一种药物组合物.pdf

1、(10)申请公布号 CN 102688231 A (43)申请公布日 2012.09.26 CN 102688231 A *CN102688231A* (21)申请号 201210166310.1 (22)申请日 2012.05.27 A61K 31/37(2006.01) A61K 31/352(2006.01) A61P 29/00(2006.01) A61P 31/12(2006.01) (71)申请人 吉林圣亚医药科技有限公司 地址 133700 吉林省长春市敦化市华康大街 10 号 (72)发明人 李平亚 卢丹 王鹏 刘传贵 王升平 金立群 (74)专利代理机构 吉林长春新纪元专利代

2、理有 限责任公司 22100 代理人 魏征骥 (54) 发明名称 一种药物组合物 (57) 摘要 本发明涉及一种药物组合物， 属于属于医药 领域。包含如下重量份的原料药 ： 伞形花内酯 5-30 份、 7- 羟基 -8- 甲氧基香豆素 5-20 份、 8- 羟 基 -7- 甲氧基香豆素 2-20 份 ； 还包含如下重量 份的原料药 ： 木犀草素 5-20 份 ； 还包含如下重量 份的原料药 ： 4 ,7- 二羟基 -5- 甲氧基黄酮 5-20 份 ； 在制备具有抗炎、 镇痛、 抗病毒作用的药物中 应用。本发明提供了一种新型的抗炎、 镇痛、 抗病 毒药物。 有效物质的剂量可以根据服用方式， 病人

3、 的年龄和体重及病情严重程度和其它类似的因素 而改变， 口服量为 ： 50mg100mg， 每日两次服用。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 7 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 7 页 1/1 页 2 1. 一种药物组合物 ： 其特征在于包含如下重量份的原料药 ： 伞形花内酯 5-30 份、 7- 羟 基 -8- 甲氧基香豆素 5-20 份、 8- 羟基 -7- 甲氧基香豆素 2-20 份。 2. 根据权利要求 1 所述的一种药物组合物 ： 其特征在于还包含如下重量份的原料药 ： 木犀草素 5-20 份。 3. 根据

4、权利要求 2 所述的一种药物组合物， 其特征在于还包含如下重量份的原料药 ： 4 ,7- 二羟基 -5- 甲氧基黄酮 5-20 份。 4.如权利要求1或2或3所述的一种药物组合物在制备具有抗炎、 镇痛、 抗病毒作用的 药物中的应用。 权 利 要 求 书 CN 102688231 A 2 1/7 页 3 一种药物组合物 技术领域 0001 本发明属于医药领域。 背景技术 0002 瑞香属植物 (Daphne L)， 隶属瑞香科 (Thymelaeaceae)， 全球有 70 种， 分布于欧 洲、 北非和亚洲温带和亚热带地区至大洋洲。 我国有35种、 大部产西南部和西北部。 瑞香属 药用植物主要包

5、括黄瑞香 （Daphne giraldii Nitsche） 、 芫花 （D. genkweSieb. et Zucc） 、 长白瑞香 (D. koreana Nakai)、 凹叶瑞香 (D. retusa Hemsl)、 唐古特瑞香 (D. tangutica Maxim)、 白瑞香 （D. papyraceaWall. et Steud） 、 欧亚瑞香 （D. mezereum L） 、 齐墩果瑞香 (D. oleoides Schreb)、 白花欧瑞香 (D. gnidium L)、 渐尖瑞香 (D. acuminate Stocks)、 瑞香 (D. odore Thunb)、 绢手瑞

6、香 (D. siriceaVahl)、 黑海瑞香 (D. ponticaL)、 长梗瑞香 (Daphne pedunculata H. F. Zhou ex C. Y. Chang)， 这些药用植物主要活性成分为香豆 素类、 黄酮类、 木脂素类、 二萜类等化合物， 具有抗炎、 镇痛、 抗肿瘤、 抗疟、 抗血栓、 抗心肌缺 血等药理作用。 0003 香豆素类化合物是瑞香属药用植物中含量最高、 发现最早及最主要的活性成分。 0004 李书慧从祖师麻中分离得到了伞形花内酯 (umbelliferone)、 7- 羟基 -8- 甲氧基 香豆素 (7-hydroxy-8- methoxycoumarin

7、)、 5- 羟基 -7- 甲氧基香豆素 -8-O-D- 葡萄糖 苷(5-hydroxy-7-methoxy- coumarin-8-O-D-glucoside)。 扈晓佳从凹叶瑞香中分离得 到了 8- 羟基 -7- 甲氧基香豆素 (8-hydroxy-7-methoxycoumarin) 等成份。 0005 黄酮类化合物是瑞香属药用植物另一主要成分， 多来自植物的茎皮， 王鹏从黄瑞 香叶中分离得到了 4 ,7- 二羟基 -5- 甲氧基黄酮。许文争从长梗瑞香中分离得到了 5 个黄 酮分别为芹菜素 (apigenin, 3)、 木犀草素等。 0006 上述分离出来的有效成份许多还没有被深入研究，

8、特别是其医药方面的作用， 而 作为药用组合物更是没有报导。 发明内容 0007 本发明提供一种药物组合物， 目的在于制备具有抗炎、 镇痛、 抗病毒作用的药物。 0008 本发明经过发明人的大量试验探索， 在下述重量份范围内都具有良好效果 ： 伞形花内酯5-30份、 7-羟基-8-甲氧基香豆素5-20份、 8-羟基-7-甲氧基香豆素2-20 份。 0009 本发明一种实施方式是 ： 还包含如下重量份的原料药 ： 木犀草素 5-20 份。 0010 本发明一种实施方式是 ： 还包含如下重量份的原料药 ： 4 ,7-二羟基-5-甲氧基黄 酮 5-20 份。 0011 本发明所述一种药物组合物在制备具

9、有抗炎、 镇痛、 抗病毒作用的药物中的应用。 0012 当本发明用于制备抗炎、 镇痛、 抗病毒的药物时， 其口服或胃肠外给药， 均是安全 的， 在口服情况下， 其可以任何常规形式给药， 如散剂、 粒剂、 片剂、 胶囊剂、 丸剂、 溶液剂、 悬 说 明 书 CN 102688231 A 3 2/7 页 4 浮液、 糖浆、 口腔含片、 舌下含片等 ； 当该药物肠胃外给药时， 可采取任何常规形式， 例如静 脉内注射剂、 软膏剂、 栓剂、 和吸入剂等。 0013 本发明制备抗炎、 镇痛、 抗病毒的药物是由有效成分组合物或有效成分组合物与 固体或液体的赋形剂一起构成的， 这里使用的固体或液体的赋形剂在本

10、领域是众所周知 的， 下面举几个具体例子， 散剂是内服的粉末剂， 它的赋形剂有乳糖、 淀粉、 浆糊精、 碳酸钙、 合成或天然硫酸铝、 氧化镁、 硬脂酸镁， 碳酸氢钠、 干燥酵母等 ； 溶液剂的赋形剂有水、 甘油、 1， 2- 丙二醇、 单糖浆、 乙醇、 乙二醇、 聚乙二醇、 山梨糖醇等 ； 软膏剂的赋形剂可以使用脂 油， 含水羊毛脂、 凡士林、 甘油、 蜂腊、 木腊、 液体石腊、 树脂、 高级腊等组合成的疏水剂或亲 水剂。 0014 本发明提供了一种新型的抗炎、 镇痛、 抗病毒药物。有效物质的剂量可以根据服 用方式， 病人的年龄和体重及病情严重程度和其它类似的因素而改变， 口服量为 ： 50

11、mg 100mg， 每日两次服用。 具体实施方式 0015 实施例 1 本发明片剂的制备 伞形花内酯50g、 7-羟基-8-甲氧基香豆素50g、 8-羟基-7-甲氧基香豆素20g， 药用淀 粉适量， 两者充分混合， 按常规方法制成片剂。 0016 实施例 2 本发明颗粒剂的制备 伞形花内酯 175g、 7- 羟基 -8- 甲氧基香豆素 125g、 8- 羟基 -7- 甲氧基香豆素 110g， 加 入制备颗粒剂的常规辅料， 充分混合， 按常规方法制成颗粒剂。 0017 实施例 3 本发明胶囊剂的制备 伞形花内酯 300g、 7- 羟基 -8- 甲氧基香豆素 200g、 8- 羟基 -7- 甲氧基

12、香豆素 200g， 药 用淀粉适量， 两者充分混合， 按常规方法制成胶囊剂。 0018 实施例 4 本发明片剂的制备 伞形花内酯50g、 7-羟基-8-甲氧基香豆素50g、 8-羟基-7-甲氧基香豆素20g， 木犀草 素 50g， 药用淀粉适量， 两者充分混合， 按常规方法制成片剂。 0019 实施例 5 本发明颗粒剂的制备 伞形花内酯 175g、 7- 羟基 -8- 甲氧基香豆素 125g、 8- 羟基 -7- 甲氧基香豆素 110g， 木 犀草素 125g， 加入制备颗粒剂的常规辅料， 充分混合， 按常规方法制成颗粒剂。 0020 实施例 6 本发明胶囊剂的制备 伞形花内酯 300g、 7

13、- 羟基 -8- 甲氧基香豆素 200g、 8- 羟基 -7- 甲氧基香豆素 200g， 木 犀草素 200g， 药用淀粉适量， 两者充分混合， 按常规方法制成胶囊剂。 0021 实施例 7 本发明片剂的制备 伞形花内酯50g、 7-羟基-8-甲氧基香豆素50g、 8-羟基-7-甲氧基香豆素20g， 木犀草 素 50g， 4 ,7- 二羟基 -5- 甲氧基黄酮 50g， 药用淀粉适量， 两者充分混合， 按常规方法制成 片剂。 0022 实施例 8 本发明颗粒剂的制备 伞形花内酯 175g、 7- 羟基 -8- 甲氧基香豆素 125g、 8- 羟基 -7- 甲氧基香豆素 110g， 木 犀草素

14、125g， 4 ,7- 二羟基 -5- 甲氧基黄酮 125g， 加入制备颗粒剂的常规辅料， 充分混合， 说 明 书 CN 102688231 A 4 3/7 页 5 按常规方法制成颗粒剂。 0023 实施例 9 本发明胶囊剂的制备 伞形花内酯 300g、 7- 羟基 -8- 甲氧基香豆素 200g、 8- 羟基 -7- 甲氧基香豆素 200g， 木 犀草素 200g， 4 ,7- 二羟基 -5- 甲氧基黄酮 200g， 药用淀粉适量， 两者充分混合， 按常规方 法制成胶囊剂。 0024 下面结合药效学对本发明的效果作进一步说明。 0025 试验例 1 ： 二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验 材料与方法

15、实验动物 ICR 小鼠 72 只， 雌性， 体重 202g， 清洁级。购自吉林大学实验动物饲养中心。动物合 格证号 ： SCXK( 吉 )2007003。所有动物购入后适应性饲养 2 天， 观察其进食、 活动情况。 0026 实验仪器及试剂 BN 1027 型电子天平 （上海民桥精密科学仪器有限公司） 分析天平 （上海天平仪器厂） 移液枪 （广东丹利科技有限公司） 打孔器、 镊子、 灌胃器、 苦味酸 实验药品 1. 致炎药 ： 二甲苯 （天津市富宇精细化工有限公司产品） ， 批号 ： 061001 2. 阳性药 ： 祖师麻片 （秦皇岛市山海关药业有限责任公司） ， 批号 ： 20110217

16、3. 供试药物 ： 本发明药物组合物。 0027 剂量设计 祖师麻片组相当于人日用量， 祖师麻片按临床剂量为 2.61g/ 人 /day（含瑞香素 22mg/ 人 /day） ， 则算成小鼠剂量为 0.34g/kg/day（含瑞香素 2.85mg kg/day） 。 0028 本发明药物组合物 ： 三个剂量组 ： 低剂量为 13mg/kg/day， 中剂量为 26mg/kg/day， 高剂量 52mg/kg/day。 0029 药品配制 1. 阳性药 ： 取祖师麻片， 除去包衣， 研碎配制成浓度为 34mg/ml 的溶液。 0030 2. 供试药 ： 取本发明药物组合物分别加水配制成浓度为 1

17、.3mg/ml、 2.6mg/ml、 5.2mg/ml 的低、 中、 高浓度的溶液。 0031 实验方法 将 72 只小鼠按照体重随机分为 6 组 ( 空白组、 模型组、 祖师麻片组、 本发明药物组合物 低、 中、 高三个剂量组 )， 每组 12 只。 0032 实验开始后空白组、 模型组灌胃给蒸馏水， 其它组每天灌胃给相应药物溶液 0.1ml/10g。连续给药 7 天， 末次给药 30min 后， 除空白组外， 在其它组小鼠右耳前后面的中 间点各涂抹二甲苯 20l。末次给药 1 小时后处死动物， 两耳中间部位打孔8mm， 称重、 计 算。 0033 计算公式 ： 肿胀度 = 右耳重 - 左耳

18、重 肿胀率 =( 右耳重 - 左耳重 )/ 左耳重 100% 说 明 书 CN 102688231 A 5 4/7 页 6 肿胀抑制率 =（模型组肿胀度 - 给药组肿胀度） / 模型组肿胀度 10 实验结果 表 1 本 发 明 药 物 组 合 物 对 二 甲 苯 致 小 鼠 耳 廓 肿 胀 的 影 响 （ s） 注 : 与模型组比较 *p0.05 ； *p0.01。 0034 讨论 本实验通过二甲苯使小鼠右耳致炎， 将给药组小鼠左右耳质量差与模型组小鼠左右耳 质量差进行比较， 考察本发明药物组合物低、 中、 高剂量组的抗炎效果。 实验发现， 模型组小 鼠右耳肿胀率明显高于空白组 （p0.01）

19、 ， 表明造模成功的。 0035 结果表明 ： 本发明药物组合物三个剂量组 （13、 26、 52mg/kg/day） 对于二甲苯引起 的炎症反应均具有抗炎活性 （p0.05，p0.01） ， 高剂量组与阳性药的抗炎活相似。 0036 试验例 2 小鼠热板实验 材料与方法 实验动物 ICR 小鼠 90 只， 体重 202g， 购自吉林大学实验动物饲养中心。动物合格证号 ： SCXK( 吉 )2007003。所有动物购入后适应性饲养 2 天， 观察其进食、 活动情况。 0037 实验仪器及试剂 YLS-4A 动物智能热板仪 （山东医学科学院设备站） G&GDT-500 型电子天平 （美国双杰兄弟

20、集团有限公司 常熟双杰测试仪器厂） 秒表、 灌胃器、 苦味酸 实验药品 1. 阳性药 ： 祖师麻片 （秦皇岛市山海关药业有限责任公司） ， 批号 ： 20110217 2. 供试药物 ： 本发明药物组合物 ； 剂量设计 祖师麻片组相当于人日用量， 祖师麻片按临床剂量为 2.61g/ 人 /day （含瑞香素 22mg） ， 则算成小鼠剂量为 0.34g/kg/day（含瑞香素 2.85mg） 。 说 明 书 CN 102688231 A 6 5/7 页 7 0038 本发明药物组合物低、 中、 高三个剂量组 ： 低剂量为 13mg/kg/day， 中剂量为 26mg/ kg/day， 高剂量

21、52mg/kg/day） 。 0039 药品配制 1. 阳性药 ： 取祖师麻片， 除去包衣， 研碎配制成浓度为 34mg/ml 的溶液。 0040 2. 供试药 ： 取本发明药物组合物分别加水配制成浓度为 1.3mg/ml、 2.6mg/ml、 5.2mg/ml 的低、 中、 高浓度的溶液。 0041 实验方法 将 90 只小鼠测定给药前痛阈值， 在 550.5条件下， 将小鼠放于动物智能热板仪上， 小鼠舔后足为痛阈指标， 每只小鼠测两次， 两次间隔 30 分钟， 取两次测定的平均值为小鼠 给药前阈值， 给药前阈值 5s 30s 内的小鼠用于试验。 0042 取60只符合测定条件的小鼠， 随机

22、分为5组 (空白组、 阳性药组、 本发明药物组合 物叶低、 中、 高三个剂量组 )。 0043 实验开始后空白组、 模型组灌胃给蒸馏水， 其他组每天灌胃给相应药物溶液 0.1ml/10g。连续给药 7 天， 末次给药后， 测定 30min、 60min、 90min、 120 min 的痛阈值。大 于 60s 按 60s 计。 0044 痛域提高百分率 =（药后平均痛域值 - 药前平均痛域值） / 药前平均痛域值 100 实验结果 表 2 本发明药物组合物对热刺激小鼠痛阈值的影响 （s） 注 : 与模型组比较 *p0.05。 0045 讨论 本实验对小鼠抓趾给予热刺激， 通过对小鼠痛域值、 痛

23、域提高百分率进行测定、 计算。 考察发明药物组合物的镇痛效果。实验发现， 与空白组相比本发明药物组合物高剂量组在 两小时内对热刺激引发的小鼠痛反应时间有明显的延长作用 （p0.05） ， 且药效有良好的延 续性。结果表明 ： 本发明药物组合物高剂量 （52mg/kg/day） 组对于热刺激引发的疼痛具有 说 明 书 CN 102688231 A 7 6/7 页 8 显著的镇痛效果。 0046 实施例 3 抗病毒研究 采用组织细胞培养法和建立流行性感冒动物模型， 对不同浓度的本发明药物组合物进 行体内外抗病毒药效学研究。 0047 1. 细胞准备 Hep-2、 Hela 细胞传代培养 3-5d，

24、 使之成片， 界线清晰， 立体感及折光度强时， 用胰酶消 化， 待细胞面出现针尖样小孔， 吸尽消化液， 取数毫升培养液吹散细胞， 计数， 用培养液稀释 至约 5107/L 后， 接种于 96 孔培养板内， 待细胞长成单层。 0048 2. 药物毒性测定 细胞毒性试验 ： 将本发明药物组合物稀释为 200g/L、 100g/L、 50g/L、 25g/L、 12.5g/L、 6.25g/L、 3.125 g/L、 1.5625g/L（以上均为膏重） 等浓度 ； 将阳性药双黄连稀释为 300 g/L、 150 g/L、 75g/L、 37.5g/L、 18.75g/L、 9.38 g/L、 4.6

25、9g/L 等浓度。将上述用培养液 稀释好的不同浓度的药品滴加于 Hep-2 和 Hela 单层细胞上， 每孔 0.2ml， 37 C 5% CO2孵 箱培养， 每天镜下观察细胞病变 （CPE） ， 求出药液致细胞毒性， 计算药物对细胞毒性浓度。 0049 3. 本发明药物对病毒致细胞病变作用的影响 在 Hep-2、 Hela 细胞上分别加入 10-1-10-6不同浓度的 7 种病毒液， 吸附 1h 后洗去 病毒液， 加入无毒界限药液， 每一病毒稀释度各加 3 复孔， 同时设病毒对照， 细胞对照， 阳性 药物对照组。置 37 C CO2培养箱内培养 , 在不同时间换入同浓度药物， 每天在倒置显微

26、 镜下观察病变 , 连续 7d, 记录各孔病变情况。 0050 4. 各种病毒 TCID50的测定 将各种病毒进行 10 倍递减稀释为 10-1， 10-2， 10-310-6不同稀释度， 并将各种不同 稀释度的病毒感染 Hep-2、 Hela 细胞， 用 96 孔板单层培养。观察细胞病变， 测定各病毒半数 致细胞病变剂量 （TCID50） 。 0051 5. 结果判定及计算方法 以能使 50% 细胞孔发生 CPE 的最高稀释度作为终点 , 用 karber 法计算病毒滴度。 0052 公式 LogTCID50=XM+d-d TCID50： 50% 组织细胞感染量 XM ： 病毒最高浓度稀释度

27、的对数 d ： 稀释度系数 （倍数） 的对数 pi ： 每个稀释度病变百分数的总和 试验结果 1. 各种病毒的 TCID50 CVB3： -4.5 HSV-1SM44： -3.6 AdV-3 ： -4 副流感病毒 ： -4 乙型流感病毒 ： -4 2. 药物对细胞毒性测定结果 说 明 书 CN 102688231 A 8 7/7 页 9 本发明药物组合物对 Hep-2、 Hela 细胞最大无毒浓度 （TC0） 为 12.50g/L， 半数毒性 浓度 （TC50） 为 98.53g/L。双黄连对 Hep-2、 Hela 细胞最大无毒浓度 （TC0） 为 18.75g/L， 半数 毒性浓度 （TC

28、50） 为 90.61g/L。 0053 3. 药物对病毒致细胞病变保护作用结果 在感染 30-100TCID50的 6 种病毒的情况下， 本发明药物组合物在 6.25g/L12.5g/ L 浓度对副流感病毒、 呼吸道合胞病毒、 单纯疱疹病毒 I 型有较明显的抑制其致细胞病变作 用， 对柯萨奇病毒 B3和腺病毒 3 型作用不明显。其作用结果详见表 3、 4。 0054 表 3 本发明药物组合物对病毒致细胞病变作用的保护作用 注 ： - 示无细胞病变 ； 示有延缓细胞病变作用 ； + 示 1/4 以下的细胞病变 ； + 示 1/41/2的细胞有病变 ； +示1/23/4的细胞有病变 ； +示3/4以上的细胞有病变。 0055 表 4 本发明药物组合物抑制细胞病毒感染的半数有效浓度及治疗指数 说 明 书 CN 102688231 A 9