1、(10)申请公布号 CN 104215774 A (43)申请公布日 2014.12.17 CN 104215774 A (21)申请号 201410418651.2 (22)申请日 2014.08.22 G01N 33/68(2006.01) (71)申请人 黑龙江八一农垦大学 地址 163000 黑龙江省大庆市开发区黑龙江 八一农垦大学农学院 (72)发明人 徐闯 陈媛媛 夏成 张洪友 许秋实 杨威 (74)专利代理机构 哈尔滨市文洋专利代理事务 所 ( 普通合伙 ) 23210 代理人 孙淑荣 (54) 发明名称 一种利用 FGF21 因子诊断奶牛隐性酮病的方 法 (57) 摘要 一种利
2、用 FGF21 因子诊断奶牛隐性酮病的 方法。FGF21 因子与奶牛隐性酮病呈正相关， 应用 ELISA 试剂盒和生化分析仪测定牛血清 中 FGF21 因子浓度以及酮病、 隐性酮病时奶牛 血清指标 , 通过统计学分析 FGF21 与隐性酮病 呈明显相关 , 与临床酮病无相关性 ； 当 335ng/ ml1.2mmol/L 作为诊断奶牛酮病标准 , 如果奶 牛血清中 BHBA1.6mmol/L， 且表现明显临床症状， 被诊断为临床酮病组 ； 如果 1.2mmol/ LBHBA1.6mmol/L， 且没有明显临床症状， 被诊断为隐性酮病组 ； BHBA1.2mmol/L 且没有 任何临床症状表现，
3、 作为健康组。其中健康 30 头 , 隐性 30 头 , 临床 30 头。此外， 其中患 有乳腺炎， 子宫炎， 流产， 由于药物导致的肝病， 发热等疾病的奶牛被排除本试验。 0011 样品采集和处理 0012 所有奶牛均于早晨空腹抽取尾静脉血， 不加抗凝剂， 将采样试管置于冰盒之中， 1h 之内被带回实验室， 3000g 离心 15min， 分离血清 -20下保存备用。 0013 指标测定方法 ： FGF21 使用 RD 牛成纤维细胞因子 ELISA 试剂盒， 其余代谢指标分 别在自动生化分析仪上进行测定。 0014 数据分析 ： 所有数据应用IBMSPSS19.0软件进行分析， 计量资料用均
4、数以表 示 , 组间均值差异显著性采用单因素方差统计分析， 相关性分析采用 Pearson 直线相关性 分析。p0.05 为显著相关。 0015 实验结果 ： 0016 单因素方差分析 90 例奶牛的 FGF21, 血糖 ,BHBA,NEFA 检测结果见表 1。 0017 表 1 奶牛血清主要检测指标情况 0018 0019 Person 相关性分析 FGF21 代谢指标与酮病的相关性分析见表 2。血清 FGF21 与 NEFA 呈正相关， 与 BHBA 呈正相关。 0020 表 2 奶牛 FGF21 与血清主要指标相关性分析 0021 0022 单因素方差分析不同类型酮病 FGF21 与酮病
5、代谢指标的关系， 90 例奶牛中分别为 临床酮病30例， 隐性酮病30例， 健康牛30例。 3组牛群胎次、 年龄相近， 血清FGF21代谢指标 与奶牛酮病主要检测结果见表 3。临床酮病组 , 隐性酮病组和健康组血清 FGF21(P0.05), 说 明 书 CN 104215774 A 4 3/3 页 5 具有统计学意义 ； 健康组、 隐性酮病组、 临床组血清 NEFA 与 BHBA 差异比较 (P0.05), 具有 统计学意义。 0023 表 33 组奶牛群 FGF21 及血清主要检测指标的比较 0024 0025 Person直线相关性分析3组牛群的血清FGF21代谢指标与酮病指标的相关性分析 见表 4。隐性酮病组血清 FGF21 与 BHBA 呈正相关 ； 临床酮病组血清 FGF21 与 BHBA 无相关 性。 0026 表 4 不同组群 FGF21 代谢指标与酮病指标的相关性分析 0027 0028 FGF21 与隐性奶牛酮病重要检测指标 BHBA 呈正相关， FGF21 可以用来替代 BHBA 作 为诊断奶牛隐性酮病新因子， 当 335ng/mlFGF21443ng/ml 时可以诊断为奶牛隐性酮病。 说 明 书 CN 104215774 A 5