一种从山小桔中提取5羟基去甲山柚柑碱的方法.pdf

1、10申请公布号CN104086556A43申请公布日20141008CN104086556A21申请号201410266224722申请日20140616C07D491/05220060171申请人南京泽朗医药科技有限公司地址210046江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边108号05幢6楼72发明人刘东锋杨成东54发明名称一种从山小桔中提取5羟基去甲山柚柑碱的方法57摘要本发明公开了一种从山小桔中提取5羟基去甲山柚柑碱的方法。方法如下1）取山小桔根粉碎，加510倍量5盐酸水溶液浸泡提取23次，提取液加入超滤膜超滤，透过液再用纳滤膜浓缩，浓缩液加入阳离子大孔树脂吸附，氨水溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，

2、浓缩液加入氯仿萃取，回收氯仿，得粗提物；2）上述粗提取物用75甲醇溶液溶解，加入氯仿溶液充分混合，收集氯仿层浓缩，浓缩液放置结晶，结晶物再用丙酮溶液重结晶，干燥即得。采用本方法生产5羟基去甲山柚柑碱，工艺操作简单，污染小，能耗低，易于工业化生产。51INTCL权利要求书1页说明书2页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书2页10申请公布号CN104086556ACN104086556A1/1页21一种从山小桔中提取5羟基去甲山柚柑碱的方法，其特征在于包括以下步骤1）取山小桔根粉碎，加510倍量5盐酸水溶液浸泡提取23次，提取液加入超滤膜超滤，透过液再用纳滤膜浓缩，

3、浓缩液加入阳离子大孔树脂吸附，氨水溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，浓缩液加入氯仿萃取，回收氯仿，得粗提物；2）上述粗提取物用75甲醇溶液溶解，加入氯仿溶液充分混合，收集氯仿层浓缩，浓缩液加入适量石油醚结晶，结晶物再用丙酮溶液重结晶，干燥即得。2根据权利要求1所述的从山小桔中提取5羟基去甲山柚柑碱的方法，其特征在于所述步骤1）超滤膜为截留分子量300010000的中空纤维素膜，纳滤膜为截留分子量200300的中纤维素纳滤膜。3根据权利要求1所述的从山小桔中提取5羟基去甲山柚柑碱的方法，其特征在于所述步骤1）中的氨水溶液洗脱为610倍柱体积510的氨水溶液洗脱。权利要求书CN104086556A1/2页

4、3一种从山小桔中提取5羟基去甲山柚柑碱的方法技术领域0001本发明属于生物技术领域，具体涉及一种从山小桔中提取5羟基去甲山柚柑碱的方法。背景技术00025羟基去甲山柚柑碱为吖啶生物碱，CAS登录号27067705，分子式C19H17NO4，分子量为32335。5羟基去甲山柚柑碱具有抗癌活性，抑制肿瘤细胞生长；抑制病毒作用，对EPSTEINBARS病毒在1000MRATIO/TPA浓度时有100的抑制活性，用于抗肿瘤促进剂；抗疟活性。体外10G/ML浓度时，对约尔疟原虫PLASMODIUMYUELII抑制率为88。0003山小桔为芸香科植物，味微辛、苦，性平。有行气祛痰、散瘀消肿、消积的功效。治

5、感冒咳嗽、食积腹痛、跌打肿痛、小肠疝气痛。0004通过文献检索，国内未见5羟基去甲山柚柑碱的提纯制备方法。目前，生物碱多采用有机试剂提取和硅胶柱分离。此类方法操作繁琐，制备量小，很难实现工业化生产。发明内容0005本发明要解决的技术问题是提供一种操作简单的从山小桔中提取5羟基去甲山柚柑碱的方法。0006本发明是通过以下技术方案实现的一种从山小桔中提取5羟基去甲山柚柑碱的方法，其特征在于包括以下步骤1）取山小桔根粉碎，加510倍量5盐酸水溶液浸泡提取23次，提取液加入超滤膜超滤，透过液再用纳滤膜浓缩，浓缩液加入阳离子大孔树脂吸附，氨水溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，浓缩液加入氯仿萃取，回收氯仿，得粗提

6、物；2）上述粗提取物用75甲醇溶液溶解，加入氯仿溶液充分混合，收集氯仿层浓缩，浓缩液加入适量石油醚结晶，结晶物再用丙酮溶液重结晶，干燥即得。0007所述步骤1）超滤膜为截留分子量300010000的中空纤维素膜，纳滤膜为截留分子量200300的中纤维素纳滤膜。0008所述步骤1）中的氨水溶液洗脱为610倍柱体积510的氨水溶液洗脱。0009采用上述技术方案生产5羟基去甲山柚柑碱，方法操作简单，所得产品纯度高，生产过长的酸水，可以循环利用，减少了污染，而且易于实现工业化。具体实施方式0010下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。0011实施例1取干燥的山小桔根10KG，粉碎，加5倍量5盐酸水溶

7、液浸泡提取3次，提取液加入截留分子量3000的中空纤维素膜超滤，透过液再用截留分子量200的中纤维素纳滤膜浓缩，浓缩液加入732阳离子大孔树脂吸附，水洗中性，用10倍柱体积10的氨水溶液洗脱，洗脱说明书CN104086556A2/2页4液减压浓缩至密度105，浓缩液加入氯仿萃取3次，回收氯仿，所得粗提物用75甲醇溶液回流溶解，加1/2体积的氯仿溶液充分混合，收集氯仿层浓缩，浓缩液至1/5体积放置结晶，结晶物滤出，用10倍量90丙酮溶液重结晶，干燥得5羟基去甲山柚柑碱13G，经HPLC检测，含量982。0012实施例2取干燥的山小桔根10KG，粉碎，加5倍量5盐酸水溶液浸泡提取3次，提取液加入截

8、留分子量6000的中空纤维素膜超滤，透过液再用截留分子量300的中纤维素纳滤膜浓缩，浓缩液加入732阳离子大孔树脂吸附，水洗中性，用6倍柱体积8的氨水溶液洗脱，洗脱液减压浓缩至密度102，浓缩液加入氯仿萃取2次，回收氯仿，所得粗提物用75甲醇溶液回流溶解，加入1/3氯仿溶液充分混合，收集氯仿层浓缩，浓缩液至1/6体积放置结晶，结晶物滤出，用8倍量80丙酮溶液重结晶，干燥得5羟基去甲山柚柑碱11G，经HPLC检测，含量973。0013实施例3取干燥的山小桔根10KG，粉碎，加5倍量5盐酸水溶液浸泡提取3次，提取液加入截留分子量3000的中空纤维素膜超滤，透过液再用截留分子量200的中纤维素纳滤膜浓缩，浓缩液加入732阳离子大孔树脂吸附，水洗中性，用7倍柱体积5的氨水溶液洗脱，洗脱液减压浓缩至密度103，浓缩液加入氯仿萃取3次，回收氯仿，所得粗提物用75甲醇溶液回流溶解，加入1/2氯仿溶液充分混合，收集氯仿层浓缩，浓缩液至1/8体积放置结晶，结晶物滤出，用8倍量90丙酮溶液重结晶，干燥得5羟基去甲山柚柑碱132G，经HPLC检测，含量971。说明书CN104086556A