IL18结合蛋白.pdf

1、(10)申请公布号 CN 102659944 A (43)申请公布日 2012.09.12 CN 102659944 A *CN102659944A* (21)申请号 201210129311.9 (22)申请日 2004.11.12 10/706689 2003.11.12 US 200480039948.2 2004.11.12 C07K 16/24(2006.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 15/63(2006.01) C12N 1/15(2006.01) C12N 1/19(2006.01) C12N 1/21(2006.01) C12N 5/10(2006.

2、01) C12P 21/02(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61K 45/00(2006.01) A61P 1/00(2006.01) A61P 1/02(2006.01) A61P 1/04(2006.01) A61P 1/16(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 5/14(2006.01) A61P 7/06(2006.01) A61P 9/10(2006.01) A61P 11/00(2006.01) A61P 11/06(2006.01) A61P 13/12(2006.01) A61P 15/08(2006.01) A61

3、P 17/00(2006.01) A61P 17/06(2006.01) A61P 17/14(2006.01) A61P 19/02(2006.01) A61P 19/06(2006.01) A61P 25/00(2006.01) A61P 25/14(2006.01) A61P 25/16(2006.01) A61P 25/28(2006.01) A61P 27/02(2006.01) A61P 29/00(2006.01) A61P 31/00(2006.01) A61P 31/04(2006.01) A61P 33/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61

4、P 37/02(2006.01) A61P 37/06(2006.01) A61P 43/00(2006.01) (71)申请人 雅培制药有限公司 地址 美国伊利诺伊州 (72)发明人 T加于尔 B拉布科夫斯基 JW沃斯 L格林 J巴布库克 X-C贾 J韦勒 JS康 B赫德伯格 (74)专利代理机构 中国专利代理(香港)有限公 司 72001 代理人 温宏艳 李炳爱 (54) 发明名称 IL-18 结合蛋白 (57) 摘要 本发明涉及 IL-18 结合蛋白， 特别是结合人 白介素-18(hIL-18)的抗体。 具体地说， 本发明涉 及全人抗体的抗体。 优选地， 抗体具有体外和体内 对于 hIL

5、-18 的高亲和性和 / 或中和 hIL-18 的性 质。本发明的抗体可以是全长抗体或者其抗原结 合部分。还提供了本发明抗体的制备方法和使用 方法。本发明的抗体或抗体部分用于对例如患有 其中 hIL-18 活性是有害的疾病的人受治疗者检 测 hIL-18 和用于抑制 hIL-18 活性。 (30)优先权数据 (62)分案原申请数据 (51)Int.Cl. 权利要求书 11 页 说明书 90 页 序列表 51 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 11 页 说明书 90 页 序列表 51 页 1/11 页 2 1. 一种包括能结合人 IL-18 的抗原结合结

6、构域的结合蛋白， 所述抗原结合结构域包括 至少一个包括选自下面的氨基酸序列的 CDR ： CDR-H1.X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7(SEQ ID NO ： 42)， 其中 ： X1是 S， N， H， R， 或 Y ； X2是 Y， G， R， S， 或 C ； X3是 W， G， Y， D， S， V， 或 I ； X4是 I， H， W， Y， M， L， 或 D ； X5是 G， Y， S， N， 或 H ； X6是 W， 或者不存在 ； 和 X7是 T， S， G， 或者不存在 ； CDR-H2.X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12

7、-X13-X14-X15-X16-X17(SEQ ID NO ： 43)，其 中 ； X1是 F， Y， H， S， 或 V ； X2是 I， 或 F ； X3是 Y， S， 或 W ； X4是 P， Y， 或 S ； X5是 G， S， R， 或 D ； X6是 D， 或 G ； X7是 S， T， G， 或 R ； X8是 E， T， I， 或 N ； X9是 T， Y， N， I， K， 或 H ； X10是 R， Y， 或 S ； X11是 Y， N， 或 S ； X12是 S， P， A， 或 V ； X13是 P， S， 或 D ； X14是 T， L， 或 S ； X15是 F，

8、 K， 或 V ； X16是 Q， S， 或 K ； 和 X17是 G， 或者不存在 ； CDR-H3.X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18(SEQ ID NO ： 44)， 其中 ； X1是 V， D， E， S， 或 C ； X2是 G， R， D， S， K， L， Y， 或 A ； X3是 S， G， Y， 或 R ； X4是 G， S， Y， N， T， 或 D ； X5是 W， S， A， G， Y， 或 T ； X6是 Y， G， S， F， W， 或 N ； X7是 P， S， F， Y，

9、V， G， W， 或 V ； X8是 Y， F， D， P， M， I， 或 N ； 权 利 要 求 书 CN 102659944 A 2 2/11 页 3 X9是 T， W， D， L， Y， E， P， F， 或 G ； X10是 F， D， Y， H， V， Y， 或者不存在 ； X11是 D， Y， F， L， 或者不存在 ； X12是 I， D， Y， 或者不存在 ； X13是 Y， 或者不存在 ； X14是 Y， 或者不存在 ； X15是 G， 或者不存在 ； X16是 M， 或者不存在 ； X17是 D， 或者不存在 ； 和 X18是 V， 或者不存 ； CDR-L1.X1-X2

10、-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17(SEQ ID NO ： 45)，其 中 ； X1是 R， 或 K ； X2是 A， G， 或 S ； X3是 S ； X4是 E， R， Q， 或 H ； X5是 S， I， T， 或 N ； X6是 I， V， L， 或 F ； X7是 S， G， L， N， 或 R ； X8和 S， G， Y， R， N， H， 或 D ； X9是 N， G， Y， R， 或 S ； X10是 L， Y， S， 或 D ； X11是 A， L， N， V， G， 或 D ； X12是 A， N， E

11、， K， G， 或者不存在 ； X13是 K， T， N， 或者不存在 ； X14是 N， Y， T， 或者不存在 ； X15是 Y， L， 或者不存在 ； X16是 L， C， Y， 或者不存在 ； 和 X17是 A， D， 或者不存在 ； CDR-L2.X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7(SEQ ID NO ： 46)， 其中 ： X1是 T， G， S， W， 或 E ； X2是 A， V， T， I， 或 L ； X3是 S， 或 F ； X4是 T， I， N， S， R， 或 Y ； X5是 R， 或 L ； X6是 A， Q， E， 或 F ； 和 X7是 T， 或 S ；

12、 和 CDR-L3.X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10(SEQ ID NO ： 47)， 其中 ： 权 利 要 求 书 CN 102659944 A 3 3/11 页 4 X1是 Q， 或 M ； X2是 Q， H， 或 Y ； X3是 Y， N， G， S， 或 R ； X4是 N， H， Y， D， G， V， L， 或 I ； X5是 N， G， I， Y， S， Q， F， 或 E ； X6是 W， S， T， L， I， 或 F ； X7是 P， L， T， D， 或 I ； X8是 S， L， P， C， W， I， 或 F ； X9是 I， T， S，

13、或者不存在 ； 和 X10是 T， 或者不存在。 2. 根据权利要求 1 的结合蛋白， 其中所述至少一个 CDR 包括选自下面的氨基酸序列 ： SEQ ID NO. ： 6 的残基 31-35 ； SEQ ID NO. ： 6 的残基 50-66 ； SEQ ID NO. ： 6 的残基 99-110 ； SEQ ID NO. ： 7 的残基 24-34 ； SEQ ID NO. ： 7 的残基 50-56 ； SEQ ID NO. ： 7 的残基 89-98 ； SEQ ID NO. ： 8 的残基 31-37 ； SEQ ID NO. ： 8 的残基 52-67 ； SEQ ID NO.

14、： 8 的残基 100-110 ； SEQ ID NO. ： 9 的残基 24-35 ； SEQ ID NO. ： 9 的残基 21-27 ； SEQ ID NO. ： 9 的残基 90-98 ； SEQ ID NO. ： 10 的残基 31-35 ； SEQ ID NO. ： 10 的残基 50-65 ； SEQ ID NO. ： 10 的残基 98-107 ； SEQ ID NO. ： 11 的残基 24-34 ； SEQ ID NO. ： 11 的残基 50-56 ； SEQ ED NO. ： 11 的残基 89-97 ； SEQ ED NO. ： 12 的残基 31-37 ； SEQ

15、ID NO. ： 12 的残基 52-67 ； SEQ ID NO. ： 12 的残基 100-108 ； SEQ ID NO. ： 13 的残基 24-35 ； SEQ ID NO. ： 13 的残基 51-57 ； SEQ ED NO. ： 13 的残基 90-98 ； SEQ ID NO. ： 14 的残基 31-35 ； SEQ ID NO. ： 14 的残基 50-66 ； SEQ ID NO. ： 14 的残基 99-111 ； SEQ ID NO. ： 15 的残基 24-40 ； SEQ ID NO. ： 15 的残基 56-62 ； SEQ ID NO. ： 15 的残基 9

16、5-103 ； SEQ ID NO. ： 16 的残基 31-37 ； SEQ ID NO. ： 16 的残基 52-67 ； SEQ ID NO. ： 16 的残基 100-109 ； SEQ ID NO. ： 17 的残基 24-35 ； SEQ ID NO. ： 17 的残基 51-57 ； SEQ ID NO. ： 17 的残基 90-98 ； SEQ ID NO. ： 18 的残基 31-35 ； SEQ ID NO. ： 18 的残基 20-36 ； SEQ ID NO. ： 18 的残基 99-108 ； SEQ ID NO. ： 19 的残基 24-34 ； SEQ ID NO

17、. ： 19 的残基 50-56 ； SEQ ID NO. ： 19 的残基 89-97 ； 权 利 要 求 书 CN 102659944 A 4 4/11 页 5 SEQ ID NO. ： 20 的残基 31-35 ； SEQ ID NO. ： 20 的残基 52-67 ； SEQ ID NO. ： 20 的残基 100-108 ； SEQ ID NO. ： 21 的残基 24-35 ； SEQ ID NO. ： 21 的残基 51-57 ； SEQ ID NO. ： 21 的残基 90-98 ； SEQ ID NO. ： 22 的残基 31-35 ； SEQ ID NO. ： 22 的残基

18、 50-66 ； SEQ ID NO. ： 22 的残基 99-116 ； SEQ ID NO. ： 23 的残基 24-39 ； SEQ ID NO. ： 23 的残基 55-61 ； SEQ ID NO. ： 23 的残基 94-102 ； SEQ ID NO. ： 24 的残基 31-37 ； SEQ ID NO. ： 24 的残基 52-67 ； SEQ ID NO. ： 24 的残基 100-109 ； SEQ ID NO. ： 25 的残基 24-35 ； SEQ ID NO. ： 25 的残基 51-57 ； SEQ ID NO. ： 25 的残基 90-98 ； SEQ ID

19、NO. ： 26 的残基 31-37 ； SEQ ID NO. ： 26 的残基 52-67 ； SEQ ID NO. ： 26 的残基 100-109 ； SEQ ID NO. ： 27 的残基 24-35 ； SEQ ID NO. ： 27 的残基 51-57 ； SEQ ID NO. ： 27 的残基 90-98 ； SEQ ID NO. ： 28 的残基 31-37 ； SEQ ID NO. ： 28 的残基 52-67 ； SEQ ID NO. ： 28 的残基 100-108 ； SEQ ID NO. ： 29 的残基 24-35 ； SEQ ID NO. ： 29 的残基 51-

20、57 ； SEQ BD NO. ： 29 的残基 90-98 ； SEQ ID NO. ： 30 的残基 31-37 ； SEQ ID NO. ： 30 的残基 52-67 ； SEQ ID NO. ： 30 的残基 99-109 ； SEQ ID NO. ： 31 的残基 24-35 ； SEQ ID NO. ： 31 的残基 51-57 ； SEQ ID NO. ： 31 的残基 90-98 ； SEQ ID NO. ： 32 的残基 31-37 ； SEQ ID NO. ： 32 的残基 52-67 ； SEQ ID NO. ： 32 的残基 100-109 ； SEQ ID NO. ：

21、 33 的残基 24-35 ； SEQ ID NO. ： 33 的残基 51-57 ； SEQ ID NO. ： 33 的残基 90-98 ； SEQ ID NO. ： 34 的残基 31-37 ； SEQ ID NO. ： 34 的残基 52-67 ； SEQ ID NO. ： 34 的残基 100-108 ； SEQ ID NO. ： 35 的残基 24-35 ； SEQ ID NO. ： 35 的残基 51-57 ； SEQ ID NO. ： 35 的残基 90-98 ； SEQ ID NO. ： 36 的残基 31-35 ； SEQ ID NO. ： 36 的残基 50-66 ； SE

22、Q ID NO. ： 36 的残基 99-116 ； SEQ ID NO. ： 37 的残基 24-39 ； SEQ ID NO. ： 37 的残基 55-61 ； SEQ ID NO. ： 37 的残基 94-102 ； SEQ ID NO. ： 38 的残基 31-35 ； SEQ ID NO. ： 38 的残基 50-66 ； SEQ ID NO. ： 38 的残基 99-108 ； SEQ ID NO. ： 39 的残基 24-35 ； SEQ ID NO. ： 39 的残基 51-57 ； SEQ ID NO. ： 39 的残基 权 利 要 求 书 CN 102659944 A 5

23、5/11 页 6 90-98 ； SEQID NO. ： 40 的残基 31-37 ； SEQ ID NO. ： 40 的残基 52-67 ； SEQ ID NO. ： 40 的残基 97-109 ； SEQ ID NO. ： 41 的残基 24-40 ； SEQ ID NO. ： 41 的残基 56-62 ； SEQ ID NO. ： 41 的残基 95-103。 3. 根据权利要求 2 的结合蛋白， 其中所述结合蛋白包括至少 3 个 CDRs。 4. 根据权利要求 2 的结合蛋白， 其中所述抗原结合结构域包括一个 VH。 5. 根据权利要求 4 的结合蛋白， 其中所述 VH包括选自下面的氨

24、基酸序列 ： SEQ ID NO ： 6 ； SEQ ID NO ： 8 ； SEQ ID NO ： 10 ； SEQ ID NO ： 12 ； SEQ ID NO ： 14 ； SEQ ID NO ： 16 ； SEQ ID NO ： 18 ； SEQ ID NO ： 20 ； SEQID NO ： 22 ； SEQ ID NO ： 24 ； SEQ ID NO ： 26 ； SEQ ID NO ： 28 ； SEQ IDNO ： 30 ； SEQ ID NO ： 32 ； SEQ ID NO ： 34 ； SEQ ID NO ： 36 ； SEQ ID NO ： 38 ； 和SEQ ID

25、NO ： 40。 6. 根据权利要求 2 的结合蛋白， 其中所述抗原结合结构域包括一个 VL。 7. 根据权利要求 6 的结合蛋白， 其中所述 VL包括选自下面的氨基酸序列 ： SEQ ID NO ： 7 ； SEQ ID NO ： 9 ； SEQID NO ： 11 ； SEQ ID NO ： 13 ； SEQID NO ： 15 ； SEQ ID NO ： 17 ； SEQ ID NO ： 19 ； SEQ ID NO ： 21 ； SEQ IDNO ： 23 ； SEQ ID NO ： 25 ； SEQ ID NO ： 27 ； SET M NO ： 29 ； SEQID NO ： 31

26、 ； SEQ ID NO ： 33 ； SEQ ID NO ： 35 ； SEQ ID NO ： 37 ； SEQ ID NO ： 39 ； 和 SEQID NO ： 41。 8. 根据权利要求 2 的结合蛋白， 其中所述抗原结合结构域包括一个 VH和一个 VL。 9. 根据权利要求 7 的结合蛋白， 进一步包括一个 VH， 其中所述 VH包括选自下面的氨基 酸序列 ： SEQ ID NO ： 6 ； SEQ ID NO ： 8 ； SEQ ID NO ： 10 ； SEQ ID NO ： 12 ； SEQ ID NO ： 14 ； SEQ ID NO ： 16 ； SEQ ID NO ： 1

27、8 ； SEQ ID NO ： 20 ； SEQ ID NO ： 22 ； SEQ ID NO ： 24 ； SEQ ID NO ： 26 ； SEQ ID NO ： 28 ； SEQ ID NO ： 30 ； SEQ ID NO ： 32 ； SEQID NO ： 34 ； SEQID NO ： 36 ； SEQ ID NO ： 38 ； 和 SEQ ID NO ： 40。 10.根据权利要求8的结合蛋白， 其中所述VL包括SEQ ID NO ： 7的氨基酸序列， 所述VH 包括 SEQ ID NO ： 6 的氨基酸序列。 11. 根据权利要求 2 的结合蛋白， 进一步包括选自人 IgM 恒

28、定区 ； 人 IgG1 恒定区 ； 人 IgG2 恒定区 ； 人 IgG3 恒定区 ； 人 IgG4 恒定区 ； 人 IgE 恒定区和人 IgA 恒定区的重链免疫球 蛋白恒定区。 12. 根据权利要求 11 的结合蛋白， 其中所述重链免疫球蛋白恒定区是人 IgG1 恒定区。 13.根据权利要求12的结合蛋白， 其中所述人IgG1恒定区包括选自SEQ ID NO. ： 2， 和 SEQ ID NO. ： 3 的氨基酸序列。 14. 根据权利要求 2 的结合蛋白， 进一步包括选自人 Ig 恒定区， 和人 Ig 恒定区的 轻链免疫球蛋白恒定区。 15. 根据权利要求 14 的结合蛋白， 其中所述轻链

29、免疫球蛋白恒定区是人 Ig 恒定区， 包括氨基酸序列 SEQ ID NO. ： 4 的氨基酸序列。 16. 根据权利要求 14 的结合蛋白， 其中所述轻链免疫球蛋白恒定区是包括 SEQ ID NO. ： 5 的氨基酸序列的人 Ig 恒定区。 17. 根据权利要求 2 的结合蛋白， 其中所述结合蛋白选自免疫球蛋白分子， scFv ； 单克 权 利 要 求 书 CN 102659944 A 6 6/11 页 7 隆抗体 ； 人抗体 ； 嵌合抗体 ； 人源化抗体 ； 单结构域抗体 ； Fab 片段 ； Fab片段 ； F(ab )2； Fv ； 二硫键连接的 Fv。 18. 根据权利要求 17 的结

30、合蛋白， 其中所述结合蛋白是人抗体。 19. 一种能结合人 IL-18 的结合蛋白， 所述结合蛋白包括 ： 具有选自 SEQ ID NO ： 2 和 SEQ ID NO ： 3 的氨基酸序列的 Ig 重链恒定区 ； 具有选自 SEQ ID NO ： 4， 和 SEQ ID NO ： 5 的氨基酸序列的 IG 轻链恒定区 ； 具有 SEQ ID NO ： 6 的氨基酸序列的 Ig 重链可变区 ； 和 具有 SEQ ID NO ： 7 的氨基酸序列的 Ig 轻链可变区。 20. 一种能结合人 IL-18 的结合蛋白， 所述结合蛋白包括 ： 具有 SEQ ID NO ： 3 的氨基酸序列的 Ig 重

31、链恒定区 ； 具有 SEQ ID NO ： 4 的氨基酸序列的 IG 轻链恒定区 ； 具有 SEQ ID NO ： 6 的氨基酸序列的 Ig 重链可变区 ； 和 具有 SEQ ID NO ： 7 的氨基酸序列的 Ig 轻链可变区。 21. 一种中和结合蛋白， 其中所述中和结合蛋白包括权利要求 1- 20 任一项的结合蛋 白， 其中所述中和结合蛋白能中和 IL-18。 22. 根据权利要求 21 的中和结合蛋白， 其中所述 IL-18 选自人 IL-18 原 ； 成熟 - 人 IL-18 或截短的 - 人 IL-18。 23. 根据权利要求 21 的中和结合蛋白， 其中所述中和结合蛋白减小了 I

32、L-18 结合其受 体的能力。 24. 根据权利要求 23 的中和结合蛋白， 其中所述中和结合蛋白减小了人 IL-18 原 ； 成 熟 - 人 IL-18 或截短的 - 人 IL-18 结合其受体的能力。 25. 根据权利要求 21 的中和结合蛋白， 其中所述中和结合蛋白能减小选自下面的 IL-18 生物活性中的一种或几种 ： Th1 调节 ； Th2 调节 ； Nk 调节 ； 嗜中性白细胞调节 ； 单核细 胞 - 巨噬细胞系调节 ； 嗜中性白细胞调节 ； 嗜酸性细胞调节 ； B- 细胞调节 ； 细胞因子调节 ； 趋化因子调节 ； 粘着分子调节 ； 和细胞募集调节。 26. 根据权利要求 21

33、 的中和结合蛋白， 其中所述中和结合蛋白具有选自下面的解离常 数 (KD) ： 最大大约 10-7M ； 最大大约 10-8M ； 最大大约 10-9M ； 最大大约 10-10M ； 最大大约 10-11M ； 最大大约 10-12M ； 和最大大约 10-13M。 27. 根据权利要求 21 的中和结合蛋白， 其中所述中和结合蛋白具有选自下面的生成速 率 ： 至少大约102M-1s-1； 至少大约103M-1s-1； 至少大约104M-1s-1； 至少大约105M-1s-1； 和至少大 约 106M-1s-1。 28. 根据权利要求 21 的中和结合蛋白， 其中所述中和结合蛋白具有选自下面

34、的离解速 率 ： 最大大约 10-3s-1； 最大大约 10-4s-1； 最大大约 10-5s-1； 和最大大约 10-6s-1。 29. 包括权利要求 1-20 任一项的结合蛋白的标记结合蛋白， 其中所述结合蛋白与可检 测标记物偶联。 30. 权利要求 29 的标记结合蛋白， 其中所述可检测标记物选自放射性标记物， 酶， 荧光 标记物， 发光标记物， 生物发光标记物， 磁性标记物和生物素。 31. 权利要求 30 的标记结合蛋白， 其中所述标记物是选自 3H，14C， 35S，90Y，99Tc，111In， 125I，131I，177Lu，166Ho， 和153Sm 的放射性标记物。 权 利

35、 要 求 书 CN 102659944 A 7 7/11 页 8 32. 包括权利要求 1-20 任一项的结合蛋白的偶联结合蛋白， 其中所述结合蛋白与治疗 性或细胞毒性物质偶联。 33. 权利要求 32 的偶联结合蛋白， 其中所述治疗性或细胞毒性物质选自抗 - 代谢物 ； 烷基化试剂 ； 抗生素 ； 生长因子 ； 细胞因子 ； 抗 - 血管生成药物 ； 抗 - 有丝分裂物质 ； 蒽环霉 素 A ； 毒素 ； 和编程性细胞死亡剂。 34. 编码权利要求 1-20 任一项的结合蛋白氨基酸序列的分离的核酸。 35. 包含权利要求 34 的分离的核酸的载体。 36. 权利要求 35 的载体， 其中所述

36、载体选自 ： pcDNA ； pTT ； pTT3 ； pEFBOS ； pBV ； pJV ； 和 pBJ。 37. 包含权利要求 35 或 36 任一项的载体的宿主细胞。 38. 根据权利要求 37 的宿主细胞， 其中所述宿主细胞是原核细胞。 39. 根据权利要求 38 的宿主细胞， 其中所述宿主细胞是大肠杆菌。 40. 根据权利要求 37 的宿主细胞， 其中所述宿主细胞是真核细胞。 41. 根据权利要求 40 的宿主细胞， 其中所述真核细胞选自原生生物细胞， 动物细胞， 植 物细胞和真菌细胞。 42. 根据权利要求 41 的宿主细胞， 其中所述真核细胞是选自哺乳动物细胞， 鸟类细胞， 和

37、昆虫细胞的动物细胞。 43. 根据权利要求 42 的宿主细胞， 其中所述动物细胞是 CHO 细胞。 44. 根据权利要求 42 的宿主细胞， 其中所述宿主细胞是 COS。 45. 根据权利要求 41 的宿主细胞， 其中所述真核细胞是啤酒糖酵母。 46. 根据权利要求 42 的宿主细胞， 其中所述动物细胞是昆虫 Sf9 细胞。 47.结合人IL-18的结合蛋白的制备方法， 包括在足以产生结合人IL-18的结合蛋白的 条件下在培养基中培养权利要求 37-46 任一项的宿主细胞。 48. 根据权利要求 47 的方法制备的结合蛋白。 49. 包括根据权利要求 1-28 任一项的结合蛋白的结晶结合蛋白，

38、 其中所述结合蛋白以 晶体存在。 50. 权利要求 49 的结晶结合蛋白， 其中所述晶体是没有载体的药学控制释放晶体。 51. 权利要求 49 的结晶结合蛋白， 其中所述结合蛋白具有比所述 结合蛋白可溶性配 对物更大的体内半存留期。 52. 权利要求 49 的结晶结合蛋白， 其中所述结合蛋白保留其生物活性。 53. 一种用于释放结合蛋白的组合物， 所述组合物含有 ： (a) 一种组合物， 其中所述组合物含有根据权利要求 49-52 任一项的结晶结合蛋白， 和 一种成分 ； 和 (b) 至少一种聚合物载体。 54. 根据权利要求 53 的组合物， 其中所述聚合物载体选自下面的一种或几种 ： 聚

39、( 丙 烯酸 )， 聚 ( 氰基丙烯酸酯 )， 聚 ( 氨基酸 )， 聚 ( 酸酐 )， 聚 ( 缩肽 )， 聚 ( 酯 )， 聚 ( 乳酸 )， 聚 ( 乳酸 - 共 - 羟基乙酸 ) 或 PLGA， 聚 (b- 羟基丁酸 )， 聚 (- 己内酯 )， 聚 ( 二氧六环 酮 ) ； 聚 ( 乙二醇 )， 聚 ( 羟丙基 ) 甲基丙烯酰胺， 聚 ( 有机 ) 磷腈 ， 聚 ( 原酯 )， 聚 ( 乙 烯醇 )， 聚 ( 乙烯吡咯烷酮 )， 马来酸酐 - 烷基乙烯基醚共聚物， 多聚醇， 白蛋白， 藻酸盐， 纤 权 利 要 求 书 CN 102659944 A 8 8/11 页 9 维素和纤维素衍

40、生物， 胶原， 纤维蛋白， 明胶， 透明质酸， 低聚糖， glycaminoglycans， 硫酸多 糖， 它们的混合物和它们的共聚物。 55. 根据权利要求 53 的组合物， 其中所述成分选自白蛋白， 蔗糖， 海藻糖， 乳糖醇， 明 胶， 羟丙基 - 环糊精， 甲氧基聚乙二醇和聚乙二醇。 56. 对哺乳动物治疗的方法， 包括对哺乳动物施用有效量的根据权利要求 53 的组合物 的步骤。 57. 一种感兴趣的基因的基因表达的调控方法， 包括下面的步骤 ： (a) 提供 IL-18 调节剂 ； 和 (b) 所述调节剂接触细胞， 其中所述感兴趣的基因选自下面 Genbank 鉴定号确定的基因 ： N

41、M_000389， NM_002198， NM_002163， NM_006144， NM_006515， NM_185， NM_002288， NM_003661， NM_021958， NM_001335， Hs.382006， NM_020125， NM_007210， NM_021798， NM_013324， M11313， D88152， NM_001103， U37519， NM_000697， J03600， NM_014578， S66793， U47054， L19871， M81181， NM_001188， U15460， NM_014417， Z23115， NM_0

42、01713， U45878， U37546， U72649， U49187， J03507， U50360， XM_071866， NM_005623， Z32765， Z11697， XM_071866， U51096， M83667， D87469， L07765， U66468， X14830， L29217， X15880， NM_001851， M27691， M37435， X13589， X16866， X59131， NM_004393， U73328， L19267， U53445， X68277， U48807， NM_001950， U87269， M57730， X52

43、541， J04076， X63741， L07077， M62831， M60830， U53786， NM_001988， NM_000141， M23668， U60062， NM_141， U49973， U89995， U27326， A28102， M25667， L34357， U19523， L01406， U03486， X68285， Z18859， D49958， D43772， AC000099， M57731， X53800， M91036， D16583， X64877， X58431， M16937， NM_014468， X92814， L19314， M266

44、65， D10995， L41147， M24283， S81914， J03171， J00219， NM_000619， NM_000585， U31628， X04500， M27492， X01057， M26062， Y00081， Y00787， Z31695， X06256， X57206， U20734， NM_014879， D31762， D42038， NM_005551， NM_014846， X06182， NM_005551， X07730， M13955， M57710， S83362， NM_002314， NM_005569， U49957， U89922，

45、X140008， U59914， D14497， X59727， NM_000429， U43944， X72755， NM_021230， NM_005951， X78710， X70991， M32011， S77763， M58603， S76638， M69043， U91616， D86425， L13740， U44848， U79251， M27288， AF000234， D50640， L20971， L10343， U77735， NM_003579， U17034， AB000584， X63131， D11428， NM_032940， NM_005035， NM_00

46、3579， M18255， L01087， D38128， 权 利 要 求 书 CN 102659944 A 9 9/11 页 10 Y10375， D15049， M31166， U59877， NM_003579， U64675， S57153， NM_002903， NG_000013， X75042， M83221， NM_000537， U22314， S59049， U70426， U22377， U38480， L10338， M23178， M69203， NM_005409， D79206， NM_005065， NM_004186， J03764， NM_006802， D

47、89077， NM_003037， M91463， D82326， L05568， U96094， X83301， D21267， L31529， M62800， NM_021014， Z35093， NM_005816， L25444， M95787， NM_005421， L47345， M57732， NM_003205， M96956， U19878， M92357， M59465， X83490， U37518， NM_003294， U19261， U78798， S69790， U53476， L15309， U78722， X57809， U79249， AB000464， X

48、77744， U79248， AI420129， HG2981-HT3127， HG3548-HT3749， HG870-HT870， HG4333-HT4603， HG3111-HT3287， HG4593-HT4998， HG961-HT961， HG1877-HT1917， HG3115-HT3291， HG4115-HT4385， 和 HG3925-HT4195。 58. 根据权利要求 57 的方法， 其中所述调节剂是拮抗剂。 59. 根据权利要求 57 的方法， 其中所述调节剂是 IL-18。 60.根据权利要求57的方法， 其中所述调节剂选自根据权利要求1-28任一项的结合蛋 白。

49、 61. 含有权利要求 1-28 任一项的结合蛋白和药学可接受载体的药物组合物。 62. 权利要求 61 的药物组合物， 其进一步含有至少一种用于治疗其中 IL-18 活性是有 害的疾病的另外的治疗药物。 63.权利要求62的药物组合物， 其中所述另外的药物选自 ： 血管生成抑制剂 ； 激酶抑制 剂 ； 共同 - 刺激分子阻断剂 ； 粘着分子阻断剂 ； 抗 - 细胞因子抗体或者其功能片段 ； 甲氨喋 呤 ； 皮质类固醇 ； 环孢菌素 ； 雷帕霉素 ； FK506 ； 和非甾类抗炎药物。 64. 一种减小人 IL-18 活性的方法， 包括使人 IL-18 接触权利要求 1-28 任一项的结合 蛋白， 使得人 IL-18 活性被减小。 65. 一种对患有其中 IL-18 活性是有害的疾病的人患者减小人 IL-18 活性的方法， 包 括对人受治疗者施用权利要求1-28任一项的结合蛋白， 使得人受治疗者中的人IL-18活性 被减小。 66. 一种对患有其中 IL-18 活性是有害的疾病或病症的受治疗者进行治疗的方法， 包 括对受治疗者施用权利要求 1-28 任一项的结合蛋白， 完成治疗。 67. 权利要求 66 的方法， 其中所述疾病选自 ： 类风湿性关节炎， 骨关节炎， 幼年型慢性 关节炎， 莱姆关节炎， 银屑病关节炎， 反应