一种蛇龙珠葡萄品种葡萄病毒病的脱除与苗木快繁方法.pdf

1、(10)申请公布号 CN 102835316 A (43)申请公布日 2012.12.26 C N 1 0 2 8 3 5 3 1 6 A *CN102835316A* (21)申请号 201210364068.9 (22)申请日 2012.09.26 A01H 4/00(2006.01) A01G 17/02(2006.01) (71)申请人中法合营王朝葡萄酿酒有限公司 地址 300402 天津市北辰区津围公路29号 (72)发明人尹吉泰 张福庆 张军 (74)专利代理机构天津滨海科纬知识产权代理 有限公司 12211 代理人孙春玲 (54) 发明名称 一种蛇龙珠葡萄品种葡萄病毒病的脱除与苗

2、 木快繁方法 (57) 摘要 本发明提供了一种蛇龙珠葡萄品种葡萄病毒 病的脱除与苗木快繁方法，包括营养系初选、试管 苗茎尖培养、热处理脱毒、试管苗移栽驯化、病毒 检测、无病毒苗木快繁步骤；其有益效果为：经过 使用本发明方法蛇龙珠葡萄品种的脱毒效果可达 90%以上，能够突出生产目的性，使脱毒工作更加 简捷、有效，节省了人力、物力和财力，有效提高了 该葡萄品种的成活率。 (51)Int.Cl. 权利要求书1页 说明书4页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 4 页 1/1页 2 1.一种蛇龙珠葡萄品种葡萄病毒病的脱除与苗木快繁方法，其特征在于包括

3、营养系 初选、试管苗茎尖培养、热处理脱毒、试管苗移栽驯化、病毒检测、无病毒苗木快繁步骤，其 中： 1）营养系初选步骤： 春季在蛇龙珠酿酒葡萄品种园选择无明显扇叶病毒症状的植株，作好标记，在此基础 上于当年秋季选择结果性状良好、无明显或无卷叶病毒症状的植株，并作好标记； 2）试管苗茎尖培养步骤： 先于转年春季五月份，在葡萄品种园中剪取做好标记的各植株健康嫩梢上部，去掉叶 片，剪成单芽茎段，用自来水冲洗23小时，备用； 在超净工作台上，将上述备用单芽茎段用70的酒精浸洗振荡10秒钟后，用0.1%升汞 加一滴吐温，摇动510分钟后，用无菌水冲洗4-5次，剪除两端接触药液部分，剪成1 2厘米单芽芽段，

4、插于培养基上，进行培养，得到试管组培苗； 3）热处理脱毒步骤： 在超净工作台无菌条件下，将上述试管组培苗茎尖剪下0.1-0.5cm，接种到培养基上， 进行培养，成苗后继代培养，扩大繁殖待其生根；生根后，将其直接置于培养箱中，温度最初 为25，以后用一个星期时间逐渐升温至371，并在该条件下培养1个月； 4）试管苗移栽驯化步骤： 取上述热处理后的试管苗的茎尖，0.3-0.5cm左右，进行组织培养，培养温度为 252，待培养瓶中的试管苗长至67cm时，在培养室或温室中将瓶口打开，敞口锻炼 2-3天后，去掉培养基，用2025的水冲洗掉琼脂，栽入盛有蛭石的周转箱中，并用玻璃 板或塑料薄膜盖好，保持其内

5、小气候，湿度100，温度25，每天喷水一次，并通风1.5-2 小时，3天后可开一小缝隙放风，以后逐渐将缝隙加大，直至全部揭开，每周喷一次营养液， 驯化10天后，将其移入培养钵中培养成苗； 5）病毒检测 将营养钵中生长的葡萄苗的叶子取下，进行病毒检测，检测苗木是否带有葡萄病毒 病； 6）无病毒苗木快繁 将上述检测无病毒的葡萄苗采用培养基进行上述步骤中组培、扩大繁殖及移载驯化， 形成无病毒苗木的快速繁殖。 2.根据权利要求1所述方法，其特征在于上述步骤中所使用的培养基为： B 5 +0.2ppmIAA+0.01ppm 6-BA培养基，培养基的厚度为2.3-2.5cm。 3.根据权利要求2所述培养基

6、，其特征在于其制备方法为：将B 5 +0.2ppmIAA+0.01ppm 6-BA，附加蔗糖浓度2，琼脂浓度0.4-0.6%，将PH值调至为5.8，在1.2-1.3KG/CM 2 的高 压锅压力下，灭菌时间1520分钟制得。 4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述试管苗茎尖培养步骤中单芽芽 段在培养基上的培养条件为：培养室温度252，光照时间每天12小时，照度为双管40W 日光灯。 权 利 要 求 书CN 102835316 A 1/4页 3 一种蛇龙珠葡萄品种葡萄病毒病的脱除与苗木快繁方法 技术领域 0001 本发明属于葡萄种植领域，尤其是涉及一种蛇龙珠葡萄品种的病毒脱除种植方

7、法。 背景技术 0002 蛇龙珠是我国酿造红葡萄酒的优良品种之一，与赤霞珠、品丽珠并称为“三珠”，在 我国主要分布在胶东半岛沙（砂）地葡萄园和宁夏产区。以其原料酿造的单品种酒酒质好， 呈宝石红色、果香浓，酒体丰满圆润，典型性强，无论是山东胶东半岛还是西北的宁夏贺兰 山东麓地区，以蛇龙珠为原料酿制的单品种酒均表现出独特优良品质，是我国最具发展潜 力的酿酒葡萄品种之一。张裕公司和宁夏西夏王葡萄酒业有限公司生产的蛇龙珠干红葡萄 酒曾获得国际大奖，得到了消费者认可，也取得了较好的口碑和经济效益，一些国际同行对 中国西部生产的蛇龙珠葡萄酒也给予了一定的赞誉。 0003 蛇龙珠葡萄品种具有较强的抗旱性、抗

8、瘠薄性，其根系较发达，生长力旺盛，种植 在较瘠薄的土壤上产量高、质量好，而种植在肥沃的土壤上，常表现为旺长结果量少，同时 该品种进入结果期晚、产量低、树势难控制。蛇龙珠品对病毒病抵抗力低，尤其是扇叶病毒、 卷叶病毒和蕃茄环斑病毒，蛇龙珠葡萄品种感染此几类病毒非常广泛严重，20世纪80年代 中期，王朝公司自山东引种蛇龙珠在蓟县建立基地，并作为酿造干红葡萄酒的主要原料，但 是由于病毒病严重，至90年代初，基地大部分蛇龙珠葡萄植株由于感染卷叶病毒，树势衰 弱，并逐渐死亡。1996年，宁夏银广夏葡萄酿酒公司自山东引种的上千亩蛇龙珠也因卷叶病 毒病而遭受损失；因此病毒病是限制该品种发展的一大障碍。因此在

9、天津等华北地区引入 蛇龙珠葡萄品种的种植需要建立严格科学的管理种植方法，尤其是需要找出针对性的病毒 脱除解决方法，才能获得较高的产量和质量。 发明内容 0004 针对上述的不足，经过多年实践调查和研究、生产中初步应用，本发明人发明了一 种病毒脱除方法，这种方法是解决蛇龙珠品种栽培技术上存在问题的根本措施，能有效快 速脱除病毒，提高蛇龙珠葡萄品种的成活率。 0005 一种蛇龙珠葡萄品种葡萄病毒病的脱除与苗木快繁方法，包括营养系初选、试管 苗茎尖培养、热处理脱毒、试管苗移栽驯化、病毒检测、无病毒苗木快繁步骤，其中： 0006 1）营养系初选步骤： 0007 春季在蛇龙珠酿酒葡萄品种园选择无明显扇叶

10、病毒症状的植株，作好标记，在此 基础上于当年秋季选择结果性状良好、无明显或无卷叶病毒症状的植株，并作好标记； 0008 2）试管苗茎尖培养步骤： 0009 先于转年春季五月份，在葡萄品种园中剪取做好标记的各植株健康嫩梢上部，去 掉叶片，剪成单芽茎段，用自来水冲洗23小时，备用； 0010 在超净工作台上，将上述备用单芽茎段用70的酒精浸洗振荡10秒钟后，用0.1% 说 明 书CN 102835316 A 2/4页 4 升汞加一滴吐温，摇动510分钟后，用无菌水冲洗4-5次，剪除两端接触药液部分，剪成 12厘米单芽芽段，插于培养基上，进行培养，得到试管组培苗； 0011 3）热处理脱毒步骤： 0

11、012 在超净工作台无菌条件下，将上述试管组培苗茎尖剪下0.1-0.5cm，接种到培养 基上，进行培养，成苗后继代培养，扩大繁殖待其生根；生根后，将其直接置于培养箱中，温 度最初为25，以后用一个星期时间逐渐升温至371，并在该条件下培养1个月； 0013 4）试管苗移栽驯化步骤： 0014 取上述热处理后的试管苗的茎尖，0.3-0.5cm左右，进行组织培养，培养温度为 252，待培养瓶中的试管苗长至67cm时，在培养室或温室中将瓶口打开，敞口锻炼 2-3天后，去掉培养基，用2025的水冲洗掉琼脂，栽入盛有蛭石的周转箱中，并用玻璃 板或塑料薄膜盖好，保持其内小气候，湿度100，温度25，每天喷

12、水一次，并通风1.5-2 小时，3天后可开一小缝隙放风，以后逐渐将缝隙加大，直至全部揭开，每周喷一次营养液， 驯化10天后，将其移入培养钵中培养成苗； 0015 5）病毒检测 0016 将营养钵中生长的葡萄苗的叶子取下，进行病毒检测，检测苗木是否带有葡萄病 毒病；其中主要检测检测苗木是否带有葡萄扇叶病毒、卷叶病毒和蕃茄环斑病毒。 0017 6）无病毒苗木快繁 0018 将上述检测无病毒的葡萄苗采用培养基进行上述步骤中组培、扩大繁殖及移载驯 化，形成无病毒苗木的快速繁殖。 0019 其中上述步骤中所使用的培养基为：B 5 +0.2ppmIAA+0.01ppm 6-BA培养基，培养基 的厚度为2.

13、3-2.5cm。 0020 上述培养基的制备方法为：将B 5 +0.2ppmIAA+0.01ppm 6-BA，附加蔗糖浓度2，琼 脂浓度0.4-0.6%，将PH值调至为5.8，在1.2-1.3KG/CM 2 的高压锅压力下，灭菌时间15 20分钟制得。 0021 其中所述试管苗茎尖培养步骤中单芽芽段在培养基上的培养条件为：培养室温度 252，光照时间每天12小时，照度为双管40W日光灯。 0022 葡萄扇叶病毒和卷叶病毒主要症状表现季节分别是春季和秋季，所以在进行营养 系初选时应根据生产需要，兼顾产量、质量、病毒、生长势等几方面因素进行筛选；在培养基 的筛选制备过程中，选用了B 5 培养基加不

14、同浓度、不同类激素进行最适培养基的筛选，通过 对不同培养基上成活的茎段进行培养观察，发现以B 5 +0.2ppmIAA+0.01ppm6-BA培养基上的 茎段生根速度快，数量适中，根和茎比例协调，且萌芽后生长良好，植株粗壮，在继代培养基 中，该培养基仍适用。 0023 本发明的有益效果为：经过使用本发明方法蛇龙珠葡萄品种的脱毒效果可达90% 以上，能够突出生产目的性，使脱毒工作更加简捷、有效，节省了人力、物力和财力，有效提 高了该葡萄品种的成活率。 具体实施方式 0024 下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但不限定本发明的保护范围。 0025 一种蛇龙珠葡萄品种葡萄病毒病的脱除与苗木快繁

15、方法，采取如下步骤进行： 说 明 书CN 102835316 A 3/4页 5 0026 (1)营养系初选：葡萄扇叶病毒和卷叶病毒主要症状表现季节分别是春季和秋 季。根据生产需要，春季，在蛇龙珠酿酒葡萄品种园选择无明显扇叶病毒症状的植株，作好 标记，在此基础上于当年秋季选择结果性状良好、无明显或无卷叶病毒症状的植株，并作好 标记。优系筛选应结合生产实际进行。 0027 （2）试管苗茎尖培养：于转年春季五月份，在葡萄品种园中剪取做好标记的各品 种植株健康嫩梢上部，带回实验室，去掉叶片，剪成单芽茎段，用自来水冲洗23小时，备 用； 0028 在超净工作台上，将单芽段用70的酒精浸洗振荡10秒钟后，

16、用0.1%升汞加一滴 吐温，摇动510分钟，用无菌水冲洗4-5次，剪除两端接触药液部分，剪成12厘米单 芽芽段，插于培养基上，进行培养得到试管组培苗；培养条件为培养室温度252，光照 时间每天12小时，照度为双管40W日光灯。 0029 （3）热处理脱毒：在进行营养系初选的基础上，用茎尖培养和热处理相结合的方 法，对蛇龙珠葡萄品种主要病毒（扇叶病毒、卷叶病毒和蕃茄环斑病毒）进行脱除，具体步骤 为：在葡萄试管组培苗继代培养的过程中，对每次取茎尖的组培苗作上标记，留待作为组培 苗的脱毒材料； 0030 在超净工作台无菌条件下，将试管组培苗茎尖剪下0.1-0.5cm，接种到其最适培 养基上，进行培养

17、，成苗后继代培养，扩繁成40-50瓶试管苗。其中培养基的厚度较常规培 养的厚，大约2.3-2.5cm，以防热处理过程中培养基干枯。 0031 待上述茎尖培养的40-50瓶试管苗生根后，将其直接置于培养箱中，温度最初为 25，以后大约用一个星期时间逐渐升温至371，并在该条件下培养近1个月，然后取 热处理后的试管苗的茎尖(0.3-0.5cm左右)，进行组织培养，培养温度为252。 0032 （4）试管苗移栽驯化 0033 待培养瓶中的试管苗长至67厘米时，在培养室或温室中将瓶口打开，敞口锻 炼2-3天后，去掉培养基，用2025的水冲洗掉琼脂，栽入盛有蛭石的周转箱中，并用玻 璃板或塑料薄膜盖好，保

18、持其内小气候，湿度100，温度25左右，每天喷水一次，并通风 1.52小时，3天后可开一小缝隙放风，以后逐渐将缝隙加大，直至全部揭开，每周喷一次 营养液，驯化10天后，将其移入培养钵中培养成苗。 0034 （5）病毒检测 0035 将营养钵中生长的葡萄苗的叶子取下，送往中国农业部动植物检疫实验所或有资 质的植物病毒检测单位，检测苗木是否带有葡萄扇叶病毒、卷叶病毒和蕃茄环斑病毒。 0036 （6）无病毒苗木快繁 0037 将检测无病毒的蛇龙珠葡萄苗采用其相应的最适培养基进行组培快繁。培养基配 方、快繁条件和方式、试管苗移栽驯化等，如前所述。 0038 上述所使用的培养基为：B 5 +0.2ppmIAA+0.01ppm 6-BA。 0039 本发明的有益效果为：经过使用本发明方法蛇龙珠葡萄品种的脱毒效果可达90% 以上，能够突出生产目的性，使脱毒工作更加简捷、有效，节省了人力、物力和财力，有效提 高了该葡萄品种的成活率。 0040 以上对本发明的较佳实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施 例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进 说 明 书CN 102835316 A 4/4页 6 等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。 说 明 书CN 102835316 A