白介素13抗体组合物.pdf

1、10申请公布号CN102060925A43申请公布日20110518CN102060925ACN102060925A21申请号201010551201222申请日200609290519923720050930GB60/721,97420050930US200680044973920060929C07K16/18200601A61K39/39520060171申请人医学免疫有限公司地址英国剑桥72发明人布伦丹C菲什珍妮特E兰斯通卡伦班尼斯特克莱尔L霍普74专利代理机构北京市柳沈律师事务所11105代理人张红春54发明名称白介素13抗体组合物57摘要本发明涉及白介素13抗体组合物，更具体地，本发

2、明涉及一种药物组合物，其包含白介素13抗体，更具体的说是白介素13单克隆抗体，尤其是人白介素13单克隆抗体。本发明还涉及纯化所述抗体的方法和使用所述组合物来治疗白介素13相关病症诸如哮喘、特应性皮炎、变应性鼻炎、纤维化、慢性阻塞性肺病、硬皮病、炎性肠病和何杰金氏淋巴瘤，特别是哮喘的用途。30优先权数据62分案原申请数据51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书29页附图23页CN102060930A1/1页21用于纯化IL13抗体的方法，其包括一个或多个层析分离步骤，其中每一个所述分离步骤包括用含有一种或多种制药学可接受赋形剂并用乙酸盐缓冲剂缓冲至PH3

3、570的洗脱缓冲液进行洗脱。2依照权利要求1的方法，其中所述层析分离步骤选自亲和层析和离子交换层析。3依照权利要求2的方法，其中所述层析分离是通过蛋白A亲和层析接着阳离子交换层析再接着阴离子交换层析而进行的。4依照权利要求13任一项的方法，其中所述一种或多种制药学可接受赋形剂包括无机盐。5依照权利要求4的方法，其中所述无机盐是氯化钠，所述氯化钠以10200MM的量存在于所述洗脱缓冲液中。6依照权利要求15任一项的方法，其中所述乙酸盐缓冲剂是乙酸钠，所述乙酸钠以1100MM的量存在于所述洗脱缓冲液中。7依照权利要求15任一项的方法，其中所述洗脱缓冲液含有50MM乙酸钠和85MM氯化钠，并缓冲至P

4、H5501。权利要求书CN102060925ACN102060930A1/29页3白介素13抗体组合物0001本申请是申请日为2006年09月29日、申请号为2006800449739国际申请号为PCT/GB2006/003650、发明名称为“白介素13抗体组合物”的发明申请的分案申请。0002本发明涉及一种药物组合物，其包含白介素13抗体，更具体的说是白介素13单克隆抗体，尤其是人白介素13单克隆抗体。本发明还涉及纯化所述抗体的方法和使用所述组合物来治疗白介素13相关病症诸如哮喘的用途。0003白介素IL13是114个氨基酸的细胞因子，未修饰时的分子量是大约12KDA。IL13与IL4最密切

5、相关，二者在氨基酸水平具有30的序列同源性。人IL13基因位于染色体5Q31，与IL4基因邻近MCKENZIE，ANETAL，JIMMUNOL，199315012，54365444；MINTY，AETAL，NATURE，19933626417，24850。0004尽管最初将IL13鉴定为TH2CD4淋巴细胞衍生细胞因子，TH1CD4T细胞、CD8T淋巴细胞、NK细胞、及非T细胞群诸如肥大细胞、嗜碱细胞、嗜曙红细胞、巨噬细胞、单核细胞和气道平滑肌细胞也生成IL13。0005已经将IL13与许多疾病联系起来，具体有由炎性应答引起的疾病。例如，对未曾接受治疗的未被致敏的NONSENSITISED啮齿

6、类动物的气道施用重组IL13显示出引起哮喘表型的许多方面，包括气道炎症、粘液生成和气道高应答性AHRWILLSKARP，METAL，SCIENCE，19982825397，22582261；GRUNIG，GETAL，SCIENCE，19982825397，22612263；VENKAYYA，R，ETAL，AMJRESPIRCELLMOLBIOL，2002262，202208；MORSE，BETAL，AMJPHYSIOLLUNGCELLMOLPHYSIOL，20022821，L4449。在肺中特异性过表达IL13的转基因小鼠中观察到类似的表型。在该模型中，更长时间的暴露于IL13还导致纤维化ZH

7、U，ZETAL，JCLININVEST，19991036，779788。0006已经将IL13基因的许多遗传多态性与变应性疾病联系起来。具体而言，已经将IL13基因第130位精氨酸残基被谷氨酰胺替代的的变体Q130R与支气管哮喘、特应性皮炎ATOPICDERMATITIS和血清IGE水平升高联系起来HEINZMANN，AETAL，HUMMOLGENET，200094，549559；HOWARD，TDETAL，AMJHUMGENET，2002701，230236；KAUPPI，PETAL，GENOMICS，20017712，3542；GRAVES，PEETAL，JALLERGYCLINIMMUN

8、OL，20001053，506513。有些小组还将这种IL13变体称为Q110R变体第110位精氨酸残基用谷氨酰胺替代，因为它们从氨基酸计数中排除了20个氨基酸的信号序列。0007还已经将IL13生成与变应性哮喘联系起来VANDERPOUWKRAAN，TCETAL，GENESIMMUN，199911，6165，而且在患有特应性鼻炎ATOPICRHINITIS干草热HAYFEVER、变应性皮炎湿疹和慢性鼻窦炎的人类受试者中测量到升高的IL13水平。0008在哮喘外，已经将IL13与其它纤维变性疾患联系起来。已经在患有系统性硬化的患者的血清中和患有其它形式肺纤维化的患者的支气管肺泡灌洗BAL样品中

9、测量到升高的IL13水平，达到比IL4高1000倍HASEGAWA，METAL，JRHEUMATOL，1997242，328332；HANCOCK，AETAL，AMJRESPIRCELLMOLBIOL，1998181，6065。说明书CN102060925ACN102060930A2/29页40009已经证明了IL13在小鼠肺中的过表达引起肺气肿、粘液生成增加和炎症，这些症状反映了人慢性阻塞性肺病COPD的各个方面ZHENG，TETAL，JCLININVEST，20001069，10811093。0010有人提出IL13可能在炎性肠病的发病机理中发挥作用HELLER，FETAL，IMMUNIT

10、Y，2002175，62938，而且在有些何杰金氏病HODGKINSDISEASE患者的血清中检测到与正常对照相比升高的IL13水平FIUMARA，PETAL，BLOOD，2001989，28772878。0011还认为IL13抑制剂在治疗上可用于预防肿瘤复发或转移TERABE，METAL，NATIMMUNOL，200016，515520。在动物模型中对IL13的抑制还显示出增强抗病毒疫苗，而且对于HIV和其它感染性疾病的治疗可能是有益的AHLCRS，JDETAL，PROCNATLACADSCIUSA，20029920，1302013025。0012致力于IL13抑制的抗体法已有记载。例如，W

11、O2005/007699CAMBRIDGEANTIBODYTECHNOLOGYLIMITED记载了一系列显示出中和IL13活性的人抗IL13抗体分子，而且宣称它们可在治疗IL13相关病症方面可能有用。0013依照本发明的第一个方面，提供了一种药用组合物，其包含IL13抗体及一种或多种制药学可接受赋形剂，并用乙酸盐缓冲剂缓冲至PH4560。0014普遍知道抗体纯化规程通常需要多种分离技术，诸如层析分离例如蛋白A层析、离子交换层析、诸如此类。这种分离方式的后果是需要使用多种不同缓冲液。例如，WO2004/076485中所记载的抗体纯化规程需要50MM甘氨酸/甘氨酸盐PH80用于蛋白A层析、50MM

12、TRISHCLPH80和20MM磷酸钠PH65用于QSEPHAROSE层析、及25MMTRISHCLPH86用于DEAESEPHAROSE层析。0015相反，本发明只需要使用一种以固定浓度和预定PH存在于本发明组合物中的乙酸盐缓冲剂，其优点在于这种缓冲剂存在于所有IL13抗体纯化步骤中。如此，这种缓冲剂不仅用于纯化过程开始时，而且用于整个纯化过程，因此缩短了操作时间、降低了成本并提高了产量。0016应当领会，“抗体”的术语包括免疫球蛋白，无论是天然的或者是部分或完全合成的。该术语还覆盖任何包含抗原结合结构域的多肽或蛋白质。0017包含抗原结合结构域的抗体片段有诸如FAB、SCFV、FV、DAB

13、、FD和双抗体等分子。0018有可能采用单克隆抗体和其它抗体，并且采用重组DNA技术来生成保留最初抗体特异性的其它抗体或嵌合分子。这样的技术可涉及将编码免疫球蛋白可变区或互补决定区CDR的DNA导入不同免疫球蛋白的恒定区或恒定区加框架区。参见例如EPA184187；GB2188638A或EPA239400；及大量后续文献。0019或者，可以生成携带CDR衍生序列的新VH或VL区，即通过一种或多种选定VH和/或VL基因的随机诱变而在整个可变域中生成突变。GRAMETAL，PNASUSA，199289，35763580记载了这样一种技术，他们采用错误倾向PCR。可使用的另一种方法是针对VH和VL基

14、因CDR区的诱变。BARBASETAL，PNASUSA199491，38093813和SCHIERETAL，JMOLBIOL1996263，551567披露这样的技术。0020因为可以以多种方法修饰抗体，术语“抗体”应解释为覆盖任何包含具有所需特异性的抗原结合结构域的特定结合成员或物质。如此，该术语覆盖抗体片段和衍生物，包括任说明书CN102060925ACN102060930A3/29页5何包含免疫球蛋白结合结构域的多肽，无论是天然的或者是完全或部分合成的。因此还包括包含免疫球蛋白结合结构域或等同物且其与另一多肽相融合的嵌合分子。PA0120694和EPA0125023及大量后续文献中披露了

15、嵌合抗体的克隆和表达。0021抗体工程领域可利用的其它技术使之有可能分离人抗体和人源化抗体。例如，可以如KONTERMANNETAL，2001；ANTIBODYENGINEERING，SPRINGERLABORATORYMANUALS所述来生成人杂交瘤。许多出版物，诸如KONTERMANNETALSUPRAANDW092/01047中详细记载了为生成特定结合成员而建立的另一种技术，噬菌体展示。小鼠抗体基因遭到灭活并用人抗体基因功能性替换同时小鼠免疫系统的其它成分保持完整的转基因小鼠可用于分离针对人抗原的人抗体。核糖体展示，一种将突变导入已知基因序列的无细胞翻译技术也可用于生成和/或优化特定结合

16、成员HANESANDPLCKTHUNPNASUSA，199494，49374942；HEANDTAUSSIGNUCLEICACIDSRES199725，51325134；SCHAFFITZELETAL，JIMMUNOLMETHODS，1999231，119135；HEETAL，JIMMUNOLMETHODS，1999231，105117；HEETAL，METHODSMOLBIOL2004248，177189。0022通过合成寡核苷酸并在合适的表达载体中进行装配，再用所得基因进行表达，可以制备合成的抗体分子，参见例如KNAPPIKETAL，JMOLBIOL2000296，5786；KREBSET

17、AL，JOURNALOFIMMUNOLOGICALMETHODS2001254，6784。0023已经显示了完整抗体的片段可发挥结合抗原的功能。结合片段的例子有I由VL、VH、CL和CH1结构域组成的FAB片段；II由VH和CH1结构域组成的FD片段；III由单一抗体的VL和VH结构域组成的FV片段；IV由VH或VL结构域组成的DAB片段WARD，ESETAL，NATURE，1989341，544546；MCCAFFERTYETAL，NATURE，1990348，552554；HOLTETAL，TRENDSBIOTECHNOL20032111，484490；V分离的CDR区；VIFAB2片段，

18、包含两个相连FAB片段的二价片段；VII单链FV分子SCFV，其中VH结构域与VL结构域通过肽接头相连接，该肽接头容许这两个结构域相结合而形成抗原结合位点BIRDETAL，SCIENCE，1988242，423426；HUSTONETAL，PNASUSA，198885，58795883；VIII双特异性单链FV二聚体PCT/US92/09965；和IX“双抗体DIABODY”，通过基因融合构建的多价或多特异性片段WO94/13804；PHOLLIGERETAL，PROCNATLACADSCIUSA，199390，64446448。FV、SCFV或双抗体分子可以通过掺入连接VH与VL结构域的二硫

19、键而加以稳定YREITERETAL，NATUREBIOTECH，199614，12391245。还可以生成包含SCFV相连的CH3结构域的微型抗体MINIBODYSHUETAL，CANCERRES，199656，30553061。0024若使用双特异性抗体，则可以是常规双特异性抗体，其可以以多种方式来制备HOLLIGERANDWINTERCURRENTOPINIONBIOTECHNOL19934，446449，例如以化学方法或从杂合杂交瘤制备，或者可以是任何上文所述双特异性抗体片段。双特异性抗体的例子包括那些BITE技术的双特异性抗体，其中可以使用两个具有不同特异性的抗体的结合结构域并经柔性短

20、接头直接相连。这在一条短多肽链上联合两个/种抗体。双抗体和SCFV可以构建成不含FC区而只使用可变域，从而有可能降低抗独特型反应的效应。0025与双特异性完整抗体不同，双特异性抗体也可能是特别有用的，因为它们易于构建并在大肠杆菌中表达。具有适宜结合特异性的双抗体和许多其它多肽诸如抗体片段易于通过噬菌体展示WO94/13804从文库中选择。若双抗体的一条臂保持不变，例如具说明书CN102060925ACN102060930A4/29页6有针对IL13的特异性，则可以将文库构建成另一条臂进行变化并选择具有适宜特异性的抗体。双特异性完整抗体可以通过隆起入空腔KNOBSINTOHOLES工程来构建RI

21、DGEWAYETAL，PROTEINENG，19969，616621。0026应当领会，“IL13抗体”术语包括根据WO2005/007699实施例210和25所列测定法，能够在低于500NM的浓度中和天然存在IL13的完整抗体或抗体片段。0027优选的是，IL13抗体以等于或优于由BAK502G9VH结构域WO2005/007699中的SEQIDNO15和BAK502G9VL结构域WO2005/007699中的SEQIDNO16形成的IL13抗原结合位点的效力中和天然存在的IL13。0028优选的是，IL13抗体是单克隆IL13抗体，更优选人IL13单克隆抗体。0029特别优选的IL13抗体

22、是选自WO2003/035847、WO2003/086451、WO2005/007699或WO2005/081873中所述的IL13抗体。0030例如，在一个特别优选的实施方案中，IL13抗体包含BAK278D6HCDR13和LCDR13分别是WO2005/007699中的SEQIDNOS16。将具有BAK278D6的CDR组的CDR，BAK278D6HCDR或BAK278D6LCDR，或其一处或多处经过替代的CDR都称为BAK278D6谱系的。0031在另一个特别优选的实施方案中，IL13抗体包含BAK502G9HCDR13和LCDR13分别是WO2005/007699中的SEQIDNOS7

23、12。0032在另一个特别优选的实施方案中，IL13抗体包含BAK1111D10HCDR13和LCDR13分别是WO2005/007699中的SEQIDNOS9196。0033在另一个特别优选的实施方案中，IL13抗体包含BAK1167F2HCDR13和LCDR13分别是WO2005/007699中的SEQIDNOS6166。0034在另一个特别优选的实施方案中，IL13抗体包含BAK1183H4HCDR13和LCDR13分别是WO2005/007699中的SEQIDNOS97102。0035可以在抗体框架区或其它蛋白支架例如纤连蛋白或细胞色素B中提供相关CDR组KOIDEETAL，JMOLB

24、IOL1998284，11411151；NYGRENETAL，CURRENTOPINIONINSTRUCTURALBIOLOGY，19977，463469。优选采用抗体框架区，而且在采用它们时，它们优选是种系的，更优选的是，重链的抗体框架区可以是来自VH1家族的DP14。轻链的优选框架区可以是33H。对于BAK502G9CDR组，优选的是，VHFR13的抗体框架区分别是WO2005/007699中的SEQIDNOS2729，而VLFR13的抗体框架区分别是WO2005/007699中的SEQIDNOS3032。在一个优选的实施方案中，所提供的VH结构域具有WO2005/007699中SEQID

25、NO15的氨基酸序列，这称为“BAK502G9VH结构域”。在另一个高度优选的实施方案中，所提供的VL结构域具有WO2005/007699中SEQIDNO16的氨基酸序列，这称为“BAK502G9VL结构域”。0036在一个优选的实施方案中，IL13抗体与猕猴CYNOMOLOGOUSIL13和/或IL13变体Q130R发生交叉反应。0037优选的是，IL13抗体以1200MG/ML、更优选50100MG/ML、尤其是50MG/ML的量存在于药物组合物中。0038优选的是，将药物组合物缓冲至PH5257，最优选5501。选择这样一种PH赋予药物组合物以显著稳定性。在此范围内控制PH的备选缓冲剂的

26、例子包括琥珀酸盐、葡说明书CN102060925ACN102060930A5/29页7萄糖酸盐、组氨酸、柠檬酸盐、磷酸盐、戊二酸盐、卡可基酸盐、马来酸氢钠、三羟甲基氨基甲烷TRIS、2N吗啉代乙磺酸MES、咪唑和其它有机酸缓冲剂。0039优选的是，缓冲剂是乙酸盐缓冲剂，更优选乙酸钠。0040优选的是，乙酸盐缓冲剂以1100MM、更优选3070MM、尤其是50MM的量存在于药物组合物中。0041应当领会，提及的“制药学可接受赋形剂”包括药物组合物中常规使用的任何赋形剂。这样的赋形剂通常可以包括一种或多种表面活性剂、无机或有机盐、稳定剂、稀释剂、增溶剂、还原剂、抗氧化剂、螯合剂、防腐剂、诸如此类。

27、0042典型的表面活性剂的例子包括非离子表面活性剂HLB618，诸如山梨聚糖脂肪酸酯SORBITANFATTYACIDESTER例如山梨聚糖单辛酸酯、山梨聚糖单月桂酸酯、山梨聚糖单棕榈酸酯、甘油脂肪酸酯例如甘油单辛酸酯、甘油单肉豆蔻酸酯、甘油单硬脂酸酯、聚甘油脂肪酸酯例如聚甘油十单硬脂酸酯、聚甘油十双硬脂酸酯、聚甘油十单亚油酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯例如聚氧乙烯山梨聚糖单月桂酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖单硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖单棕榈酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖三油酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖三硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯例如聚氧乙烯山梨醇四硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨醇四油酸酯、

28、聚氧乙烯甘油脂肪酸酯例如聚氧乙烯甘油基单硬脂酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯例如聚乙二醇双硬脂酸酯、聚氧乙烯烷基醚例如聚氧乙烯月桂醚、聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚例如聚氧乙烯聚氧丙二醇醚、聚氧乙烯聚氧丙烯丙基醚、聚氧乙烯聚氧丙烯鲸蜡基醚、聚氧乙烯烷基苯基醚例如聚氧乙烯壬基苯基醚、聚氧乙烯氢化蓖麻油例如聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯蜂蜡BEESWAX衍生物例如聚氧乙烯山梨醇蜂蜡、聚氧乙烯羊毛脂衍生物例如聚氧乙烯羊毛脂、和聚氧乙烯脂肪酸酰胺例如聚氧乙烯硬脂酸酰胺；阴离子表面活性剂，诸如C10C18烷基硫酸酯盐例如十六烷基硫酸钠、十二烷基硫酸钠、油酰硫酸钠OLEYLSULFATE、具有平均24摩尔环氧

29、乙烷的聚氧乙烯C10C18烷基醚硫酸酯盐例如聚氧乙烯十二烷基硫酸钠、和C8C18烷基磺基琥珀酸酯盐例如十二烷基磺基琥珀酸酯钠；和天然表面活性剂，诸如卵磷脂、甘油磷脂、鞘磷脂SPHINGOPHOSPHOLIPID例如鞘磷脂SPHINGOMYELIN、和C12C18脂肪酸的蔗糖酯。0043优选的是，表面活性剂选自聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯。特别优选的是，表面活性剂是聚山梨醇酯20、21、40、60、65、80、81和85，最优选聚山梨醇酯20和80，尤其聚山梨醇酯80。0044优选的是，表面活性剂以000101W/W、更优选0005005W/W、尤其是001W/W的量存在于药物组合物中。0045典型

30、的无机盐的例子包括氯化钠、氯化钾、氯化钙、磷酸钠、硫酸钠、硫酸铵、磷酸钾和碳酸氢钠，或者任何其它钠盐、钾盐或钙盐。优选的是，无机盐是氯化钠。0046优选的是，无机盐以10200MM、更优选60130MM、尤其是85MM的量存在于药物组合物中。0047还原剂的例子包括N乙酰基半胱氨酸、N乙酰基高半胱氨酸、硫辛酸、硫代二甘醇、硫代乙醇胺、硫代甘油、硫代山梨醇、硫代乙醇酸及其盐、硫代硫酸钠、谷胱甘肽、和C1C7硫代链烷酸。说明书CN102060925ACN102060930A6/29页80048抗氧化剂的例子包括异抗坏血酸ERYTHORBICACID、二丁基羟基甲苯、丁基羟基苯甲醚、生育酚、乙酸生育

31、酚、L抗坏血酸及其盐、L抗坏血酸棕榈酸酯、L抗坏血酸硬脂酸酯、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、没食子酸三戊酯、和没食子酸丙酯。0049螯合剂的例子包括乙二胺四乙酸EDTA二钠、焦磷酸钠、和偏磷酸钠。0050稳定剂的例子包括肌酸酐、选自组氨酸、丙氨酸、谷氨酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、精氨酸、赖氨酸和苏氨酸的氨基酸、选自蔗糖、海藻糖、山梨醇、木糖醇和甘露糖的碳水化合物、选自聚乙二醇PEG；例如PEG3350或PEG4000或聚氧乙烯山梨聚糖脂肪酸酯例如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80的表面活性剂、或其任意组合。0051在一个优选实施方案中，稳定剂包含上文定义的单一的碳水

32、化合物例如海藻糖。0052在另一个优选实施方案中，稳定剂包含氨基酸及碳水化合物例如海藻糖及丙氨酸，或者海藻糖、丙氨酸及甘氨酸。0053在又一个优选实施方案中，稳定剂包含氨基酸及碳水化合物和表面活性剂例如海藻糖、丙氨酸及PEG3350，或者海藻糖、脯氨酸及PEG3350，或者海藻糖、丙氨酸及聚山梨醇酯80，或者海藻糖、脯氨酸及聚山梨醇酯80，或者海藻糖、丙氨酸、甘氨酸及PEG3350，或者海藻糖、丙氨酸、甘氨酸及聚山梨醇酯80。0054在又一个优选实施方案中，稳定剂包含氨基酸及表面活性剂例如丙氨酸及PEG3350，或者丙氨酸、甘氨酸及PEG3350。0055在又一个优选实施方案中，稳定剂包含碳水

33、化合物及表面活性剂例如海藻糖及PEG3350，或者海藻糖及聚山梨醇酯80。0056防腐剂的例子包括氯化十八烷基二甲基苄基铵OCTADECYLDIMETHYLBENZYLAMMONIUMCHLORIDE、氯己双胺HEXAMETHONIUMCHLORIDE、苯扎氯铵BENZALKONIUMCHLORIDE氯化烷基苄基二甲基铵混合物，其中烷基是长链化合物、苄索氯铵BENZETHONIUMCHLORIDE，芳香醇诸如酚、丁醇和苯甲醇，烷基对羟基苯甲酸酯ALKYLPARABEN诸如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯，邻苯二酚、间苯二酚、环己醇、3戊醇、和间甲酚。0057在本发明的一个优选实施方案中，药物组合物包含I

34、L13抗体、表面活性剂和无机盐，并用乙酸盐缓冲剂缓冲至PH5501。0058在本发明的另一个优选实施方案中，药物组合物包含IL13抗体、氯化钠和聚山梨醇酯80，并用乙酸钠缓冲剂缓冲至PH5501。0059在本发明的又一个优选实施方案中，药物组合物包含50MG/MLIL13抗体、85MM氯化钠和001W/W聚山梨醇酯80，并用50MM乙酸钠缓冲剂缓冲至PH5501。0060依照本发明的第二个方面，提供了用于纯化IL13抗体的方法，其包括一个或多个层析分离步骤，其中每个分离步骤包括用包含一种或多种制药学可接受赋形剂并用乙酸盐缓冲剂缓冲至PH3570的洗脱缓冲液进行洗脱。0061优选的是，一个或多个

35、层析分离步骤选自亲和层析例如蛋白A或蛋白G亲和层析、离子交换层析例如阳离子和阴离子交换层析、疏水相互作用层析例如苯基层析、羟磷灰石层析、大小排阻层析、固定化金属亲和层析、亲水相互作用层析、亲硫吸附层析、优球蛋白吸附层析、染料配体层析、或固定化硼酸盐层析。最优选的是，层析分离通过蛋说明书CN102060925ACN102060930A7/29页9白A亲和层析，之后是阳离子交换层析例如使用SPSEPHAROSE基质，再之后是阴离子交换层析例如使用QSEPHAROSE基质来进行。0062优选的是，所述一种或多种制药学可接受赋形剂包含无机盐，诸如氯化钠。0063优选的是，无机盐以10200MM、更优选

36、60130MM、尤其是85MM的量存在于洗脱缓冲液中。0064控制PH在3570范围内的备选缓冲剂的例子包括琥珀酸盐、葡萄糖酸盐、组氨酸、柠檬酸盐、磷酸盐和其它有机酸缓冲剂。0065优选的是，缓冲剂是乙酸盐缓冲剂，更优选乙酸钠缓冲剂。0066优选的是，乙酸盐缓冲液以1100MM、更优选3070MM、尤其是50MM的量存在于洗脱缓冲液中。0067最优选的是，洗脱缓冲液包含50MM乙酸钠和85MM氯化钠，并缓冲至PH5501。0068可以通过在适宜条件下培养包含下述核酸的重组宿主细胞来表达编码任何本发明IL13抗体例如CDR或CDR组或VH结构域或VL结构域或抗原结合位点或抗体分子，例如SCFV或

37、IGG4，像所提供的那样的核酸。在通过表达而生成后，可以使用任何合适技术来分离和/或纯化VH或VL结构域或者特定结合成员，然后根据需要使用。0069所提供的特定结合成员、VH和/或VL结构域、及编码核酸分子和载体可以分离和/或纯化自例如它们的天然环境，它们处于基本纯的或同质的形式，或者在核酸的情况中不含或基本上不含具有所需功能的多肽的编码序列以外的核酸或基因源。核酸可以包含DNA或RNA，而且可以整个或部分是合成的。0070本文中在提及核苷酸序列时涵盖具有具体序列的DNA分子，且涵盖具有具体序列、其中用U替代T的RNA分子，除非另有说明。0071用于在多种不同宿主细胞中克隆和表达多肽的系统是众

38、所周知的。合适的宿主细胞包括细菌、哺乳动物细胞、植物细胞、酵母、杆状病毒系统、及转基因植物和动物。0072本领域可用于表达异源多肽的哺乳动物细胞系包括中国仓鼠卵巢CHO细胞、HELA细胞、幼仓鼠肾细胞、NS0小鼠黑素瘤细胞、YB2/0大鼠骨髓瘤细胞、人胚肾细胞、人胚视网膜细胞等。0073优选的是，所述哺乳动物细胞系是骨髓瘤细胞培养物，诸如例如NS0细胞|GALFREANDMILSTEIN，METHODSENZYMOLOGY，1981733。骨髓瘤细胞有浆细胞瘤细胞，即淋巴样细胞谱系的细胞。一种例示性的NS0细胞系有例如细胞系ECACCNO85110503，可以从供应用微生物学和研究之用的欧洲细

39、胞培养物收藏中心EUROPEANCOLLECTIONOFCELLCULTURESECACC，CENTREFORAPPLIEDMICROBIOLOGYRESEARCH，SALISBURY，WILTSHIRE，SP40JG，UNITEDKINGDOM免费获得。已发现NS0能够产生极高产量的产物，特别是在用于生成重组抗体时。0074另一种优选的哺乳动物细胞系是中国仓鼠卵巢CHO细胞。它可以是二氢叶酸还原酶DHFR缺陷的，因而其生长依赖于胸苷和次黄嘌呤PNAS，1990，7742164220。用抗体基因和DHFR基因转染亲本DHFRCHO细胞系，从而能够选择具有DHFR阳性表型的CHO细胞转化体。通过

40、在缺少胸苷和次黄嘌呤的培养基上培养集落来进行选择，胸苷和次黄嘌呤的缺乏阻止了未转化细胞的生长，而转化细胞恢复了叶酸途径，从而规避了选择系统。由于两种转染基因的共整合，这些转化体通常表达低水平的基因产物。可以通过使用甲氨蝶说明书CN102060925ACN102060930A8/29页10呤MTX的扩增来提高抗体基因的表达水平。这种药物是DHFR酶的直接抑制剂，从而能够分离扩增其DHFR基因拷贝数并足以在这些条件下存活的抗性集落。由于DHFF与抗体基因在最初的转化体中最密切相连，所以通常存在相伴扩增，从而提高所需抗体基因的表达。0075与CHO或骨髓瘤细胞一起使用的另一种选择系统是WO87/04

41、462中记载的谷氨酸合成酶GS扩增系统。该系统牵涉用编码GS酶的基因和所需抗体基因转染细胞。然后选择在不含谷氨酰胺的培养基中生长的细胞。然后对所选择的这些克隆用甲硫氨酸砜亚胺METHIONINESULPHOXIMINE，MSX抑制GS酶。细胞为了存活将扩增GS基因，相伴扩增编码抗体的基因。0076本领域已完全建立了抗体和抗体片段在原核细胞诸如大肠杆菌中的表达。综述参见例如PLUCKTHUNA，BIO/TECHNOLOGY19919545551。本领域技术人员还可利用真核细胞培养物中的表达作为生成例如特定结合成员的选项|CHADD，HEANDCHAMOW，SM，CURRENTOPINIONINB

42、IOTECHNOLOGY200112188194；ANDERSEN，DCANDKRUMMEN，L，CURRENTOPINIONINBIOTECHNOLOGY200213117；LARRICK，JWANDTHOMAS，DW，CURRENTOPINIONINBIOTECHNOLOGY200112411418。0077可以选择或构建合适的载体，其包含适宜的调控序列，包括启动子序列、终止子序列、聚腺苷酸化序列、增强子序列、标志基因、和需要的其它序列。根据需要，载体可以是质粒、病毒例如噬菌体、或噬菌粒。更多细节参见例如MOLECULARCLONINGALABORATORYMANUAL3RDEDITION

43、，SAMBROOKANDRUSSELL，2001COLDSPRINGHARBORLABORATORYPRESS。用于操作核酸的许多已知技术和方案，例如制备核酸构建物、诱变、测序、将DNA导入细胞、表达基因、和分析蛋白质，详细描述于CURRENTPROTOCOLSINMOLECULARBIOLOGY，2NDEDITION，AUSUBELETALEDS，JOHNWILEYSONS，1988；SHORTPROTOCOLSINMOLECULARBIOLOGYACOMPENDIUMOFMETHODSFROMCURRENTPROTOCOLSINMOLECULARBIOLOGY，AUSUBELETALEDS

44、，JOHNWILEYSONS，4THEDITION1999。将SAMBROOK等人和AUSUBEL等人的公开内容收入本文作为参考。0078将核酸导入宿主细胞可采用任何可利用的技术。对于真核细胞，合适的技术可包括磷酸钙转染、DEAE右旋糖苷、电穿孔、脂质体介导的转染、及使用逆转录病毒或其它病毒例如痘苗病毒的转导，对于昆虫细胞，使用杆状病毒。将核酸导入宿主细胞，特别是真核细胞可使用基于病毒或质粒的系统。质粒系统可作为附加体EPISOMALLY来操作，或者可掺入宿主细胞或掺入人工染色体CSONKA，EETAL，JOURNALOFCELLSCIENCE，20011332073216；VANDERBYL

45、，SETAL，MOLECULARTHERAPY，20025510。掺入可以是单个或多个基因座处一个或多个拷贝的随机或靶向整合。对于细菌细胞，合适的技术可包括氯化钙转化、电穿孔、及使用噬菌体的感染。0079导入之后可通过例如在适于表达基因的条件下培养宿主细胞来引起或容许核酸表达。0080在一个实施方案中，本发明的核酸整合入宿主细胞的基因组例如染色体。0081依照标准技术，可通过包含促进与基因组重组的序列来促进整合。0082依照本发明的第三方面，提供了本文定义的药物抗体组合物在制备用于治疗IL13相关病症的药物中的用途。0083优选的是，所述IL13相关病症选自哮喘、特应性皮炎、变应性鼻炎、纤维化

46、说明书CN102060925ACN102060930A9/29页11FIBROSIS、慢性阻塞性肺病、硬皮病、炎性肠病INFLAMMATORYBOWELDISEASE和何杰金氏淋巴瘤。本发明的组合物还可用于治疗肿瘤和病毒感染，因为IL13抗体能抑制IL13介导的免疫抑制。最优选的是，IL13相关病症是哮喘。0084本发明进一步提供了治疗或预防IL13相关病症的方法，其包括对患者施用治疗有效量的本文定义的药物抗体组合物。0085本发明进一步提供了本文定义的药物抗体组合物，其用于治疗IL13相关病症。0086本发明的药物组合物可以是液体剂型或在使用前重建的冻干剂型。可以使用冻干剂型的赋形剂，例如糖

47、醇或糖例如甘露醇或葡萄糖。在液体剂型的情况中，本发明的药物组合物通常以具有确定体积的容器的形式提供，包括密封和已灭菌的塑料或玻璃管、安瓿和注射器，以及大体积容器的形式，像瓶子。优选的是，本发明的组合物是液体剂型。0087本发明的药物组合物可以通过口服、通过注射例如皮下、静脉内、腹膜内或肌肉内、通过吸入、或局部的例如眼内、鼻内、直肠、伤口、皮肤来施用。施用路径可以根据治疗的物理化学特征、关于疾病的特殊考虑、或者优化功效或降低副作用的要求来决定。0088优选的是，本发明的组合物通过皮下注射来施用。设想了治疗不限于临床使用。因此，使用无针头装置的皮下注射也可以是优选的。0089依照本发明，可将所提供

48、的组合物施用于个人。施用优选是“治疗有效量”的，这足以显示出对患者的益处。所述益处可以至少是至少一种症状的缓解。所施用的实际量、及施用的速率和时程取决于所治疗病症的本质和严重程度。治疗的处方，例如关于剂量的决定等，在普通开业医师和其它医生的职责之内。抗体的适宜剂量在本领域是众所周知的LEDERMANN，JAETAL，INTJCANCER，199947659664；BAGSHAWE，KDETAL，ANTIBODY，IMMUNOCONJUGATESANDRADIOPHARMACEUTICALS，19914915922。0090精确剂量取决于许多因素，包括待治疗区域的大小和位置、抗体的确切本质例如完

49、整抗体、片段或双抗体、及附着于抗体的任何可检测标记物或其它分子的本质。典型的抗体剂量对于系统应用为100PG10G和用于局部应用为1G100MG的范围内。0091通常，抗体是完整抗体，优选IGG4同种型。成人患者的单次治疗剂量在按比例调整后可用于儿童和婴幼儿，并且对其它抗体形式根据分子量按比例进行调整。可以以每日一次、每周两次、每周一次、或每月一次的间隔重复进行治疗，这由医师决定。在本发明的优选实施方案中，治疗是定期的，而且两次施用之间的间隔为大约2周或更长，优选大约3周或更长，更优选大约4周或更长，或者大约每月一次施用。0092本发明还涉及00931一种药物组合物，其包含IL13抗体及一种或多种制药学可接受赋形剂，并用乙酸盐缓冲剂缓冲至PH4560。00942依照项1的药物组合物，其中所述IL13抗体是人IL13单克隆抗体。00953依照项1或2的药物组合物，其中所述IL13抗体以1200MG/ML的量存在于所述药物组合物中。00964依照前述项任一项的药物组合物，其缓冲至PH5257。00975依照前述项任一项的药物组合物，其包含乙酸钠，所述乙酸钠以1100MM的量存在于所述药物组合物中。00986依照前述项任一项的药物组合物，其中所述制药学可接受赋形剂包括一种或多说明书CN102060925ACN102060930A10/29页12种表面活性