一种三倍体单体牡蛎培育方法.pdf

1、10申请公布号CN102100197A43申请公布日20110622CN102100197ACN102100197A21申请号201010595675722申请日20101220A01K61/0020060171申请人山东海益宝水产股份有限公司地址265122山东省烟台市海阳市大闫家镇新生村72发明人张剑张玮于瑞涛高翔风54发明名称一种三倍体单体牡蛎培育方法57摘要本发明涉及一种三倍体单体牡蛎培育方法，包括亲贝获取精卵、三倍体牡蛎的生产、幼虫培育、采苗、单体牡蛎生产、倍性检测等步骤，将三倍体技术与单体牡蛎苗种培育技术相结合培育牡蛎新品种，同时可以规模化生产，使用该方法培育的单体牡蛎较现有牡蛎壳

2、形规则、美观、壳深肉肥等明显的优点。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书2页说明书4页CN102100200A1/2页21一种三倍体单体牡蛎培育方法，其步骤为一亲贝准备平均壳高为131CM的二倍体牡蛎系种贝300个和平均壳高为46CM的四倍体牡蛎30个，在室内经升温促熟培养；在牡蛎繁殖季节之前，使亲贝在室内进行升温促熟培养，经过一段时间的培育，亲贝性腺发育成熟，通过镜检卵子和精子发育情况决定是否解剖取卵，进行三倍体处理，加大投饵量，混合投喂新鲜的多品种饵料，满足亲贝性腺发育对营养物质的需要，为三倍体育苗提供成熟好的种贝，接着对卵子进行同步性发育处理，采用洁净

3、的过滤海水浸泡的方法，通过2040分钟的浸泡培养，促进卵子生发泡的破裂，促进卵子的成熟；二获取精卵通过解剖法获取精卵，将成熟的二倍体牡蛎系亲贝洗刷干净后，然后用高猛酸钾消毒1015分钟后，剖去右壳，露出软体部，在显微镜下鉴别雌雄，并检查精卵的成熟状况，挑出发育好的个体备用，雌雄严格分开放置，避免精子污染，将成熟的卵巢逐个剥离并破碎，分别用80目、250目的筛绢进行过滤，去除大的组织碎片，再用500目筛绢滤洗，去除组织液后在清洗干净的卵子中加入过滤海水，在23下备用，四倍体雄贝精子剥离后用300目筛绢过滤后，制成精液备用；三三倍体牡蛎的生产利用成熟的二倍体卵子与四倍体精子受精后注入新鲜海水中孵化

4、、培育，控制受精卵密度在30005000万个/L；四幼虫培育受精卵在23下，经22个小时发育至D型幼虫，进入幼虫培育期后，将幼虫培育密度控制在为610个/ML，幼虫培育水温控制在2527之间，PH82左右，培育海水用浓度为5MOL/L的EDTA二钠螯合重金属离子，用0510MOL/L浓度的氯霉素预防病害，附苗时黑布遮光，将幼虫培养密度控制在前期壳长200M以内1015个/ML，中期壳长200280M810个/ML，后期壳长280M以上46个/ML，24小时连续充气，D形幼虫入池12天内采用逐日加水，第3天用300目筛绢网箱换水，幼虫前期用微绿球藻和金藻投喂，后期增加扁藻和角毛藻，投饵量根据水中

5、幼虫密度、幼虫胃饱满度和水中剩饵多少灵活掌握，以少量多次为好，每天一般23次；五采苗及单体牡蛎生产当幼虫壳长范围达到260340M时，眼点出现，群体出现眼点时的壳长为280320M，当眼点幼虫达到30左右时，应及时投放附苗器，附着基为牡蛎壳串，每串100片，用6080丝聚乙烯绳将贝壳串在一起，经曝晒、浸泡、体积分数为20106的漂白粉消毒，清洗后使用，将贝壳串均匀地预先吊挂在培育池内，用80目筛绢网筛取网上眼点幼虫移入贝壳池中附苗，培育池上方用黑布遮盖，以保证贝壳正反面都能均匀地附上贝苗，当贝壳附苗量达到20个/片以上时，即可将幼虫浓集到另一附苗池继续附苗，稚贝附着后要加大换水量和投饵量，当稚

6、贝长至0810MM左右时，即可出库下海暂养；六倍性检测用压片法，将胚胎放入001秋水仙素中处理1小时，处理时气温为1822，然后放入0075MOL/L的卡诺氏固定液中低渗30分钟，更换1次固定液，然后放入体积分数为50权利要求书CN102100197ACN102100200A2/2页3冰醋酸中保存，4050玻片上滴片、风干，体积分数为4的GIMSA染液染色10分钟，冲洗、凉干镜检。权利要求书CN102100197ACN102100200A1/4页4一种三倍体单体牡蛎培育方法技术领域0001本发明涉及一种三倍体牡蛎的培育方法，具体地说是一种三倍体单体牡蛎培育和规模化生产方法。背景技术0002现有

7、牡蛎一般以野生二倍体牡蛎为主，以近年来养殖量较大的牡蛎为例，牡蛎正常的养殖周期一般为二年，即在采苗后的第二年秋冬收获，但在第二年的春夏就己达到性成熟，在海区排放精卵，使牡蛎软体部消瘦成“水蛎子，糖元含量降低，质量下降，影响了产品的市场销售。同时由于繁殖后体质衰弱及环境恶化，常诱发大规模的死亡和病害流行，严重影响牡蛎养殖的经济效益和产业的可持续发展。三倍体技术是国际上一项先进的生物技术。通过技术手段，使正常的二倍体生物的染色体加倍，以达到倍化效果。经过倍化处理得到的三倍体品种具有不育性及许多优良性状，因其性腺不发育或发育得很小，获得的能量和物质大多被用于个体生长，所以其生长速度快、抗逆性强，可食

8、用部分饱满美观，尤其重要的是没有性成熟后的精卵排放，品质稳定，可常年收获。0003单体牡蛎即游离的无附着基的牡蛎。牡蛎具有群聚的生活习性，经常多个牡蛎附着在一起，由于生长空间的限制，壳形极不规则，大大地影响了美观。群聚还造成牡蛎摄食竞争，影响其生长速度。传统的养殖方法多采用笨重的附着基，让稚贝附着其上生长。附着基的搬运需耗费大量的劳动力，且由于牡蛎在附着基上附着得很牢固，给牡蛎的收获增加了很大的困难。单体牡蛎一般采取筏式养殖方式，由于其游离性而不受生长空间的限制，因而壳形规则美观，大小均匀，易于放养和收获。在日本、韩国、欧洲、北美，单体牡蛎市场需求量巨大，因此，国际上单体牡蛎养殖量较大。发明内

9、容0004本发明的日的在于提供一种品质稳定、壳形规则美观、大小均匀、易于放养和收获的三倍体单体牡蛎规模化培育方法。0005为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为0006一亲贝0007准备平均壳高为131CM的二倍体牡蛎系种贝300个和平均壳高为46CM的四倍体牡蛎30个，在室内经升温促熟培养；在牡蛎繁殖季节之前，使亲贝在室内进行升温促熟培养，经过一段时间的培育，亲贝性腺发育成熟，通过镜检卵子和精子发育情况决定是否解剖取卵，进行三倍体处理，加大投饵量，混合投喂新鲜的多品种饵料，满足亲贝性腺发育对营养物质的需要，为三倍体育苗提供成熟好的种贝，接着对卵子进行同步性发育处理，采用洁净的过滤海水浸泡的

10、方法，通过2040分钟的浸泡培养，促进卵子生发泡的破裂，促进卵子的成熟；0008二获取精卵0009通过解剖法获取精卵，将成熟的二倍体牡蛎系亲贝洗刷干净后，然后用高猛酸钾说明书CN102100197ACN102100200A2/4页5消毒1015分钟后，剖去右壳，露出软体部，在显微镜下鉴别雌雄，并检查精卵的成熟状况，挑出发育好的个体备用，雌雄严格分开放置，避免精子污染，将成熟的卵巢逐个剥离并破碎，分别用80目、250目的筛绢进行过滤，去除大的组织碎片，再用500目筛绢滤洗，去除组织液后在清洗干净的卵子中加入过滤海水，在23下备用，四倍体雄贝精子剥离后用300目筛绢过滤后，制成精液备用；0010三

11、三倍体牡蛎的生产0011利用成熟的二倍体卵子与四倍体精子受精后注入新鲜海水中孵化、培育，控制受精卵密度在30005000万个/L；0012四幼虫培育0013受精卵在23下，经22个小时发育至D型幼虫，进入幼虫培育期后，将幼虫培育密度控制在为610个/ML，幼虫培育水温控制在2527之间，PH82左右，培育海水用浓度为5MOL/L的EDTA二钠螯合重金属离子，用0510MOL/L浓度的氯霉素预防病害，附苗时黑布遮光，将幼虫培养密度控制在前期壳长200M以内1015个/ML，中期壳长200280M810个/ML，后期壳长280M以上46个/ML，24小时连续充气，D形幼虫入池12天内采用逐日加水，

12、第3天用300目筛绢网箱换水，幼虫前期用微绿球藻和金藻投喂，后期增加扁藻和角毛藻，投饵量根据水中幼虫密度、幼虫胃饱满度和水中剩饵多少灵活掌握，以少量多次为好，每天一般23次；0014五采苗及单体牡蛎生产0015当幼虫壳长范围达到260340M时，眼点出现，群体出现眼点时的壳长为280320M，当眼点幼虫达到30左右时，应及时投放附苗器，附着基为牡蛎壳串，每串100片，用6080丝聚乙烯绳将贝壳串在一起，经曝晒、浸泡、体积分数为20106的漂白粉消毒，清洗后使用，将贝壳串均匀地预先吊挂在培育池内，用80目筛绢网筛取网上眼点幼虫移入贝壳池中附苗，培育池上方用黑布遮盖，以保证贝壳正反面都能均匀地附上

13、贝苗，当贝壳附苗量达到20个/片以上时，即可将幼虫浓集到另一附苗池继续附苗，稚贝附着后要加大换水量和投饵量，当稚贝长至0810MM左右时，即可出库下海暂养；0016六倍性检测0017用压片法，将胚胎放入001秋水仙素中处理1小时，处理时气温为1822，然后放入0075MOL/L的卡诺氏固定液中低渗30分钟，更换1次固定液，然后放入体积分数为50冰醋酸中保存，4050玻片上滴片、风干，体积分数为4的GIMSA染液染色10分钟，冲洗、凉干镜检。0018本发明具有如下优点0019本发明在已有四倍体牡蛎亲本的基础上发明一整套切合生产需要的三倍体单体牡蛎规模化培育的技术方法，将三倍体技术与单体牡蛎苗种培

14、育技术相结合培育牡蛎新品种，同时可以规模化生产。三倍体单体牡蛎具有比现有牡蛎品种生长速度快、个体大、多糖含量高、品质和口味较好等特点，因为其性腺不发育或发育很小，不存在繁殖期入量排出精、卵影响牡蛎品质的情况，所以可以常年进行定单式的养殖和收获，使用该方法培育的单体牡蛎较现有牡蛎壳形规则、美观、壳深肉肥等明显的优点。说明书CN102100197ACN102100200A3/4页6具体实施方式0020一亲贝0021准备平均壳高为131CM的二倍体牡蛎系种贝300个和平均壳高为46CM的四倍体牡蛎30个，在室内经升温促熟培养；在牡蛎繁殖季节之前，使亲贝在室内进行升温促熟培养，经过一段时间的培育，亲贝

15、性腺发育成熟，通过镜检卵子和精子发育情况决定是否解剖取卵，进行三倍体处理，加大投饵量，混合投喂新鲜的多品种饵料，满足亲贝性腺发育对营养物质的需要，为三倍体育苗提供成熟好的种贝，接着对卵子进行同步性发育处理，采用洁净的过滤海水浸泡的方法，通过2040分钟的浸泡培养，促进卵子生发泡的破裂，促进卵子的成熟；0022二获取精卵0023通过解剖法获取精卵，将成熟的二倍体牡蛎系亲贝洗刷干净后，然后用高猛酸钾消毒1015分钟后，剖去右壳，露出软体部，在显微镜下鉴别雌雄，并检查精卵的成熟状况，挑出发育好的个体备用，雌雄严格分开放置，避免精子污染，将成熟的卵巢逐个剥离并破碎，分别用80目、250目的筛绢进行过滤

16、，去除大的组织碎片，再用500目筛绢滤洗，去除组织液后在清洗干净的卵子中加入过滤海水，在23下备用，四倍体雄贝精子剥离后用300目筛绢过滤后，制成精液备用；0024三三倍体牡蛎的生产0025利用成熟的二倍体卵子与四倍体精子受精后注入新鲜海水中孵化、培育，控制受精卵密度在30005000万个/L；0026四幼虫培育0027受精卵在23下，经22个小时发育至D型幼虫，进入幼虫培育期后，将幼虫培育密度控制在为610个/ML，幼虫培育水温控制在2527之间，PH82左右，培育海水用浓度为5MOL/L的EDTA二钠螯合重金属离子，用0510MOL/L浓度的氯霉素预防病害，附苗时黑布遮光，将幼虫培养密度控

17、制在前期壳长200M以内1015个/ML，中期壳长200280M810个/ML，后期壳长280M以上46个/ML，24小时连续充气，D形幼虫入池12天内采用逐日加水，第3天用300目筛绢网箱换水，幼虫前期用微绿球藻和金藻投喂，后期增加扁藻和角毛藻，投饵量根据水中幼虫密度、幼虫胃饱满度和水中剩饵多少灵活掌握，以少量多次为好，每天一般23次；0028五采苗及单体牡蛎生产0029当幼虫壳长范围达到260340M时，眼点出现，群体出现眼点时的壳长为280320M，当眼点幼虫达到30左右时，应及时投放附苗器，附着基为牡蛎壳串，每串100片，用6080丝聚乙烯绳将贝壳串在一起，经曝晒、浸泡、体积分数为20

18、106的漂白粉消毒，清洗后使用，将贝壳串均匀地预先吊挂在培育池内，用80目筛绢网筛取网上眼点幼虫移入贝壳池中附苗，培育池上方用黑布遮盖，以保证贝壳正反面都能均匀地附上贝苗，当贝壳附苗量达到20个/片以上时，即可将幼虫浓集到另一附苗池继续附苗，稚贝附着后要加大换水量和投饵量，当稚贝长至0810MM左右时，即可出库下海暂养；0030六倍性检测0031用压片法，将胚胎放入001秋水仙素中处理1小时，处理时气温为1822，然后放入0075MOL/L的卡诺氏固定液中低渗30分钟，更换1次固定液，然后放入体积分数为说明书CN102100197ACN102100200A4/4页750冰醋酸中保存，4050玻片上滴片、风干，体积分数为4的GIMSA染液染色10分钟，冲洗、凉干镜检。说明书CN102100197A