检测中药注射液中高分子量物质的方法.pdf

1、(10)申请公布号 CN 102411033 A (43)申请公布日 2012.04.11 CN 102411033 A *CN102411033A* (21)申请号 201010289975.2 (22)申请日 2010.09.25 G01N 30/02(2006.01) G01N 30/36(2006.01) (71)申请人 张恒 地址 264003 山东省烟台市莱山区清泉路 30-256 号 (72)发明人 张恒 (54) 发明名称 检测中药注射液中高分子量物质的方法 (57) 摘要 检测中药注射液中高分子量物质的方法， 该 方法包括对照溶液的制备 ： 取溶液加水稀释并定 容至刻度得到对

2、照溶液 ； 供试品溶液的制备 ： 取 供试品中药注射液加入超滤离心管中离心， 取残 留物定容得到供试品溶液 ； 检测 ： 分别精密吸取 供试品溶液和对照溶液， 注入高效液相色谱仪， 按 照高效液相色谱法测定， 记录供试品溶液色谱图 和对照溶液色谱图， 测定分子量大于对照溶液的 物质的含量作为中药注射液高分子量物质含量， 最后测量最低检出限。本发明的方法对中药注射 液产品中的高分子量物质进行检测， 对可能带入 的高分子量物质进行有效地监控， 具有非常重要 的意义。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 2 页 CN 102

3、411041 A1/1 页 2 1. 检测中药注射液中高分子量物质的方法， 其特征在于 ： 该方法包括下列步骤 ： a、 对照溶液的制备 ： 取胸腺素 、 人生长激素释放抑制因子 2 种溶液各 2ml， 置于 25ml 容量瓶中， 加水稀释 并定容至刻度 ； 再取上述各容量瓶中溶液 2.5ml， 分别用量瓶定容至 25ml， 即得对照溶液 ； b、 供试品溶液的制备 ： 取供试品中药注射液30ml加入超滤离心管中， 在6000r/min下离心10min， 取残留物定 容至 1ml 即得供试品溶液 ； c、 检测 ： 分别精密吸取供试品溶液和对照溶液注入高效液相色谱仪， 按照高效液相色谱法测定

4、各溶液的色谱， 记录供试品溶液色谱图和对照溶液色谱图， 测定供试品溶液中分子量大于 对照溶液中高分子量物质的物质的含量作为供试品溶液中高分子量物质的含量 ； d、 测量最低检出限 ： 取对照溶液分别依次进样20l、 15l、 10l， 可发现在进样10l核糖核酸酶A的峰 高与基线噪音的比例约为 4 1， 即得最低检出限为 0.07g。 2. 根据权利要求 1 所述的检测中药注射液中高分子量物质的方法， 其特征在于 ： 上 述步骤中高效液相色谱的条件为 ： 色谱柱为凝胶色谱柱 TSK 62000SWxl 柱 ； 流动相为乙 腈 -0.83三氟乙酸溶液 (40 60) ； 检测波长为 214 土

5、lnm ； 流速 0.70 0.85ml/min。 3. 根据权利要求 1 或 2 所述的检测中药注射液中高分子量物质的方法， 其特征在于 ： 所述供试品溶液色谱图中， 各个峰的保留时间均大于对照溶液主峰的保留时间。 权 利 要 求 书 CN 102411033 A CN 102411041 A1/2 页 3 检测中药注射液中高分子量物质的方法 技术领域 0001 本发明属于中药检测技术领域， 具体说是涉及一种检测中药注射液中高分子量物 质的方法。 背景技术 0002 含有高分子量物质的中药注射液产品， 从安全性角度考虑， 患者在应用时需要进 行皮试试验。 但是皮试试验仅能对速发型I型变态反应

6、有预测作用， 且阳性符合度仅30， 即使皮试试验呈阴性也不能说明以后不发生过敏反应， 这是皮试试验无法预测的。 因此， 为 了确保临床用药的安全有效， 对中药注射液产品中高分子量物质的含量进行检测， 对可能 带入的高分子量物质进行有效地监控， 从源头上控制临床过敏反应的发生， 既可以节约宝 贵的临床急救时间， 同时也增加了临床医护人员与患者的便利性， 减轻了患者的用药痛苦， 具有非常重要的意义。 发明内容 0003 本发明的目的在于克服现有技术中的缺陷， 提供一种简便易行、 耗费少、 时间短、 准确性和重现性都很好的检测中药注射液中高分子量物质的凝胶色谱检测方法。 0004 本发明的目的是通过

7、以下方案来实现的 ： 一种检测中药注射液中高分子量物质的 方法， 该方法包括下列步骤 ： 0005 a、 对照溶液的制备 ： 取胸腺素 、 人生长激素释放抑制因子 2 种溶液各 2ml， 置于 25ml 容量瓶中， 加水稀释并定容至刻度 ； 再取上述各容量瓶中溶液 2.5ml， 分别用量瓶定容 至 25ml， 即得对照溶液 ； 0006 b、 供试品溶液的制备 ： 取供试品中药注射液 30ml 加入超滤离心管中， 在 6000r/ min 下离心 10min， 取残留物定容至 1ml 即得供试品溶液 ； 0007 c、 检测 ： 分别精密吸取供试品溶液和对照溶液注入高效液相色谱仪， 按照高效液

8、 相色谱法测定各溶液的色谱， 记录供试品溶液色谱图和对照溶液色谱图， 测定供试品溶液 中分子量大于对照溶液中高分子量物质的物质的含量作为供试品溶液中高分子量物质的 含量 ； 0008 d、 测量最低检出限 ： 取对照溶液分别依次进样 20l、 15l、 10l， 可发现在进 样 10l 核糖核酸酶 A 的峰高与基线噪音的比例约为 4 1， 即得最低检出限为 0.07g。 0009 上述步骤中高效液相色谱的条件为 ： 色谱柱为凝胶色谱柱 TSK G2000 SWxl 柱 ； 流 动相为乙腈-0.83三氟乙酸溶液(4060) ； 检测波长为214土lnm ； 流速0.700.85ml/ min。

9、0010 所述供试品溶液色谱图中， 各个峰的保留时间均大于对照溶液主峰的保留时间。 0011 本发明的优点在于 ： 本发明简便易行、 耗费少、 时间短、 准确性和重现性都很好， 可 以确保临床用药的安全有效， 对中药注射液产品中高分子量物质的含量进行检测， 对可能 带入的高分子量物质进行有效地监控， 从源头上控制临床过敏反应的发生， 既可以节约宝 说 明 书 CN 102411033 A CN 102411041 A2/2 页 4 贵的临床急救时间， 同时也增加了临床医护人员与患者的便利性， 减轻了患者的用药痛苦， 具有非常重要的意义。本发明采用 TSK G2000 SWxl 型凝胶柱对中药注

10、射液中的高分子物 质进行检测， 结果在进样体积 20l， 检出限为 0.08g 下未能检出大分子物质， 说明本发 明建立了一套完整的高分子物质检测方法。 具体实施方式 0012 下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。 0013 实施例 1 ： 一种检测中药注射液中高分子量物质的方法， 该方法包括下列步骤 ： a、 对照溶液的制备 ： 取核糖核酸酶A、 人胰岛素、 胸腺素、 人生长激素释放抑制因子4种溶液 各1ml， 置于25ml容量瓶中， 加水稀释并定容至刻度 ； 再取上述各容量瓶中溶液2.5ml， 分别 用量瓶定容至 25ml， 即得对照溶液 ； b、 供试品溶液的制备 ： 取供试品中药注

11、射液 20ml 加入 超滤离心管中， 在 6000r/min 下离心 10min， 取残留物定容至 1ml 即得供试品溶液 ； c、 检测 ： 分别精密吸取供试品溶液和对照溶液注入高效液相色谱仪， 按照高效液相色谱法测定各溶 液的色谱， 记录供试品溶液色谱图和对照溶液色谱图， 测定供试品溶液中分子量大于对照 溶液中高分子量物质的物质的含量作为供试品溶液中高分子量物质的含量 ； d、 测量最低检 出限 ： 取对照溶液分别依次进样 25l、 20l、 15l、 10l、 5l， 可发现在进样 10l 核 糖核酸酶 A 的峰高与基线噪音的比例约为 3 1， 即得最低检出限为 0.04g。上述步骤中

12、高效液相色谱的条件为 ： 色谱柱为凝胶色谱柱TSK G2000SWxl柱 ； 流动相为乙腈-0.83三 氟乙酸溶液 (40 60) ； 检测波长为 214 土 lnm ； 流速 0.70 0.75ml/min ； 所述供试品溶液 色谱图中， 各个峰的保留时间均大于对照溶液主峰的保留时间。 0014 表 1 为最低检出限中的各对照出峰时间及其分子量 ： 0015 表 1 各对照品分子量及出峰时间 0016 0017 综上所述本实施例不过是本发明的优选实施方案， 不可理解为对本发明保护范围 的限定， 对于该领域的技术工作人员根据本发明本实施例所做的不超出本发明技术方案的 调整和改动， 应该认为落在本发明的保护范围内。 说 明 书 CN 102411033 A