 ： 将玉米蛋白粉 （蛋白质含量 60%， 购于山东西王集 团） 粉碎至 80 目， 用去离子水将玉米蛋白粉配制成质量百分比为

39、 15% 的玉米蛋白溶液， 用搅 拌机以 3000rpm 的转速将玉米蛋白粉分散、 水化 15min ； 0059 （2） 糊化、 脱脂、 去淀粉 ： 用摩尔浓度为 4mol.L-1的氢氧化钠溶液将玉米蛋白粉溶 液pH调节至6.0， 加热至80， 并保持30min， 使得玉米蛋白分子结构充分展开， 并且使其中 的淀粉充分糊化 ； 加入相当于玉米蛋白粉质量的0.8%的-高温淀粉酶 （SUKAMy-Hi LQ20， 苏柯汉生物工程有限公司） ， 在 36rpm、 80条件下酶解 50min， 酶解结束后， 酶解液于 95 保持 20min， - 钝化高温淀粉酶的活性， 然后降温冷却至 60， 采用

40、离心分离机以 5000r/ min 转速离心 20min， 去脂肪和液体， 固体渣即为脱脂和去除淀粉后的提纯玉米蛋白粉 ； 0060 （3） 酶解 ： 用 55去离子水将固体渣搅拌分散成玉米蛋白浆， 保证浆液中蛋白质 含量为 10% ； 调节浆液 pH 值至 6.5， 55恒温下， 加入相当于玉米蛋白浆中蛋白质质量 0.5% 的中性蛋白酶 （Neutrase0.8L， 诺维信 （中国） 投资有限公司） 搅拌水解 1.5h 后， 再加入相当 于玉米蛋白浆中蛋白质质量 0.5% 的酸性蛋白酶 （杰能科食品级酸性蛋白酶 Protex26L， 无 锡杰能科生物工程有限公司） 搅拌水解 6h ； 006

41、1 （4） 灭酶、 脱色 ： 酶解结束后升温至 80， 加入相当于玉米蛋白浆液中蛋白质重量 的 0.4% 的活性碳粉末 （200 目） 搅拌混匀， 恒温 36rpm 搅拌 40min， 实现灭酶、 吸附脱色以及 提升产物中含丙氨酸和亮氨酸的低聚肽含量 ； 0062 （5） 粗滤、 超滤、 纳滤 ： 将含活性碳的玉米蛋白浆液泵入板框式硅藻土过滤机粗 滤， 压滤后的清液首先通过截留分子量为 100kDa 的超滤膜超滤， 滤过液再通过截留分子量 5kDa 的超滤膜超滤， 滤过液再经过孔径为 1nm 的纳滤膜纳滤， 完成脱盐、 去游离氨基酸并浓 缩， 浓缩液经干燥塔干燥， 进口温度控制为 160， 出

42、口温度控制为 70， 干燥结束， 包装， 说 明 书 CN 102994598 A 9 7/8 页 10 即得到丙氨酸和亮氨酸含量高的弱苦味玉米低聚肽。 0063 实施例 5 0064 （1） 玉米蛋白粉的分散、 水化 ： 将玉米蛋白粉 （蛋白质含量 60%， 购于山东西王集 团） 粉碎至 80 目， 用去离子水将玉米蛋白粉配制成质量百分比为 15% 的玉米蛋白溶液， 用搅 拌机以 3000rpm 的转速将玉米蛋白粉分散、 水化 15min ； 0065 （2） 糊化、 脱脂、 去淀粉 ： 用摩尔浓度为 4mol.L-1的氢氧化钠溶液将玉米蛋白粉溶 液pH调节至6.0， 加热至80， 并保持3

43、0min， 使得玉米蛋白分子结构充分展开， 并且使其中 的淀粉充分糊化 ； 加入相当于玉米蛋白粉质量的0.8%的-高温淀粉酶 （SUKAMy-Hi LQ20， 苏柯汉生物工程有限公司） ， 在 36rpm、 80条件下酶解 50min， 酶解结束后， 酶解液于 95 保持 20min， - 钝化高温淀粉酶的活性， 然后降温冷却至 60， 采用离心分离机以 5000r/ min 转速离心 20min， 去脂肪和液体， 固体渣即为脱脂和去除淀粉后的提纯玉米蛋白粉 ； 0066 （3） 酶解 ： 用 55去离子水将固体渣搅拌分散成玉米蛋白浆， 保证浆液中蛋白质 含量为 10% ； 调节浆液 pH 值

44、至 6.5， 55恒温下， 加入相当于玉米蛋白浆中蛋白质质量 0.5% 的中性蛋白酶 （Neutrase0.8L， 诺维信 （中国） 投资有限公司） 搅拌水解 1.5h 后， 再加入相当 于玉米蛋白浆中蛋白质质量 0.5% 的酸性蛋白酶 （杰能科食品级酸性蛋白酶 Protex26L， 无 锡杰能科生物工程有限公司） 搅拌水解 6h ； 0067 （4） 灭酶 ： 酶解结束后升温至 80， 恒温 36rpm 搅拌 40min 灭酶。 0068 （5） 粗滤、 超滤、 纳滤 ： 将灭酶后的玉米蛋白浆液泵入板框式硅藻土过滤机粗滤， 压 滤后的清液首先通过截留分子量 100kDa 的超滤膜超滤， 滤过

45、液再通过截留分子量 5kDa 的 超滤膜超滤， 滤过液再经过孔径为 1nm 的纳滤膜纳滤， 完成脱盐、 去游离氨基酸并浓缩， 浓 缩液经干燥塔干燥， 进口温度控制为 160， 出口温度控制为 70， 干燥结束， 包装， 即得到 丙氨酸和亮氨酸含量高的弱苦味玉米低聚肽。 0069 以上实施例 1 4 制得的玉米低聚肽粉经 10 位经验丰富的人员感官评定苦味弱， 直接用水溶解口服， 或加入牛奶、 果汁等饮料溶解口服， 可为广大人群接受， 也易通过简单 风味调配技术开发出风味良好的食品。实施例 5 为不加活性碳吸附组， 实施例 5 制得的玉 米低聚肽粉经 10 位经验丰富的人员感官评定苦味较强， 需

46、要通过调配或加入苦味掩蔽剂 改善风味提高接受性。 0070 分别采用 GB/T5009.3、 GB/T5009.4、 GB/T5009.5 规定的方法测定实施例 1 5 制 得的玉米低聚肽粉水分、 灰分、 蛋白质含量 ； 采用按GB/T22729-2008中6.3规定的方法分析 实施例 1 5 制得的玉米低聚肽粉肽含量 ； 采用 GB/T22729-2008 附录 A 高效凝胶过滤色谱 法分析实施例 1 5 制得的玉米低聚肽粉相对分子量小于 1000Da 肽所占比例 ； 采用杨月 欣、 王光亚主编的 食用食物营养成分分析手册 （中国轻工业出版社， 2002 年第一版） 提供 的游离氨基酸、 水

47、解氨基酸分析方法检测实施例 1 5 制得的玉米低聚肽粉中游离氨基酸 质量和总氨基酸质量， 其中 ： 低聚肽中丙氨酸质量为玉米低聚肽粉中丙氨酸含量减去游离 丙氨酸质量所得值占玉米低聚肽粉中总氨基酸含量比值， 低聚肽中亮氨酸含量为玉米低聚 肽粉中亮氨酸质量减去游离亮氨酸含量所得值占玉米低聚肽粉中总氨基酸质量比值， 结果 见表 1。 0071 表 1 实施例 1 5 制得的玉米低聚肽粉分析检测结果 说 明 书 CN 102994598 A 10 8/8 页 11 0072 0073 注 ： 其中实施例 1 5 制得的玉米低聚肽粉分别记为 1#、 2#、 3#、 4#、 5#。 0074 由表 1 可

48、见， 采用本发明方法实施例 1 4 制得的玉米低聚肽中蛋白质的质量百 分比为 85.42% 87.63%， 相对分子量小于 1000Da 肽的质量百分比为 92.44% 94.21%， 丙氨酸的质量百分比为 6.75% 6.94%， 亮氨酸的质量百分比为 14.12% 14.66% ； 游离氨 基酸的质量百分比为 1.12% 1.36% ； 实施例 5 为不加活性碳吸附组， 除添加活性碳外所有 工艺参数和实施例4一样， 实施例5制得的玉米低聚肽蛋白质含量、 游离氨基酸含量略有增 加， 但低聚肽中丙氨酸、 亮氨酸含量明显下降， 丙氨酸含量为 5.86%， 亮氨酸含量为 12.97%， 可见活性碳选择性吸附可明显提高玉米低聚肽中丙氨酸、 亮氨酸含量。 0075 上述实施例为本发明较佳的实施方式， 但本发明的实施方式并不受上述实施例的 限制， 其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、 修饰、 替代、 组合、 简化， 均应为等效的置换方式， 都包含在本发明的保护范围之内。 说 明 书 CN 102994598 A 11